4.

Descripción detallada de los instrumentos

I. Espectrofotómetro de doble haz

En estos aparatos el haz es dividido, e incide tanto en la celda que contiene el

blanco como en la celda que contiene la muestra. El detector compara estas dos
señales continuamente o muchas veces en un segundo y efectúa la lectura
relacionando la lectura de la muestra con la lectura del blanco. De esta manera se
compensan las fluctuaciones que pudiesen existir por: ruido, variación de voltaje,
variación en la intensidad de la fuente luminosa.

El amplio rango de longitud de onda (190 a 1100 nm) y el rango fotométrico

(Abs –0.5 a +3.0) hacen que este espectrofotómetro sea bueno para muchos tipos
diferentes de ensayos que requieren excitación UV / VIS.

Fig 1:Diseño de espectrofotómetros de haz sencillo y de doble haz

5. Cálculos detallados. Tabla de resultados y tratamiento estadístico

I. Solución patrón primario de nitrato (100 ppm NO3-N)

WKNO3 = 0.1805 g
VFIOLA = 250 mL

g
14
0.1805 g molNO3  N 0.02499 g
 
250mL 101.11 g 250mL
molKNO3

250 mL → 0.02499g
1000 mL → x g

X = 0.09996 g/L = 99.9ppm

X ≈ 100ppm

II. Solución patrón intermedia de nitrato (5 ppm NO3-N)

(100 ppm x V1) = (100ml x 5ppm)

V1 = 5 mL de patrón primario

III. Preparación de patrones a partir de la solución 5ppm.

 Patrón 1
CPP X V1 = CPI X V2
5ppm x V1 = 0.1ppm x 50ml

V1 = 1 mL de patrón intermedio

 Patrón 2
CPP X V1 = CPI X V2
5ppm x V1 = 0.2ppm x 50ml

V1 = 2 mL de patrón intermedio

 Patrón 3
CPP X V1 = CPI X V2
5ppm x V1 = 0.3ppm x 50ml

V1 = 3 mL de patrón intermedio

 Patrón 4
CPP X V1 = CPI X V2
5ppm x V1 = 0.4ppm x 50ml
 V1 = 4 mL de patrón intermedio

 Patrón 5
CPP X V1 = CPI X V2
5ppm x V1 = 0.5ppm x 50ml

V1 = 5 mL de patrón intermedio

IV. Curva de calibración

Tabla 1.- Datos de patrones

Soluciones C ppm NO3  N Absorbancia(λmáx=198nm)

Blanco 0 0
Patrón 1 0.1 0.550
Patrón 2 0.2 0.640
Patrón 3 0.3 0.797
Patrón 4 0.4 0.867
Patrón 5 0.5 0.945

Mediante el método de mínimos cuadrados se realiza la curva de calibración se

obtiene la ecuación (1)

A = 1.6666xCppm + 0.2165 (1)

V. Cálculo de la concentración de Nitratos en las muestras

Tabla 2.-Datos de las muestras

Muestra Valícuota (mL) Cppm Absorbancia
(λmáx=198nm)
San Luis 25 0.165 0.491
San Mateo 25 0.181 0.518
Cielo 10 1.005 1.892
Vida 2 0.272 0.670
Alameda 1 0.246 0.627

Muestra de agua San Luis

 Utilizando la gráfica obtenida por mínimos cuadrados

Valícuota = 25 mL

Reemplazando en la Ec.(1)

A = 1.6666xCppm + 0.2165

0.491 = 1.666xCppm + 0.2165

Cppm = 0.1648 Ppm

Hallando la concentracion en la alícuota de 25 mL

CM1 x Valícuota = Cppm x Vfiola

CM1 x 25mL = 0.1648 x 50mL

CM1 = 0.3296 Ppm NO-3-N

Multiplicando por el factor gravimétrico

62molNO3

CM1 = 0.3296 Ppm
NO  N x 14molN 
3

CM1 = 1.4597 Ppm NO-3

 Utilizando el valor registrado en el espectrofotómetro UV-Visible

Valícuota = 25 mL

CM1 x Valícuota = Cespectrofotómetro x Vfiola

CM1 x 25mL = 0.165 x 50mL

CM1 = 0.33 Ppm NO-3-N

Multiplicando por el factor gravimétrico

62molNO3

NO  N x 14molN 
CM1 = 0.33 Ppm 3
 CM1 = 1.46 Ppm NO-3

Se realiza de la misma manera para las demás muestras obteniendo la siguiente

tabla

Tabla 3.- Concentraciones de Nitratos en las muestras

Muestra Cppm gráfica Cppm espectrofotómetro

San Luis 1.4597 1.46
San Mateo 1.6029 1.60
Cielo 22.2691 22.25
Vida 30.1374 30.11
Alameda 54.5597 54.47

11. Bibliografía

 ForbiddenAccess | Biocompare: The Buyer's Guide for Life Scientists. (s.f.).

Recuperado 29 septiembre, 2019, de https://www.biocompare.com/Product-
Reviews/40948-UV-1700-Spectrophotometer-From-Shimadzu/

 Contaminación del agua por nitratos y técnicas para su tratamiento. (s.f.).

Recuperado 30 septiembre, 2019, de https://www.esferadelagua.es/agua-y-
tecnologia/contaminacion-del-agua-por-nitratos-y-tecnicas-para-su-tratamiento

12. Anexos

1
f(x) = 1.67x + 0.22
0.9 R² = 0.83
0.8
0.7
0.6
0.5
A

0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
Cppm
Gráfica 1.-
Absorbancia vs concentración