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"Año de la lucha contra la corrupción e impunidad"

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILO


“FACULTAD DE ESTOMATOLOGÍA”

-ESCUELA PROFESIONAL DE ESTOMATOLOGÍA-

ENZIMAS

INTEGRANTES:
DOCENTE:
CURSO:

BIOQUIMICA

Ciclo:
• II
PRACTICA N°2
FACTORES FÍSICOS-QUÍMICOS QUE MODIFICAN LA VELOCIDAD DE LAS
REACCIONES ENZIMÁTICAS PARTE I: EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE
ENZIMAS, PH, TIEMPO, IONES INORGÁNICOS

I. INTRODUCCIÓN:
Las enzimas precentan caracteristicacas comunes independientemente de las reaccines que
catalizan, presentan caracteristicas comunes en cuanto al los factores que intervienen
favoreciendo, retardando o impidiendo su actividad. Estos factores los estudiaremos teniendo
en cuenta la velocidad que presenta cada reaccion, cuando una enzima actua sobre el sustrato
en determinadas condiciones. Al experimentar con una enzima determinada tomandola como
praton, nos daremos cuenta de la influencia de los factores(concentración de enzimas,
concentración de sustrato, pH, salinidad, temperatura, concentración del producto, ausencia de
activadores enzimá, presencia Inhibidores enzimáticos) sobre la serie de las reacciones
. Este patron general, como se comprenderá, varia en forma caracteristica para cada enzima en
particcular. Para estudiar cada uno de estos factores es necesario que los otros permanezcan
constantes, de tal manera que la investigaccin del factor variable no se vea afectada por la
variacción que pudieran sufrir los otros.
La finalidad de este experimento es observar el efecto de concentración de enzimas,
concentración de sustrato, pH, salinidad, temperatura, concentración del producto, ausencia de
activadores enzimá, presencia Inhibidores enzimáticos sobre la velocidad de una reacccción
enzimática, tomando como ejemplo la hidrólisis enzimática del almidón y evaluando las
variaciones del sustrato tranformado y de los productos de la reacción enzimática.
II. MATERIALES:
Materiales de laboratorio:
 18 tubos de ensayo
 1 gradilla.
 3 pipetas
 1 cocina eléctrica
 2 pinzas de madera

Materiales bilógicos:
Concentración Ph
Solución de almidón 1% -
Buffer acetato 0.1M 4.6
Buffer fosfato c 6.6
Buffer borato C 9.0
Solución de ClNa 2% -
Amilasa salival dializada 0.25%
Ácido clorhídrico 0.05N -
Solución yodada8 yoduro - -
de potasio + yodato de
potasio)
Solución cúprico alcalina - -
Solución fosfomolíbdica - -
III. PROCEDIMIENTO:
 Armar el sistema: colocar los componentes mencionados en la tabla, utilizando
8 tubos de ensayo y tres pipetas.
TUBOS DE ENSAYO
COMPONENTES (en ml.) I II III IV V VI VII VIII
Solución de almidón al 1% 1.0 1.0 2.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
Buffer acetato 0.1M pH 4.6 - - - 5.0 - - - -
Buffer fosfato 0.1M pH 6.6 5.0 5.0 5.0 5.0 - 5.0 5.0
Buffer borato 0.1M pH 9.0 - - - - - 5.0 - -
Solución de ClNa al 2% 1,4 - 1,4 1,4 1,4 1,4 1,4 1,4
Agua destilada 2.6 3.4 1.0 2.0 2.0 2.0 2.4 2.0

 Mezclar y colocar los tubos: del I al VII al baño de agua 37°C, por cinco
minutos, para el equilibrio de la temperatura.

 El tubo VIII mantenerlo en agua helada entre 0°C y 4°C durante toda la práctica.
 Agregar el preparado enzimatico (amilasa salival dializada al 0.25%) a ls tubos :
del II al VII, según lo indica el siguiente cuadro y tomar el tiempo.
TUBOS DE ENSAYO
Componente(ml.) I II III IV V VI VII VIII
Preparado enzimatic(amilasa salival 0.0 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6 0.2 0.6
dializada al 0.25%)

 Mezclar y continuar la incubacíon por 20 minutos.


 CONTROL DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA POR EL SUSTRATO RESIDUAL
 El control del sustrato se realiza por la reacccción del yodo, de la siguiente
manera: ccumplido los 20 minutos de incubacción sacar los tubos del baño maria
y luego armar una serie paralela de tubos nuevos marccados del I al VIII,
agregado a cada tubo marcado, 0.5ml.del incubado de su correspondiente tubo.
TUBOS DE ENSAYO
Componentes ( en ml.) I II III IV V VI VII VIII
Inccubado ccorrespondiente de ccada 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
uno de los tubos
HCl 0.05 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Solución iodada 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

 Observar los resultados de las reacccciones de cada uno de los tubos;


valrando los ccambios de ccoloracion (azul osccuro, azul claro, sin color)

 Se obtubo lo siguiente:
 CONTROL DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA POR LOS PRODUCTOS FORMADOS

 El control de los producctos forados se hara en base a la cacpaccidad


reductora de estos (gluccosa, maltosa) de la siguiente manera:

 Luego procedemoos a armar el sistema utilizando 2 tubos de ensayo nuevos.


Componentes Tubos
III V
Incuubado ccorrespondiente 1.0ml. 1.0ml.
a los tubos III y V
Solución cúprico alcalina 1.0ml. 1.0ml.

 Mezclar y poner en baño maria por 8 miutos III y V.


 Cumplidos los 8 minutos sacamos los tubos y enfriamos con agua corriente.

 Se obtubo lo siguiente:

IV. RESULTADOS Y CONCLUSIONES:


CUADRO PARA VALORACIÓN FINAL DE LA VELOCIDAD DE LA REACCIÓN
ENZIMÁTICA POR EL SUSTRATO RESIDUAL
A continuación, detallaremos que componentes contenía cada tubo, como estos reaccionan, y
el porqué de los colores que se muestran en las anteriores imágenes:

I II III IV V VI VII VIII


No Si Si No Si No Si No
reacción reacción reacción reacción reacción reacción reacción reacción
lenta rápida ideal rápida

 TUBO I:
Contenido:
_Solución de almidón al 1%(1ml) → sustrato.
_ Buffer fosfato 0.1M pH 6.6(5ML) → pH óptimo.

_ Solución de ClNa al 2%(1,4ml ) →Cl es el ion activador de la enzima .

_ Agua destilada (2,6ml) → brinda el medio liquidó a la reacción.


_ HCl 0.05N (5ml) → detiene la reacción.
_ Solución iodada (0,5ml) → I2 es un indicador.

[S] + pH + Cl + HCl + I2 → No reacción

(tiñe azul morado)


Explicación:
A causa de no haber agregado enzima (amilasa salival) el sustrato (almidón) no se degrado.
Por ende, al interactuar el almidón con el indicador (I2) la reacción se torna azul oscuro
como observamos en la imagen.
 TUBO II:
Contenido:
_Solución de almidón al 1%(1ml) → sustrato.
_ Buffer fosfato 0.1M pH 6.6(5ml) → pH óptimo.

_ Agua destilada (2,6ml) → brinda el medio liquidó a la reacción.


_ Amilasa salival dializada al 0.25%(0.6ml) → enzima
_ HCl 0.05N (5ml) → detiene la reacción.
_ Solución iodada (0,5ml) → I2 es un indicador.

[S] + pH + E+ HCl + I2 → escasos productos

(tiñe mostaza)
Explicación:
A causa que no hubo Cl (ion activador) la reacción fue lenta por eso se obtuvo escasos
productos. Como en la mezcla resultante había aun presencia de almidón no degradado
y escasos azucares reductores, el indicador (I2) tiño la mezcla de un color parecido al
ámbar.
 TUBO III:
Contenido:
_Solución de almidón al 1%(2ml) → sustrato.
_ Buffer fosfato 0.1M pH 6.6(5ml) → pH óptimo.

_ Solución de ClNa al 2%(1,4ml) →Cl es el ion activador de la enzima

_ Agua destilada (1.0ml) → brinda el medio liquidó a la reacción.


_ Amilasa salival dializada al 0.25%(0.6ml) → enzima
_ HCl 0.05N (5ml) → detiene la reacción.
_ Solución iodada (0,5ml) → I2 es un indicador.

↑ [S] + pH + E+ HCl + I2 → hay productos

(tiñe amarillo)
Explicación:
Debido a que la cantidad de sustrato estaba aumentada (era el doble comparando con los
demás tubos), la velocidad de la reacción fue aumentado hasta que alcanzó un valor
máximo y luego se mantuvo constante. A pesar de esto si se formaron productos por ello el
indicador al interactuar aquellos tiño la reacción de color amarillo como se muestra en la
imagen.
 TUBO IV:
Contenido:
_Solución de almidón al 1%(1ml) → sustrato.
_Buffer acetato 0.1M pH 4.6(5ml) → pH ácido.

_ Solución de ClNa al 2%(1,4ml) →Cl es el ion activador de la enzima

_ Agua destilada (2.0ml) → brinda el medio liquidó a la reacción.


_ Amilasa salival dializada al 0.25%(0.6ml) → enzima
_ HCl 0.05N (5ml) → detiene la reacción.

_ Solución iodada (0,5ml) → I2 es un indicador.

[S] + ↓ pH + E+ HCl + Cl + I2 → no hay productos

(tiñe azul oscuro)


Explicación:
A causa que pH de la reacción fue ácido provoco la desnaturalización de la enzima,
impidiendo su acción sobre el sustrato de esta manera no se formó productos (azucares
reductores). Por ello el indicador al interactuar sobre el sustrato tiño la reacción de color
azul oscuro.

 TUBO V:
Contenido:
_Solución de almidón al 1%(1ml) → sustrato.
_ Buffer fosfato 0.1M pH 6.6(5ml) → pH óptimo.

_ Solución de ClNa al 2%(1,4ml) →Cl es el ion activador de la enzima

_ Agua destilada (2.0ml) → brinda el medio liquidó a la reacción.


_ Amilasa salival dializada al 0.25%(0.6ml) → enzima
_ HCl 0.05N (5ml) → detiene la reacción.
_ Solución iodada (0,5ml) → I2 es un indicador.

[S] + pH + E+ HCl + Cl + I2 → hay productos

(tiñe amarillo)
Explicación:
En esta reacción no sea presentado ningún factor que altere la acción de la enzima sobe el
sustrato por ello la formación de productos (azucares reductores) se dio sin inconveniente.
Este tipo reacción es ideal. Al interactuar el indicador con los productos tiño la reacción de
color amarillo
 TUBO VI:
Contenido:
_Solución de almidón al 1%(1ml) → sustrato.
_Buffer borato 0.1m pH 9.0(5ml) → pH básico
_ Solución de ClNa al 2%(1,4ml) →Cl es el ion activador de la enzima

_ Agua destilada (2.0ml) → brinda el medio liquidó a la reacción.


_ Amilasa salival dializada al 0.25%(0.6ml) → enzima
_ HCl 0.05N (5ml) → detiene la reacción.
_ Solución iodada (0,5ml) → I2 es un indicador.

[S] + ↑pH + E+ HCl + Cl + I2 →no hay productos

(tiñe marrón oscuro)


Explicación:
Debido a que el pH de la reacción fue básico provoco la desnaturalización de la enzima,
impidiendo su acción sobre el sustrato de esta manera no se formó productos (azucares
reductores). Por ello el indicador al interactuar sobre el sustrato tiño la reacción de color
marrón oscuro; como observamos en la imagen:
 TUBO VII:
Contenido:
_Solución de almidón al 1%(1ml) → sustrato
_ Buffer fosfato 0.1M pH 6.6(5ml) → pH óptimo.

_ Solución de ClNa al 2%(1,4ml) →Cl es el ion activador de la enzima

_ Agua destilada (2.4ml) → brinda el medio liquidó a la reacción.


_ Amilasa salival dializada al 0.25%(0.2ml) → enzima
_ HCl 0.05N (5ml) → detiene la reacción.
_ Solución iodada (0,5ml) → I2 es un indicador.

[S] + pH + ↓E+ HCl + Cl + I2 → hay pocos productos

(tiñe amarillo oscuro)

Explicación:
A causa de que la cantidad de enzima fue baja (0.2ml.- a comparación de los demás
tubos) esta se saturo muy rápido. Por ello la cantidad de almidón no se degrado en su
totalidad. Como en la mezcla resultante había aun presencia de almidón no degrado y
azucares reductores, el indicador(I2) tiño la muestra la mezcla de un color amarillo oscuro,
como observamos en la imagen
 TUBO VIII:
Contenido:
_Solución de almidón al 1%(1ml) → sustrato
_ Buffer fosfato 0.1M pH 6.6(5ml) → pH óptimo.

_ Solución de ClNa al 2%(1,4ml) →Cl es el ion activador de la enzima

_ Agua destilada (2ml) → brinda el medio liquidó a la reacción.


_ Amilasa salival dializada al 0.25%(0.2ml) → enzima
_ HCl 0.05N (5ml) → detiene la reacción.
_ Solución iodada (0,5ml) → I2 es un indicador.

↓ T° + [S] + pH + E+ HCl + Cl + I2 → hay productos


(tiñe amarillo- marron)
Contenido:
A causa de que la temperatura fue baja la enzima debió desnaturalizarse, y el color de
la reacción debió ser azul oscuro, pero no se obtuvo esto, debido a que la temperatura
del refrigerador utilizado no estuvo entre 0°C y 4°C, como se esperaba. Por ellos la
enzima no se desnaturalizo por completo generando pocos productos motivo por el
cual la reacción se tiño de color amarillo pálido, como se observa en la imagen.

CUESTIONARIO

1. ¿Cuáles son los factores que afectan la velocidad de las reacciones


enzimáticas?

 Concentración de enzimas

A medida que aumenta la concentración de enzimas, la velocidad de la reacción aumenta


de manera proporcional. Sin embargo, esto es así solo hasta cierta concentración, pues en
un momento determinado la velocidad se hace constante.

 Concentración de sustrato

Al aumentar la concentración de sustrato se incrementa la velocidad de la reacción. Esto


se debe a que más moléculas de sustrato colisionarán con las moléculas de enzima, por lo
que se formará el producto más rápidamente.

 PH

El PH óptimo de la actividad enzimática es 7, con excepto de las enzimas del estómago


que son acidas. En medios muy ácidos o muy alcalinos, la enzima se desnaturaliza y se
inactiva.

 Salinidad
La concentración de sales también afecta el potencial iónico y en consecuencia pueden
interferir en ciertos enlaces de las enzimas, los cuales pueden formar parte del sitio activo
de la misma

 Temperatura

Amedida que aumenta la temperatura, inicialmente la velocidad de reacción aumentará


debido al aumento de la energía cinética. Sin embargo, el efecto de la ruptura de la unión
será cada vez mayor, y la velocidad de reacción comenzará a disminuir.

 Concentración del producto

La acumulación de los productos de reacción generalmente disminuye la velocidad de la


enzima. En algunas enzimas, los productos se combinan con su sitio activo formando un
complejo suelto y, por lo tanto, inhibiendo la actividad de la enzima

 Ausencia Activadores enzimáticos

Algunas de las enzimas requieren la presencia de otros elementos para funcionar mejor,
estos pueden ser cationes metálicos inorgánicos ( Mg2+, Mn2+, Zn2+, Ca2+, Co2+, Cu2+, Na+,
K+), aniones (el anión cloruro (CI-))para la actividad enzimática y las coenzimas, al estar
ausentes estos elementos no se realizan las actividades enzimáticas

 Presencia Inhibidores enzimáticos

Los inhibidores enzimáticos son sustancias que afectan negativamente la función de las
enzimas y, en consecuencia, ralentizan o en algunos casos, detienen la catálisis. Existen
tres tipos comunes de inhibición enzimática: competitiva, no competitiva e inhibición del
sustrato

2. ¿Cómo se puede demostrar el sustrato residual y los productos finales


cuando se usa almidón como sustrato?