1° Cuatrimestre 2018. Bioprocesos 1. Universidad Nacional de Quilmes.

Trabajo Práctico Nº2: Determinación del

coeficiente volumétrico de Transferencia de
Oxígeno: Kla
Alexis Barrios. Diego Martinitto. Martin Salas. Gerardo Vatovec. Contacto:
barriosalexisraul@gmail.com, diegop91@gmail.com, martin.n.salas@gmail.com,
gvatovec@gmail.com.

Resumen:

En el siguiente trabajo se buscó determinar de forma experimental el coeficiente volumétrico

de transferencia de oxígeno conocido como KLa mediante dos métodos: método de balance
gaseoso en biorreactor y método iodométrico en erlenmeyer. En el primer método se
midieron en tres velocidades de agitación: 200, 400 y 600 rpm, y con el uso de
antiespumante. En cuanto al método iodométrico, se establecieron condiciones
diferenciales. Estas fueron el uso de bafles para generar mayor turbulencia y el aumento de
volumen para establecer una menor superficie de contacto. Los resultados fueron acorde a
lo esperado en las diferentes condiciones

Introducción:

La transferencia de Oxígeno llevada a cabo en los biorreactores donde se realiza el

crecimiento de cierto microorganismo se basa en el Modelo de la Película donde se
establece que, adyacente a cada una de las fases existe una película donde reside la
principal resistencia de transferencia de materia. Por lo que no existe acumulación de
materia en la interfase, eliminando su resistencia. Este modelo permite evaluar la
resistencia más importante que debe pasar la burbuja de gas para entrar en contacto con el
medio y ser transferida hacia la célula para su consumo. Basado en esto, se plantea que las
velocidades en las películas son iguales a 0, por lo que el oxígeno debe moverse mediante
difusión. Esta difusión genera un gradiente de concentración, donde la difusión va a ser
mayor, cuanto menor sea la concentración de oxígeno en la fase líquida. Esto a su vez, se
ve afectado por la biomasa presente en ese medio, ya que los microorganismos generan la
demanda y el consecuente consumo de oxígeno. A partir de una serie de deducciones a
partir de la Ley de Fick y la Ley de Henry, se obtiene la ecuación de Transferencia de
Oxígeno siendo la siguiente:
OTR= Kla (C*-CL).

Donde se establece que OTR es la transferencia de oxígeno. Esta se ve definida por un

coeficiente de transferencia de materia (Kl) que es la capacidad del fermentador de
transferir oxígeno. A su vez, este Kl se ve afectado por el área (a); el conjunto de Kl y a
define la “huella dactilar” del fermentador utilizado, que es esencial para saber la capacidad
de transferir oxígeno del reactor en una determinada área. Luego se encuentra el gradiente
de concentración definido por un C*, que representa la solubilidad máxima del oxígeno en
las condiciones de trabajo (tales como la temperatura), y el CL que es la cantidad de
oxígeno disuelto en la fase líquida en cierta etapa del cultivo en esas condiciones.
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Materiales y Métodos:

a) Determinación de la velocidad de transferencia de O2 en biorreactor por el método de

balance gaseoso.
1.- Se prepararon 3 litros de solución 0.5 N de Na2SO3, se ajustó el pH a un valor alrededor
de 8 y se colocó la solución en el biorreactor.
2.- Se agregó el catalizador (SO4Cu, 1M), hasta alcanzar una concentración final de 10-3 M.
3.- Se seleccionó el caudal de aire F = 60 l.h-1, y se ajusta la agitación al valor previamente
establecido.
4.- Se aguardó hasta que la lectura del sensor de O2 se estabilizara (10-15 min.) y se
registró el valor leído.
5.- Se modificó la agitación a un nuevo valor y se procedió como en el punto 4. El
procedimiento se repitió con tres condiciones de agitación distintas (200, 400 y 800 rpm).
Luego de determinadas las tres velocidades de transferencia se agregó en el biorreactor un
tensioactivo (detergente) y, posteriormente, un antiespumante para determinar
cualitativamente el efecto de estas sustancias sobre la transferencia de O 2 a una condición
de agitación dada (200 rpm). Con los datos obtenidos se pudieron determinar las
velocidades de consumo de O2, realizando el balance de materia en fase gaseosa mediante
la siguiente expresión:

(1)
El valor de kLa se calcula a partir de la ecuación:

(2)
Cabe destacar que el valor de 7.5mg/L dado para C* vale sólo cuando el gas que está en
equilibrio con el líquido es aire (presión parcial de O2 de 0.21 Atm). En el caso del TP la
presión parcial de O2 estará dada por la composición del gas de salida por lo que en el
cálculo de kLa debe corregirse dicho valor. El valor corregido resulta ser:

(3)
Con estos datos se construyó un gráfico de log kLa vs log rpm.

b) Determinación de la transferencia de O2 en erlenmeyer, por el método Iodométrico:

1.- Se prepararon 3 erlenmeyer (por duplicado) con las siguientes características:
a) Erlenmeyer de 250 mL c/ Bafles con 75 mL de solución de Na2SO3.
a) Erlenmeyer de 250 mL s/ Bafles con 75 mL de solución de Na2SO3.
a) Erlenmeyer de 250 mL s/ Bafles con 150 mL de solución de Na2SO3.
2.- Se llevaron al shaker previamente termostatizado a 30ºC y se agitaron a 200 rpm.
3.- Se agregó el catalizador (SO4Cu, 1M), hasta alcanzar una concentración final de 10-3 M.
Este momento se tomó como tiempo cero de la experiencia.
4.- A intervalos de 45 minutos se extrajeron 6 muestras de 2 mL con pipeta (tiempo 0 más 5
muestras) y se adicionaron sobre 3 ml de solución de I2 (aproximadamente 0,5 N). El
exceso de I2 se tituló por retorno con S2O3Na2 0,075 N, con solución de almidón como
indicador.
5.- Con los datos obtenidos se graficó el volumen de S2O3Na2 gastado en función del tiempo
y con la pendiente de dicha gráfica se calculó el valor de kLa empleando la siguiente
expresión:
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(4)
Donde C*: solubilidad del O2
N : concentración del tiosulfato
Vm: volumen de Na2SO3.
m: Pendiente

Resultados y Discusión:

a) Determinación de la velocidad de transferencia de O2 en biorreactor por el método

de balance gaseoso.

Agitacion % O2 % O2
(rpm) salida entrada % O2 salida c/ antiesp(600rpm)
200 20,24 21,04 15,7
400 16,55 21,04
600 10,16 21,04
Tabla 1: % de O2 vs rpm de las diferentes condiciones. En el caso de antiespumante sólo se tomó medida a 600 rpm.

rpm OTR (moles/ltshs)

200 0,008
400 0,043
600 0,097
600(antiesp) 0,051
Tabla 2: OTR calculado a partir de (1) vs rpm de las diferentes condiciones. En el caso del antiespumante sólo se tomó
medida a 600 rpm.

rpm kla(1/hs)
200 34,72
400 186,60
600 420,94
600(antiesp) 221,32
Tabla 3: kLa calculado a partir de (2) vs rpm de las diferentes condiciones, cabe mencionar que C* utilizado fue corregido al
valor de oxigeno a la entrada del fermentador. En el caso del antiespumante sólo se tomó medida a 600 rpm.

log kla vs log rpm

3
log kla (hs-1)

2 log kla vs log

1 rpm

0
0 2 4
log rpm

Gráfico 1: Log (kLa) vs log (rpm) en función de los kLa calculados en la Tabla 3.
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b) Determinación de la transferencia de O2 en erlenmeyer. Método iodométrico.

titulante (ml)
tiempo (hs)
control (75ml medio) 75 ml medio c/ bafles 150 ml medio
0 8,5 8 7,6 7,5 8 8
0,75 8,6 8,9 9 9 7,8 7,3
1,5 9 8,8 10,5 10,6 - 7,8
2,25 10,1 9,9 12,3 13,3 9 8,1
3 10,1 9,6 14 14,9 9,3 9,3
3,75 10,9 9,9 14,8 15,5 8,7 8,7
Tabla 4: Volumen de titulante vs. Tiempo en la tres condiciones diferentes por duplicado. Las celdas vacías corresponden a
datos que fueron eliminados por tener un error considerable respecto a los valores esperados y que no se pudieron repetir.

control (75 ml medio de

cultivo)
vol titulante

15 Serie1
10
(ml)

Serie2

5 duplicado
control
0
0 2 4
y = 0,4838x + 8,2762
y = 0,6705x + 8,2762
R2 = 0,9349
tiempo (hs) R2 = 0,8147

Gráfico 2: Volumen de titulante vs. tiempo para los erlenmeyer con 75 ml de medio de cultivo y su duplicado. Se toma la
pendiente de la serie 1 puesto a que se observan resultados acordes a lo esperado y mejor R 2 (pendiente 0,67)

erlenmeyer (75 ml medio) con bafles

20 erlenmeyer c/ bafles
vol titulante (ml)

15 duplicado

10 erlen c/bafles

5 erlenm c/bafles
duplicado
0
0 1 2 3 4
y = 2,301x + 7,4857 y = 2,0114x + 7,5952
2
tiempo (hs) 2
R = 0,9774 R = 0,9923
Gráfico 3: Volumen de titulante vs. tiempo para los erlenmeyer con bafles y 75 ml de medio de cultivo por duplicado. Se toma
la pendiente promedio ya que no se observan anomalías ( pendiente 2,16 )
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erlenmeyer 150 ml medio

12 erlenmeyer 150 ml
vol titulante (ml) 10 medio
8 duplicado
6
4 duplicado
2
0 150 ml medio
0 2 4
y = 0,6857x + 7,3286 y = 0,84x + 6,55
2
tiempo (hs) 2
R = 0,9796 R = 0,9156

Gráfico 4: Volumen de titulante vs. tiempo para los erlenmeyer con 150 ml de medio de cultivo por duplicado. Se toma la
pendiente del duplicado ya que es que el presenta menos anomalías respecto de lo esperado ( pendiente 0,84)

pendiente de la
regresion kla
erlenmeyer c/75 ml medio 0,67 21,84
erlenmeyer c/150 ml medio 0,84 27,39
erlenmeyer c/ bafles y 75 ml
medio 2,16 70,4

Tabla 5: relación existente entre la pendiente de los graficos de vol titulante vs tiempo y kla a diferentes condiciones de
erlenmeyer. Cabe mencionar que para el kla obtenido se consideró partir de la ecuación (4) siendo C* = 0,00023 moles de
O2/l (7,5 mg/l), N = 0,06 eq/l y Vm = 2 ml.

Conclusión:

De acuerdo a los resultados obtenidos se puede concluir que la agitación del sistema es
esencial para establecer los valores de KLa del biorreactor utilizado. Al aumentar la
agitación, se observa un aumento de este parámetro, debido a la formación de burbujas de
menor tamaño que permiten aumentar la superficie de contacto. Por otro lado, el agregado
de un accesorio para romper el vórtice generado por la agitación, como es el caso de los
bafles, permiten mejorar la difusión del oxígeno al medio. Las diferencias de volúmenes, a
su vez, también demostraron ser esenciales para la transferencia de oxígeno, ya que a
mayor volumen, es menor la superficie de contacto por lo que disminuye la transferencia del
gas.
Además, se pudo observar que el efecto de los agregados al medio de cultivo da como
resultado una variación en la transferencia de gases. En ese sentido se pudo comprobar
que el suministro de antiespumante provocó una baja de esta transferencia y por lo tanto del
KLa debido a una disminución en la fuerza impulsora, de acuerdo a la ecuación de la Ley de
Hick.
A modo de conclusión final, se plantea que tanto la agitación, como el volumen de trabajo, y
la presencia de bafles son esenciales para una maximización de la transferencia de oxígeno
en el medio utilizado, y todos los parámetros analizados deben ser tenidos en cuenta para
el diseño de un sistema de cultivo apto para el crecimiento del microorganismo con el cual
se quiere trabajar y así obtener los valores de biomasa dentro del rango de lo esperado.