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a. Facultad de Ciencias
Universidad Nacional de
Website: http://revistas.unitru.edu.pe/index.php/scientiaagrop Trujillo
Resumen
La investigación tuvo como objetivo aislar el micelio secundario de Auricularia spp y Pleurotus spp
procedente de tres áreas naturales de la región San Martín, así como evaluar el crecimiento en medio agar papa
dextrosa y en sustratos estériles a base de residuos agroindustriales. Se obtuvieron 10 aislamientos de micelios
secundarios a través de carpóforos desinfectados de Pleurotus spp y otros 10 aislamientos de carpóforos
desinfectados de Auricularia spp. La mayor velocidad de crecimiento en Auricularia spp fue de 62,5 µm h-1
(A1) y de 75 µm h-1 (B10) para Pleurotus spp. En una segunda parte del experimento se produjo semilla de las
cepas nativas más veloces en granos de maíz esterilizado durante un periodo de incubación de 40 días. La
semilla fue inoculada en sustratos estériles a base de residuos agroindustriales. Las cepas A1 de Auricularia
spp y B10 de Pleurotus spp desarrollaron mejor en sustrato a base de residuos de pulpa de café, logrando una
eficiencia biológica de 30,33% y 18,20%, respectivamente. Se concluye que las cepas nativas A1 y B10 de
hongos comestibles pueden ser utilizadas en la propagación de semilla y producción de hongos comestibles,
brindando al agricultor una alternativa complementaria de alto valor nutritivo.
Palabras clave: Auricularia spp.; Pleurotus spp.; eficiencia biológica; pulpa de café; cascarilla de arroz.
Abstract
The objective of the research was to isolate the secondary mycelium of Auricularia spp and Pleurotus spp
from three natural areas of the San Martín region, as well as to evaluate the growth in agar potato dextrose
medium and in sterile substrates based on agro industrial residues. Ten isolates of secondary mycelia were
obtained through disinfected carpophores of Pleurotus spp and another 10 isolates of disinfected carpophores
of Auricularia spp. The highest growth rate in Auricularia spp was 62,5 µm h-1 (A1) and 75 µm h-1 (B10) for
Pleurotus spp. In a second part of the experiment, seed of the fastest strains was produced in sterilized maize
grains during a 40-day incubation period. The seed was inoculated into sterile substrates based on agro
industrial residues. The native strains A1 of Auricularia spp and B10 of Pleurotus spp developed better in
substrate based on coffee pulp residues, achieving a biological efficiency of 30.33% and 18.20%, respectively.
It is concluded that the native strains A1 and B10 of edible fungi can be used in seed propagation and edible
fungus production, providing the farmer with complementary food of high nutritional value.
Keywords: Auricularia spp.; Pleurotus spp.; biological efficiency; coffee pulp; rice husk.
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2.2 Aislamiento de micelio secundario décimo día, siendo consecutivo cada 5 días
Los carpóforos de los hongos Auricularia hasta que el micelio del hongo cubra por
spp y Pleurotus spp (Figura 1), fueron completo la placa. El radio fue medido
lavados empleando agua jabonosa al 10% usando un vernier digital (Control
por 10 minutos y luego desinfectados Company, Traceable, USA) (+/- 0,02
empleando hipoclorito de sodio al 2,0% mm/0,001”). La velocidad de crecimiento
por 1 minuto, finalmente se lavaron 8 fue expresada como µm h-1 y las cepas que
veces usando agua destilada estéril. Con la presentaron mayor velocidad de creci-
ayuda de un bisturí se realizaron cortes de miento fueron seleccionadas para la
aproximadamente un cm2 del cuerpo producción de semilla (Gaitán-Hernández
fructífero, los cuales se colocaron en el y Salmones, 2008). Cada cepa fue mante-
centro de una placa Petri conteniendo Agar nida en medio Agar Papa Dextrosa (APD)
Papa Dextrosa enriquecido (APDE) al 5 % inclinado y conservado a corto y mediano
con extracto de levadura para el desarrollo plazo a 4 °C.
de Pleurotus spp y con extracto de malta
2.4 Producción de “semilla”
para el desarrollo de Auricularia spp
La producción de semilla fue preparada de
(Jonathan y Fasidi, 2003). Las placas se
acuerdo a Mintesnot et al. (2014). Tres
incubaron a 28º C por 10 a 15 días.
kilogramos de maíz fueron hervidos en 5
Litros de agua por 15 minutos, luego el
agua fue drenada y los granos se dejaron
reposar toda la noche. Al día siguiente las
semillas fueron neutralizadas usando
sulfato de calcio y carbonato de calcio
hasta alcanzar la neutralidad (pH 5,5 - 6,5)
así como para reducir la adhesión entre
granos. El maíz preparado fue colocado en
botellas de vidrio (Figura 4) con tapa
hermética y luego autoclavadas en
autoclave (Fravill, AVDA50, Perú) a 121
ºC por 15 minutos. Se dejó reposar las
botellas a temperatura ambiente por 24
horas. Posteriormente fueron inoculadas
usando bloques de agar conteniendo
micelio secundario de los hongos en
prueba, las que fueron incubadas a 27 ºC
por 30 a 40 días, hasta desarrollo del
micelio.
2.5 Preparación de sustratos y desa-
rrollo de micelio
Figura 1. Carpóforos colectados en campo. Los residuos agroindustriales utilizados
Auricularia spp (superior) y Pleurotus spp fueron: cascarilla de arroz, pulpa de café,
(inferior). aserrín y arroz pilado, todos ellos proce-
dentes de la región San Martín, Perú. Cada
2.3 Velocidad de crecimiento y obtén- sustrato fue colocado en remojo en agua
ción de cultivos puros destilada por 48 horas, hasta alcanzar un
Para medir la velocidad de crecimiento se 75 a 80 % de humedad. Cada sustrato fue
siguió la metodología sugerida por Zharare envasado en paquetes de polipropileno de
et al. (2010), en triplicado y placas de Petri 1 kg y fueron esterilizados en autoclave
separadas. Se calculó la tasa de creci- (Fravill, AVDA50, Perú) a 121 °C por 15
miento radial en placas Petri a partir del minutos. Posteriormente las bolsas fueron
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La velocidad de crecimiento para las cepas de Auricularia spp y Pleurotus spp (Figura
de Pleurotus spp estuvo en el rango de 25 4) mostraron un desarrollo de micelio
a 75 µm h -1, siendo las cepas P9 y P10, las abundante en las semillas de maíz a los 40
que mostraron mayor velocidad de días después de la siembra a 27 ºC.
crecimiento, al igual que Auricularia spp La fase de producción de semilla es la más
no hubo diferencias significativas entre crítica, esta debe encontrarse exenta de
cepas (Figura 3). contaminaciones, porque podrían retrasar
En este estudio el crecimiento del micelio el crecimiento y/o calidad del hongo. La
de Pleurotus spp fue similar a lo reportado semilla de maíz, ha sido ampliamente
por Gaitán-Hernández y Salmones (2008) usada por los investigadores (Mintesnot et
y fue menor a lo reportado por Yang et al. al., 2014), debido a su ubicuidad y fácil
(2013). Gaitán-Hernández y Salmones manejo. Otros han usado granos de trigo
(2008), reportaron una correlación positiva (Silveira et al., 2008), rastrojos de trigo
no significativa (r = 0,15) entre el creci- (Sastre-Ahuatzi et al., 2007), mezclas a
miento radial y la eficiencia biológica de diferentes proporciones de residuos, 87%
las cepas, indicando que aquellos micelios torta de semilla de algodón, 10% afrecho
con una alta tasa de crecimiento in vitro no de trigo, 1% sacarosa (Yang et al., 2013);
necesariamente son los más productivos, el cebada (Ríos et al., 2010) y sorgo (Gaitán-
rendimiento de los hongos y el crecimiento Hernández y Salmones 2008). Los
micelial al parecer son controlados por sustratos de mayor colonización del hongo
diferentes factores genéticos. son aquellos que tienen mayor contenido
de carbohidratos estructurales, como el
3.3 Producción de semilla
maíz y el salvado de trigo (Omen et al.,
Para la producción de semilla fueron
2013).
seleccionadas las cepas A1 de Auricularia
spp y P10 de Pleurotus spp. Todas las cepas
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Figura 4. Desarrollo de micelio de la cepa P10 de Pleurotus spp en granos de maíz. Crecimiento a
los 12 días (izquierda) y 40 días (derecha), después de la siembra.
3.4 Crecimiento del micelio en residuos 70%, para Auricularia spp (Figura 5A) y
agroindustriales Pleurotus spp (Figura 6A), respecti-
Las cepas de hongos presentaron creci- vamente. Por el contrario, solo se alcanzó
miento del micelio en la mayoría de los un 10% de colonización, tanto en
sustratos evaluados (Figuras 5 y 6). Los Auricularia spp (sustrato de aserrín, Figura
mayores valores se alcanzaron con 5C) como en Pleurotus spp (sustrato de
Auricularia spp creciendo en el sustrato de cascarilla de arroz, Figura 6B) a los 35 días
pulpa de café. En general, el crecimiento y después de la siembra. No hubo coloni-
colonización de las cepas en pulpa de café zación de ninguna de las cepas en el
fue superior al resto de sustratos, en 50% y tratamiento de arroz pilado.
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Figura 5. Bolsas conteniendo sustratos de pulpa de café (5A), cascarilla de arroz (5B), y aserrín
(5C), con desarrollo del micelio de Auricularia spp a los 35 dias después de la siembra.
Figura 6. Bolsas conteniendo sustratos de pulpa de café (6A), cascarilla de arroz (6B), y aserrín
(6C), con desarrollo del micelio de Pleurotus spp a los 35 días después de la siembra.
Las variaciones observadas en el humedad, más que las cepas P1 y P3. Alam
porcentaje de colonización de cada una de et al. (2007), reportó que Pleurotus posee
las cepas estaría en relación a la un 87-87,5% en muestras provenientes de
composición química y tasa C:N de los Bangladesh. El porcentaje de humedad en
residuos agroindustriales utilizados. Yang los hongos depende de la especie, madurez
et al. (2000), sugirió que la proporción de los cuerpos fructíferos y condiciones de
C/N de 22-30,1, favorece la proporción de almacenamiento durante el procesamiento
primordios, así como una alta proporción y empacado (Guillamon et al., 2010). La
C/N favorece el crecimiento micelial y por misma situación ocurre para la cepa A1 de
el contrario una baja proporción C/N Auricularia spp. El contenido proteico en
favorece el crecimiento del cuerpo Pleurotus spp fue superior, alcanzando un
fructífero. Pleurotus ostreatus presenta una 19% de proteína, mientras que en
capacidad enzimática compleja que le Auricularia spp solo fue de 9%. En
permite degradar polímeros grandes como relación a la composición fisicoquímica
lignina, celulosa y hemicelulosa (Vargas et del género Pleurotus spp fue similar a lo
al., 2012). reportado por Nieto y Chegwin (2010),
3.5 Evaluación de parámetros de encontrando niveles de proteína en el
producción rango de 15,18 - 36,65%, según lo repor-
Bajo las condiciones de producción, el tado por el autor los mayores valores de
desarrollo de carpóforos de Auricularia proteína lo proveen los sustratos que
spp solo fue posible en los sustratos de además de ser una fuente importante de
pulpa de café y cascarilla de arroz, carbono lo es de nitrógeno. Se ha reportado
mientras que el de Pleurotus spp solo fue que la pulpa de café posee hasta 3,87% de
posible en pulpa de café. Los parámetros proteína cruda (Salazar et al., 2009), a
de EB, rendimiento, TP y contenido diferencia de la cascarilla de arroz, en
proteico son descritos en la Tabla 1. La donde el contenido de proteína bruta es
cepa de Pleurotus spp P10, contuvo mayor prácticamente nulo (Prada y Cortés, 2010).
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Tabla 1
Efecto del sustrato y la cepa de hongo sobre los parámetros de producción
Peso seco
Peso fresco Peso seco
de Eficiencia Rendimiento Tasa de Proteína
Sustrato de cuerpos cuerpos
sustratos biológica (%) (%) producción (%)
fructíferos (g) fructíferos (g)
(g)
Auricularia spp (A1)
Pulpa de
76,00 ± 2,04 a 11,40 ± 2,18 a 250,00 30,33 ± 3,35 a 4,56 ± 1,29 a 0,67 ± 0,21 a 9,01 ± 1,24 b
café
Cascarilla
48,37 ± 3,12 b 7,26 ± 1,29 a 250,00 19,33 ± 2,78 b 2,90 ± 1,00 a 0,43 ± 0,15 a 9,30 ± 2,18 b
de arroz
Pleurotus spp (P10)
Pulpa de 45,50 ± 1,24 b 6,83 ± 1,25 a 250,00 18,20 ± 2,89 b 2,73 ± 0,34 a 0,40 ± 0,04 a 19,00 ± 1,28 a
café
Datos representados provienen de la media de tres repeticiones. Valores seguidos de letras diferentes son significativamente
diferentes por Tukey (p ≤ 0,05)
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