Melhoramento de espécies alógamas

Obtenção e uso de duplo-haplóides

 Introdução
• O que são plantas haplóides?
São plantas com metade da ploidia
Ex. Milho
Planta normal diplóide 2n = 20 cromossomos
Planta haplóide de milho n = 10 cromossomos

• O que são duplo-haplóides?

São plantas haplóides em que ocorreu a indução da duplicação
cromossômica restaurando a ploidia n+n = 2n (DH)

• Para que são utilizados?

Para obtenção de linhas puras de forma mais rápida
 Introdução

• A tecnologia de duplo haplóides se refere a geração de

plântulas a partir de células haplóides e posterior duplicação

• O trabalho pioneiro que sugeriu emprego de duplo

haplóide foi publicado por CHASE (1952) que identificou
haplóides naturais e realizou a duplicação.
Por que obter duplo-haplóide? Para várias espécies, o objetivo final
é obter linhagens (indivíduos puros geneticamente – homozigotos).

- Alógamas – reprodução sexuada por cruzamento;

- A linhagem é utilizada para obtenção de híbridos;

autofecundações
População (6-7)
Linhagens Híbridos
- Utilização do duplo-haplóide acelera o processo de
obtenção da linhagem n 4
2 = 2 = 16 tipos de gametas diferentes

AaBbCcDd ABCD abcD

ABCd abCd
Haplóides
ABcD aBcd
AbCD Abcd
Gametas
aBCD abcd
ABcd AbCd Duplicação
A economia de tempo pode AbcD aBCd
variar de 4 a 6 anos para
abCD aBcD
obter linhagens! Linhagens
DH
 Introdução
• Existem haplóides naturais?
– Haplóides naturais têm sido descritos em
aproximadamente 100 espécies de angiospermas
– Incidência natural no campo é baixa (1 em cada 1000
sementes)
– Plantas haplóides são menores, menos vigorosas e
altamente estéreis
 Introdução
• Como induzir a haploidia? São conhecidas 3 metodologias:
– Cruzamento de um híbrido com uma planta indutora de
haploidia. Ex.: milho
ou
– Cultura de anteras
Ex.: cevada, trigo e brássicas

– Cruzamento interespecífico e resgate de embrião

Ex.: trigo x pólen de milho – eliminação natural dos
cromossomos do milho – haplóide de trigo
 Introdução
• Como induzir a haploidia?
– Cruzamento de um híbrido com uma planta indutora de
haploidia
– De 10% a 20% das plantas obtidas desse cruzamento são de
natureza haplóide, ou seja, possuem a metade do conteúdo
genético
– Tratamento dessas plantas haplóides, ainda na fase de plântulas,
para dobrar o número de cromossomos e restabelecer a
fertilidade da planta
– Por definição, duplo-haplóides são essas plantas haplóides que
passaram pelo tratamento e tiveram seu conteúdo genético
duplicado ou restabelecido para o normal
 Introdução
– Vantagens
• Redução no tempo para obter linhagens (pelo menos 18
meses)
• Garantia da pureza genética das linhagens

– A pesquisa de milho nas empresas estão hoje entre os grupos que

lideram o desenvolvimento e a aplicação da tecnologia DH – Brasil
e mundial
A DUPLA FERTILIZAÇÃO
 Formação de plantas haplóides
Técnicas da Biotecnologia - Cultura de anteras

Canola (Brassica napus ) embryos regenerating from

haploid microspores.
Peijun Zhang, Ph.D. thesis University of Manitoba, 1998
 Técnicas da Biotecnologia
Cultura de anteras

Reguladores de crescimento e açúcares

Embriogênese Embrióides

Micrósporos Plântula

Organogênese Calo Órgão

 Linhagen indutora de Tem o gene indutor de haploidia e
haploidia – doa pólen também o gene dominante para
x coloração roxa
Híbrido (progenitor
feminino) Resultado deste cruzamento:
AaBb...
Semente F1 diplóide (2n) n
da linhagen indutora e n do
híbrido , tem endosperma e
Nem todos os genes embrião roxos
em heterozigose,
Semente haplóide (n) - tem
portanto não explora endosperma roxo e embrião
ao máximo a heterose branco – (endosperma é 3n –
2n da mãe e n do pai)
Aqui tem-se certeza de ter
todos os genes em
heterozigose, portanto Linhagens Duplo haplóides
explora ao máximo a formadas: Germina sementes
heterose AABB haplóides e trata
Aabb plântulas com
Seleção das linhagens e aaBB colchicina
cruzamentos para obtenção aabb
Obtem-se D0 e D1
dos híbridos
Ex.: Aabb x aaBB
Híbrido AaBb …..
 Vídeo do CIMMTY

Centro Internacional de Melhoramento

de Milho e Trigo
(México)