ANEXO 1

Curso: Cromatografía
Código: 401542
Nombre de la Tarea: Tarea 1 – Principios cromatográficos

Temáticas a desarrollar:

- Velocidad de migración de solutos: elución cromatográfica, tiempos de retención,

coeficiente de distribución, factor de retención, factor de selectividad, resolución de la
columna, eficiencia de la columna, factores de retención, selectividad y aplicaciones.
- Cromatograma: ensanchamiento de banda, resolución de picos cromatográficos y
selectividad.
- Cromatografía plana: generalidades, fase estacionaria y fase móvil, métodos de
detección (revelado), metodologías usadas para la cromatografía en papel, preparación
de placas de cromatografía en capa fina y aplicaciones.
- Cromatografía en columna: generalidades, fase estacionaria y fase móvil.

Fecha de desarrollo: 6 de septiembre al 26 de septiembre de 2019

Nombre del estudiante: Yurley Parada Duran

Código: _1092363162
Programa: Ingeniería de Alimentos
 EJERCICIO 1 – CROMATOGRAMA Y VELOCIDAD DE MIGRACIÓN DE
SOLUTOS

Tabla 1. Ejercicio 1.1 – Definición de conceptos de velocidad de migración de solutos

Concepto Definición
Respuesta: es la sustancia que se va a separar durante la
Analito:
cromatografía.
Respuesta: proceso por el cual todos los solutos terminan
Elución cromatográfica: por abandonar la columna

Respuesta: es el tiempo entre la inyección en una

columna cromatográfica y la llegada a un pico de analito al
Tiempo de retención: detector

Respuesta: es el cociente o razón de la suma de las

Coeficiente de distribución: concentraciones de todas las formas del compuesto
(ionizadas y no-ionizadas) en cada una de las dos fases.

Respuesta: mide la relación entre el tiempo que las

moléculas del analito están en la fase estacionaria y el que
están en la fase móvil. Se usa para comparar las velocidades
Factor de retención: de migración de los solutos, y no depende de la forma de la
columna o de la tasa de flujo volumétrico.
 Respuesta: cociente de los factores de capacidad de dos
Factor de selectividad: solutos que muestra la selectividad de la columna para uno
de ellos (α).

Respuesta: es una medida cuantitativa de su capacidad

para separar dos analitos (A y B), y permite evaluar
Resolución de la columna: la separación entre dos bandas con respecto a sus anchos.

Respuesta: medida del grado de ensanchamiento de una

banda cromatográfico, se suele expresar en términos de la
altura H, de los platos o del número N de platos teóricos. En
la medida en que la distribución del analito dentro de la
banda es gausiana, la altura de los platos está dada por la
Eficiencia de la columna: varianza dividida entre la longitud de la columna del
empacado.

Respuesta: Medida de la ausencia de interferencia de un

método que se mide ante el cociente de selectividad del
Selectividad: mismo

Respuesta: aumento de la anchura de base de un soluto a

Ensanchamiento de banda: medida que se desplaza desde el punto de inyección al
detector.

Respuesta: separación entre dos bandas cromatográfica

Resolución de picos
cromatográficos.
 REFERENCIAS

Mexico, u. A. (2007). Tenicas cromatograficas. Obtenido de

http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/M.Cromatogrficos_6700.pdf

Separaciones por cromatografia. (s.f.). Obtenido de

http://www2.ulpgc.es/hege/almacen/download/39/39360/separaciones_por_cromatografia_1.pdf
cromatografia. (s.f.). Obtenido de
http://www.anmat.gov.ar/webanmat/mercosur/ACTA01- 14/AGREGADO_XVI/2-
14/uni_XIV/Anexo_2_Cromatograf%C3%ADa_V7.pdf

Tabla 2. Ejercicio 1.2 – Coeficiente de distribución

Concepto Definición Ejemplo

Sustancia que se encuentra disuelta
Soluto: Pigmentos y grasa
en otra.
Respuesta: sustancia que se disuelve en otra. Octanol y agua
Solvente:

Respuesta: es la mezcla homogéneas de Mayonesa

Solución: sustancias disueltas en otra sustancia de
mayor proporción.
Respuesta: las moléculas que poseen Agua
Polar: diferente electronegatividad.
 Respuesta: moléculas que se producen Octanol
Apolar: por la unión entre átomos que poseen
igual electronegatividad.
Respuesta: comportamiento de Agua
Hidrófilo: toda molécula que tiene afinidad por
el agua.
Respuesta: sustancias que no se Octanol
Hidrófobo: pueden mezclar en el agua.

Respuesta: combinación de sustancias Pigmento y grasa.

Mezcla: donde cada una conserva sus Octanol y agua
características.
Respuesta: es la Mezcla de sustancias Grasa
Inmiscible:
que no se pueden mezclar

Concepto Definición Formula

Coeficiente de Respuesta: es el cociente o razón de la 𝑘𝑣𝑚
𝑘=
suma de las concentraciones de todas 𝑣𝑠
distribución:
las formas del compuesto (ionizadas y
no-ionizadas) en cada una de las dos
fases
Relación de conceptos
Cuando el coeficiente de distribución tiene un valor mayor , la concentración del soluto en
un solvente apolar es mayor que la concentración del soluto en un solvente polar. Por el
contrario, si el coeficiente de distribución tiene un valor menor , la concentración del soluto en
el solvente apolar es menor que la concentración del soluto en un solvente polar.
 REFERENCIAS

Solvente o disolvente. (s.f.). Obtenido de http://unrn.edu.ar/blogs/viveros-introduccion-

quimica/files/2013/03/clase-7.pdf

Tema 2. Cromatografía: principios generales. (s.f.). Obtenido de

https://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/8246/7/T2cromagraf.pdf

Doria, G. (2013). Introducción general a la Cromatografía. En Módulo Cromatografía (pp. 11-14).

Bogotá, Colombia. UNAD - Universidad Nacional Abierta y a Distancia. Recuperado el 23 de
mayo de 2019 de http://hdl.handle.net/10596/9904
-
 Tabla 3. Ejercicio 1.2 – Factor de retención

Cromatograma 1 Cromatograma 2
Factor de retención (k’) 4,5 11

Fase más densa (solvente) 𝑡𝑟 − 𝑡𝑚 0−0

𝑘= 𝑘= =0
𝑡𝑚 0

Entonces.
𝑡𝑚 = 0 𝑡𝑚 = 0
𝑡𝑟 = 0 𝑡𝑟 = 0

0−0
𝑘= =0
0
Soluto 𝑡𝑚 = 0 𝑡𝑚 = 0
𝑡𝑟 = 0 𝑡𝑟 = 0
0−0
𝑘= =0
0−0 0
𝑘= =0
0

Concepto Definición
Respuesta: es la curva de elución que se obtiene en una
Cromatograma:
cromatografía, esta representa la señal recogida por el
detector en respuesta a la concentración del analito en
función del tiempo o del volumen de fase móvil añadido.

Respuesta: En cromatografía líquida y cromatografía de

Tiempo de retención (tR):
gases, el tiempo de retención, tR, se define como el
tiempo transcurrido entre la inyección de la muestra y la
aparición de la respuesta máxima
Respuesta: El tiempo muerto es el tiempo requerido para
Tiempo muerto (tM): la elución de un componente no retenido.

Respuesta: aumento de la anchura de base de un soluto a

Ancho de banda (W): medida que se desplaza desde el punto de inyección al
detector
Respuesta: señal para detectar a la salida los
Señal en un cromatograma: componentes de la muestra separados por la columna
 Tabla 4. Ejercicio 1.2 – Cromatograma

Compuesto Tiempo de retención- seg (tR) Ancho de banda (W)

a 2,2 0,32
b 4,8 0,57

Compuesto pico “a” Compuesto pico “b”

Tiempo de 𝑡𝑟 = 2.2 − 0.4 = 1.8 𝑡𝑟 = 4.8 − 0.4 = 4.4
retención
corregido (tR’)

Factor de 2.2 − 0.4 4.8 − 0.4

𝑘′ = 1.2 𝑘′ = 3.8
0.4 0.4
retención (k’)

Número de 4.8 2
𝑁 = 16( ) = 1134.6
platos teóricos 2.2 2 0.57
𝑁 = 16( ) = 756.25
(N) 0.32
 Altura de 𝐿 38 𝐿 38
𝐻= = = 0.0502𝑐𝑚 𝐻= = = 0.033𝑐𝑚
𝑁 756.25 𝑁 1134.6
plato (H)
Factor de 4.8 − 0.4 4.4
𝑎= = = 2.6
2.2 − 0.4 1.8
selectividad (α)
Resolución
(Rs)
4.8 − 2.2 2.6
𝑅𝑠 = 2 = = 2.92
0.32 + 0.57 0.89

1.2 3.8
Resolución 𝑅𝑓𝑞 = 1+1.2 = 0.545 𝑅𝑓𝑞 = 1+3.8 = 0.791
con relación al
factor de
retención

Resolución ∝ −1 2.6 − 1
S= = = 2.215
con relación a la ∝ 2.6
selectividad

Resolución √𝑁 √1134.6
con relación a la 𝐸𝐹𝑄 = 𝐸𝑓𝑞 = = 8.42
4 4
eficiencia √756.25
𝐸𝑓𝑞 = = 6.87
4
 Tabla 5. Ejercicio 1.2 – Características de un cromatograma

Pregunta Respuesta

¿Qué indica el tiempo de retención

en el análisis cromatográfico realizado? Respuesta: El tiempo cero (t0) o tiempo muerto (tm), es
el tiempo de retención del componente inerte.
Respuesta: Refleja el número de veces que el soluto se
¿Qué indica el número de platos? reparte entre las dos fases durante su paso a través de la
columna. El número efectivo de platos se puede definir
del cronograma de una sola banda, Cromatografía.

Respuesta: expresa la eficiencia de la columna en

¿Qué indica la altura de plato? unidades de longitud, sin especificar la longitud de la
columna. Desde un punto de vista teórico la altura del
plato puede relacionarse directamente a las condiciones
experimentales y los parámetros de operación.
 ¿Qué relación tiene la resolución con Respuesta: El factor de capacidad α de una columna,
el factor de retención, la selectividad y como su nombre lo indica, es un término que define que
la eficiencia? tan selectiva es una columna para separar dos picos. Es
de hacer notar, que la columna puede ser selectiva a una
separación, que se identifica por un valor alto de este
factor, pero si no se considera la mejora de los
parámetros que pueden afectar el ancho de un pico, aun
así no se lograría la separación de los mismos.

REFERENCIAS
- Gismera, G. M. J., Quintana, M. M. D. C., & Da, S. D. C. M. D. (2012). Introducción a la
cromatografía líquida de alta resolución. (pp. 23-34) Madrid, ES: Editorial Universidad
Autónoma de Madrid.

EJERCICIO 2 – CROMATOGRAFÍA PLANA

Tabla 6. Ejercicio 2.1 – Definición de conceptos de cromatografía plana

Concepto Definición
Respuesta: Esta fase es aquella en la cual están
Fase estacionaria: retenidos los componentes de la muestra, y a
través de la cual fluye la fase móvil arrastrando
los componentes.
Respuesta: es aquella que se mueve en una
Fase móvil: dirección definida y es la que fluye a través de
una fase estacionaria, arrastrando con ella los
compuestos de la mezcla
Respuesta:El método de la cromatografía mediante la
Métodos de detección o revelado:
denominada Cromatografía de Alta Resolución
(HPLC) o de gases es capaz de detectar hasta distintos
tipos de antibióticos en un mínimo periodo de tiempo
 Respuesta: es un proceso muy utilizado en los
Cromatografía de papel: laboratorios para realizar análisis cualitativos ya
que pese a no ser una técnica potente no requiere
de ningún tipo de equipamiento.

La cromatografía en papel es una técnica utilizada

para análisis inorgánico cualitativo, permite llevar
a cabo la separación e identificación de iones,
trabajando con cantidades mínimas de sustancias.

Respuesta: la cromatografía en capa fina se basa

Cromatografía en capa fina: en la preparación de una capa, uniforme, de un
adsorbente mantenido sobre una placa de vidrio u
otro soporte.
REFERENCIAS

- Doria, G. (2013). Introducción general a la Cromatografía. En Módulo Cromatografía (pp. 31-

35). Bogotá, Colombia. UNAD - Universidad Nacional Abierta y a Distancia.
 Tabla 7. Ejercicio 2.2 – Cálculo Rf ensayo 1 y 2

Muestra “a”

Ensayo 1 Cálculo de Rf.

5.4𝑐𝑚
𝑅𝐹 = = 1.8𝑐𝑚
0.3𝑐𝑚
Muestra “a”

Cálculo de Rf.

Distancia recorrida por el disolvente:

5.4𝑐𝑚 − 0.5 − 0.3 = 4.6𝑐𝑚

3.5𝐶𝑚
𝑅𝐹 = = 0.76𝑐𝑚
4.6𝑐𝑚
Ensayo 2

Muestra “b”

Cálculo de Rf.
3.1𝐶𝑚
𝑅𝐹 = = 0.67𝑐𝑚
4.6𝑐𝑚

Muestra “c”

Cálculo de Rf.
0.0𝐶𝑚
𝑅𝐹 = = 0.6𝑐𝑚
4.6𝑐𝑚
Muestra “d”

Cálculo de Rf.
2.1𝑐𝑚
𝑅𝐹 = = 0.45𝑐𝑚
4.6𝑐𝑚
 Tabla 8. Ejercicio 2.2 – Justificación ensayos 1 y 2
Pregunta Respuesta
Respuesta: Este compuesto se adsorbió fuertemente en
Para el ensayo 1, ¿qué significa que la la fase estacionaria, por lo que su migración a lo largo
muestra “d” presentara un de ella fue menor, mientras que los compuestos menos
desplazamiento de 2,8 cm y la muestra polares fueron arrastrados más rápidamente por la fase
patrón fue de 3,3? móvil.

Respuesta:
la composición de la fase móvil empleada fue: 8%
tolueno y 92% diclorometano.
Para el ensayo 2, ¿por qué se empleó
Ambos compuestos son disolventes orgánicos de
esa composición de fase móvil?
extracción. Las muestras tratadas tienen una polaridad
baja o media, por esta razón se utiliza el tolueno (no
polar) y el diclorometano (polar), por lo tanto estos dos
compuestos son miscibles, pero de distinta polaridad
Respuesta: El clorobenzaldehído al ser el compuesto
Para el ensayo 2, ¿Por qué la muestra
más polar no presente afinidad suficiente con la fase
“c” no presentó un desplazamiento con
móvil por lo que no genero un desplazamiento en la
la composición de la fase móvil?
placa.
Respuesta: el disolvente empleado como fase móvil se
Para el ensayo 2, ¿por qué se tiene un
hace ascender por capilaridad.
frente de disolvente?

Respuesta: La clave de la separación en cromatografía

Para el ensayo 2, indique desde la es que la velocidad con la que se mueve cada sustancia
estructura de cada muestra, cuál es la depende de su afinidad relativa por ambas fases
afinidad con la fase móvil. (equilibrio de distribución)

REFERENCIAS

- Gismera, G. M. J., Quintana, M. M. D. C., & Da, S. D. C. M. D. (2012). Introducción a la

cromatografía líquida de alta resolución. (pp. 125-127) Madrid, ES: Editorial Universidad
Autónoma de Madrid.
 EJERCICIO 3 – CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA

Tabla 9. Ejercicio 3 – Cromatografía de columna

Aspecto Cromatografía plana Cromatografía en columna

Eluyente eluyente es la fase móvil y (disolvente que constituye la fase
asciende por la placa de CCF por móvil)
capilaridad.
Se realiza por la distancia es que en la técnica rápida el
Separación recorrida de la muestra en la disolvente se hace atravesar la fase
Fase estacionaria estacionaria aplicando una presión
positiva.
Longitud de la fase Mayor número de platos teóricos para que haya una separación
es la separación. Para una efectiva de los componentes su
Estacionaria
columna de longitud dada velocidad a través de la columna
debe ser suficientemente diferente y
la longitud de la columna adecuada.
 Velocidad de flujo Los geles utilizados en este tipo Es la velocidad de la fase móvil a
de cromatografía deben través de la sección transversal
mantener el tamaño de los poros media del lecho cromatográfico o
entre límites bien controlados columna.
para obtener resultados
reproductibles; asimismo, deben
poseer una baja o nula afinidad
por las substancias a separar, no
poseer grupos ionizantes, ser
poco compresibles para evitar
deformaciones que impidan
alcanzar velocidades de flujo
razonables y tener un. tamaño de
granulo tal que permitan un
rápido equilibrio en la
distribución de las moléculas del
soluto entre el exterior y el
interior del gel
Tiempo de separación Los distintos componentes de la resolución de una columna
muestra emergen de la columna cromatográfica capacidad que
a tiempos diferentes presenta para separar dos
dependiendo de su retención en componentes de una muestra, no
la misma, siendo muy diferentes las
propiedades intrínsecas de los
mismos.
Cantidad de muestras a Se pueden separar varias hay que establecer otra distinción
según sea la retención de la fase
Separar muestras.
estacionaria líquida sobre el sólido
soporte: exterior y el interior del gel
Fase móvil La fase estacionaria se coloca se utiliza un tubo de vidrio
sobre una superficie plana cilíndrico como soporte de la fase
estacionaria y se hace pasar a través
de ella la fase móvil.
 Fase estacionaria la fase estacionaria es una capa se caracterizan por tener una fase
de partículas de unos milímetros estacionaria que se encuentra dentro
de espesor, fijadas sobre un de una columna de vidrio de 5 a 30
soporte sólido generalmente de mm de diámetro por la que se hace
aluminio, plástico o vidrio pasar una fase móvil líquida o
gaseosa que estará en permanente
movimiento
Detección La detección y localización de Permite acoplar un sistema de
las manchas en la placa de TLC detección continuo a la salida de la
se hace observando los cambios columna
en la fluorescencia, o absorción
en el U.V., de un indicador que
se incorporó a la fase
estacionaria
Factores que influyen en el absorbente, se coloca en el Se realiza sobre papel u otro
interior de una columna de material sólido. Suele llamarse “en
la separación
vidrio, la cual finaliza con una capa fina” o “en capa delgada”
llave para controlar el paso de porque la fase estacionaria recubre
sustancias al exterior de la un soporte plano y rígido
columna
Afinidad de la fase gas
móvil con la polaridad de liquido
los analitos

REFERENCIAS

Doria, G. (2013). Introducción general a la Cromatografía. En Módulo Cromatografía (pp. 14-

15;21-27). Bogotá, Colombia. UNAD - Universidad Nacional Abierta y a Distancia.
- Gismera, G. M. J., Quintana, M. M. D. C., & Da, S. D. C. M. D. (2012). Introducción a la
cromatografía líquida de alta resolución. (pp. 27-33) Madrid, ES: Editorial Universidad
Autónoma de Madrid.