“AÑO DE LA LUCHA CONTRA LA CORRUPCIÓN E IMPUNIDAD”

IE: ABAT
“ALBERTO BARTON THOMPSON”

INTEGRANTES:
 CHUAN ENCO LISCENIA

AREA: EQUIPOS E INSTRUMENTOS DE MICROSCOPÌA

TEMA: MICROSCOPÌA DE CONTRASTE DE FASES Y NORMASKI

DOCENTE: ESQUECHE ANGELES CARLOS

ESPECIALIDAD: LABORATORIO CLÍNICO

CICLO: III
TURNO:TARDE

CAJAMARMARCA :2019
 INTRODUCCION

 Para poder observar una célula o tejido, en microscopio de campo claro

convencional, hay que fijarla y hacerle una tinción, lo que implica, la muerte de
la célula en cuestión. Al pasar por todos estos procesos, algunas estructuras
puedan dañarse o cambiar su forma, por ello se utiliza este microscopio que
permite realizar exámenes inmediatos y observar células vivas con diferentes
grados de brillo y oscuridad.

HISTÒRIA
Hasta mediados del siglo XX un gran número de microscopios de luz habían
salido al mercado, destacando los microscopios de la firma Carl Zeiss, debido a
la colaboración entre Ernst Abbe y Zeiss. Esta firma logró la producción de
microscopios de gran calidad, gracias a la aplicación de la teoría de formación
de imágenes de Abbe, diseñando por primera vez un microscopio basado en
cálculos matemáticos y conocimientos de óptica geométrica. No obstante, ello,
se presentaban problemas muy grandes al tratar de observar muestras
transparentes a la luz visible, como es el caso de algunos seres vivos. En el
año 1932, el físico holandés Fritz Zernike desarrolló el Microscopio de
Contraste de Fase, con lo cual se le otorgó el Premio Nobel de Física en el año
1953. Su contribución consistió al afirmar que la imagen vista bajo un
microscopio convencional, es formada por el objetivo del microscopio, y
finalmente se observa en el ocular. Si la muestra no absorbe la luz, no habrá
esencialmente contraste en la imagen visible (será toda blanca); por ejemplo, la
mayoría de las células vivas absorben poca luz (a excepción de las células
rojas de la sangre y los cloroplastos) y, por lo tanto, son difíciles de visualizar a
través de un microscopio convencional. Por otro lado, aunque las células
absorben poca luz, tienen diversos espesores y diversos índices de refracción
en sus partes, lo que conduce a las diferencias de fase de las ondas de luz que
pasan a través de ellas. La fase de un haz de luz es inobservable a la vista
(apenas se ve la intensidad, no la fase). Zernike calculó la manera de hacer
que las diferencias de fase se observaran en la imagen como en la intensidad,
logrando así, visualizar detalles que no eran posibles apreciar en un
microscopio convencional. Este tipo de microscopios se utiliza habitualmente
para estudiar células vivas.

MICROSCÒPIO DE CONTRASTE DE FASES Y NOMARSKI

MICROSCÒPIO DE CONTRASTE DE FASES:

Para poder observar una célula o tejido al microscopio de campo claro

convencional hay que fijarla y hacerle una tinción, lo que implica, la muerte de
la célula en cuestión. Esto siempre ha sido una preocupación para los expertos
en el campo del estudio celular, debido que, al pasar por todos estos procesos,
algunas estructuras pueden dañarse o cambiar su forma. Para esto se utiliza el
microscopio de contraste de fase (entre otros métodos más modernos), que
permite realizar exámenes inmediatos y observar células vivas.

La microscopía de contraste de fase, fue desarrollada fundamentalmente por

Zernike en 1932. Se basa fundamentalmente en el retraso que se produce en
las ondas de luz al atravesar objetos de distintos índices de refracción,
aprovechando y amplificando dichos retrasos.

El microscopio de contraste de fase permite observar células sin colorear y

resulta especialmente útil para células vivas.
Este aprovecha las pequeñas diferencias de los índices de refracción en las
distintas partes de una célula y en distintas partes de una muestra de tejido. La
luz que pasa por regiones de mayor índice de refracción experimenta una
deflexión y queda fuera de fase con respecto al haz principal de ondas de luz
que pasaron la muestra. Aparea otras longitudes de onda fuera de fase por
medio de una serie de anillos ópticos del objetivo y del condensador, anula la
amplitud de la porción fuera de fase inicial del haz de luz y produce un
contraste útil sobre la imagen. Las partes oscuras de la imagen corresponden a
las porciones densas del espécimen; las partes claras de la imagen
corresponden a porciones menos densas. Por lo tanto, estos microscopios se
utilizan para observar células vivas, tejidos vivos y cortes semifinos no
coloreados.
Dos modificaciones del microscopio de fase son el microscopio de interferencia
y el microscopio de interferencia diferencial.

CONSTITUCIÓN DEL MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASE

Fundamentalmente el microscopio de contraste de fase es un microscopio

óptico de campo claro con algunas modificaciones, como objetivos
y condensadores especiales.
El condensador presenta un disco que proyecta un haz de luz con forma
anular, y en la lente de salida de los objetivos, se agregan unos “anillos de
fase”, que son discos transparentes con un diseño en relieve, cabe destacar
que existen dos tipos diferentes de anillos de fase, denominados positivo y
negativo, los cuales tienen distintos efectos sobre la luz y por lo tanto, las
imágenes se ven diferentes en cada uno, esto se explicará más adelante.

 Objetivos: En la de la derecha, se muestra un corte de un objetivo, mostrando

el disco de fase. Hay que considerar además que cada una de esta parte no es
única, sino que existen varios juegos de condensadores y de objetivos,
dependiendo de la ocasión y el zoom que se necesite

Diafragma Anular del Condensador y Anillo de Fase o Placa de Difracción.

Anillo de Fase

Lente del Condensador

Oscurecida en el Centro
Funciones del Condensador

Cuenta con un dispositivo similar al del campo oscuro que forma un cono de
luz hueco en el centro. Su sistema óptico descompone la luz en dos partes:

 Luz que llega a velocidad normal al ocular

 Luz que llega retrasada ¼ de longitud de onda respecto a la primera.

Para lograr dicho retardo, se necesita un objetivo especial.

Funciones del Objetivo

Contiene en su interior, una Placa de Fase o Placa de Difracción que es

un anillo ranurado a manera de disco dentro del tubo del sistema de lentes
objetivos, el cual es un disco de vidrio óptico, recubierto con una fina capa
metálica para absorber la luz, así como con una capa de material dieléctrico,
que retarda la luz.

Así, la luz que pasa por el exterior del anillo (luz desviada) se retrasa ¼
de longitud de onda con respecto a la que pasa por su interior (luz no desviada)
MECANISMO DE FUNCIÓN DEL MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE
FASES

La luz proveniente de la muestra es descompuesta por el condensador en 2

partes: los rayos no desviados que llegan con velocidad normal al ocular y los
rayos desviados y retrasados ¼ de longitud de onda con respecto a los
primeros

Al pasar por el objetivo, el anillo de fase que se encuentra dentro de él

hace que la luz que pasa por su exterior (luz desviada), se retrase ¼ con
respecto a la que pasa por el interior (luz no desviada)

Ambos componentes de la luz siguen su curso normal y llegan al ocular,

pero uno de los rayos (luz desviada que pasó por el exterior del anillo) llega
atrasado, retardándose en total ½ de longitud de onda. (¼ del condensador y ¼
del anillo de fase).

Así, se forman 2 haces de luz, uno retrasado en su longitud de onda con

respecto al otro.

El ojo humano distingue así el objeto a observar oscurecido sobre un

fondo brillante.

FUNDAMENTOS FÍSICOS:

Este microscopio se basa en que la luz, al atravesar objetos con distintos

índices

de refracción, experimente retrasos (o desfases), sin embargo, estos no son

tan notorios como para poder observarlos, el microscopio de contraste de fase,
mediante las dos adaptaciones que aparecen a la derecha, acentúa dichos
retrasos, haciendo que zonas con distintos índices de refracción se traduzcan
en una variación de contraste lo cual puede ser observado.

La manera de funcionar es la siguiente: Por medio del condensador, se logran

separar los rayos luminosos que no son difractados por el objeto de los que no
lo hacen, al pasar por la muestra, los rayos que atraviesan objetos más densos,
experimentan un retraso de un cuarto de lambda, y al pasar por el anillo de
fase estos rayos, debido a la forma del anillo de fase, estas ondas se retrasan
un cuarto de lambda más, en cambio, las que no se han retrasado, pasan por
una parte más delgada del anillo de fase y no se siguen retrasando. Entonces
estos desfases de las ondas luminosas se perciben como diferencias en el
contraste, en distintos tonos de gris. Además, el anillo de fase disminuye la
intensidad de la luz. Además, existen distintas formas de discos de fase,
positivos y negativos, los que tienen distintos efectos sobre la luz difractada,
haciendo que las imágenes se vean de diferente manera dependiendo cual se
use.

TIPOS DE CONTRASTE

Contraste de fase oscuro o positivo: cuando los rayos de luz, la desviada y la

no desviada tienden a cancelarse creando una interferencia destructiva y hacer
que el objeto aparezca mucho más oscuro que los alrededores.

Contraste de fase brillante o negativo: se presenta cuando retrasamos la luz no

desviada y la hacemos 1/4 de longitud de onda menor, lo que hace que salga al
tiempo con la luz desviada, que tiene un retraso de 1/4 de longitud de onda,
logrando de esta manera que salgan al mismo tiempo y se recombinen para
dar brillo, creando una interferencia constructiva; aumentando en esta forma el
objeto mientras su contorno permanece con menos intensidad.
 Aquí tenemos un claro ejemplo:
Vistos con contraste positivo (a la derecha) y en contraste negativo (a la
derecha)

VENTAJAS DESVENTAJAS
Produce una imagen brillante con un Alto costo del equipo.
fondo oscuro, sin halos de difracción
de una célula viva.

Determinación del índice de Costo alto y mantenimiento

refracción. cuidadoso de la muestra de
células vivas.

 DIFERENCIAS ENTRE MICROSCOPIO ÓPTICO Y MICROSCOPIO DE

CONTRASTE DE FASES

 El Microscopio de Contraste de Fases Contiene: Diafragma anular en el

Condensador que consta de un anillo transparente con la parte central
oscurecida y que forma un cono de luz hueco como el del microscopio
de campo oscuro.
 En el microscopio de contraste de fases se puede observar la morfología
de las células lo que el microscopio óptimo no ocurre.

NOMARSKI

La óptica Nomarski u Óptica de Contraste Interferencial (DIC), por sus siglas en

inglés) es una técnica de microscopía de luz que emplea filtros polarizantes y
prismas para producir imágenes impresionantes con bastante
tridimensionalidad.  Este tipo de microscopía se caracteriza por su buena
resolución y contraste que ayudan a discernir tanto detalles superficiales como
estructuras internas.  Además, el uso de prismas permite obtener imágenes de
colores brillantes sin necesidad de aplicar protocolos de tinción, ni de
preparación de muestras.

CONCLUSIONES

 He concluido que el microscopio de contraste de fases es un

instrumento muy importante para el estudio de las células vivas ya que
gracias a ello estudiamos la morfología y estructura celular.

 Por otro lado, he concluido que para un buen estudio de células vivas
tenemos que ser un buen equipo especializado y entrenado.

 Así como también nos permite un buen resultado con respecto al estudio
celular este instrumento es muy costoso.
REFERÈNCIAS BIBLIOGRÀFICAS

https://histoptica.com/de-contraste-de-fase/

https://microscopiosonline.com/microscopio-de-contraste-de-fases/

http://morfoudec.blogspot.com/2008/07/microscopa-de-contraste-de-fase.html

https://es.slideshare.net/gemanoriega26/microscopio-con-contraste-de-fases