CARACTERISTICAS CULTURALES DE BACTERIAS CULTIVABLES

GUIDO E. VILLOTA CALVACHI

IVÁN D. OTERO RAMIREZ

GRUPO DE BIOTECNOLOGIA MICROBIANA

UNIVERSIDAD DE NARIÑO

2009

INTRODUCCION

En la naturaleza, las bacterias usualmente crecen formando conglomerados en

poblaciones que contienen un buen número de especies. Para realizar un adecuado
estudio y poder caracterizar una especie bacteriana individual se hace necesario partir de
un proceso de aislamiento donde se observen los diferentes morfotípos microbianos
presenten en una muestra, los cuales se repican hasta obtener cultivos puros con colonias
aisladas que poseen diferentes morfologías, la cual puede ser evaluada desde un punto de
vista microscópico o macroscópico como colonias bacterianas apreciables sobre un medio
de cultivo.

Cuando las bacterias crecen en la superficie de un medio de cultivo sólido, las células en
división permanecen aproximadamente fijas en su posición y forman masas de muchos
millones de células que pueden variar desde un tamaño diminuto, apenas visible, hasta
masas de varios milímetros de diámetro.

La forma, margen, elevación, superficie, textura, propiedad óptica, tamaño, color y

configuración de las colonias bacterianas son caracteres macroscópicos muy orientativos
que permiten realizar una aproximación a los principales grupos bacterianos
proporcionando las bases fundamentales para su estudio sistemático y de identificación.

Se debe tener en cuenta que estas características dependen a menudo de la naturaleza

del medio de cultivo (cabe destacar que las características de una colonia deben
estudiarse siempre sobre el mismo tipo de medio de cultivo, para evitar las variaciones
surgidas por la diferente composición de los mismos) y de las condiciones de incubación.
La mayoría de las bacterias se multiplican rápidamente y requieren un periodo de
incubación de aproximadamente 24 horas en una atmosfera que favorezca su desarrollo y
a una temperatura optima. Por lo tanto, es recomendable mantener estables las
condiciones de crecimiento o especificarlas al realizar la descripción (Díaz Martin 2006;
Pírez y Mota 2008 - 2009).

La identificación de las cepas bacterianas con las que podemos tener contacto en los
diferentes trabajos de investigación es una tarea bastante compleja y que requiere del
desarrollo de diferentes técnicas moleculares y bioquímicas que pueden demandar
tiempo y dinero; no obstante, una aproximación inicial para la identificación o
diferenciación bacteriana es la descripción de sus atributos culturales.

Esta guía esta encaminada a familiarizar al investigador con la terminología utilizada y

facilitar la descripción de morfotípos, para lo cual se ha realizado una compilación de
varios esquemas utilizados y así obtener una buena descripción basada en 9 aspectos que
se explican a continuación:

1. FORMA: Hace referencia al aspecto general que es observable para cada colonia.
Dentro de las diferentes formas de las colonias bacterianas se pueden encontrar:

PUNTIFORME CIRCULAR FILAMENTOSA

IRREGULAR RIZOIDE ESPIGADA

2. MARGEN: El margen o borde de la colonia puede ser una característica importante

en la identificación de un microorganismo. Los principales márgenes son:

ENTERO ONDULADO LOBULADO

IRREGULAR O ERIZADO FILAMENTOSO O BRANQUIADO HILOS

3. ELEVACIÓN: Describe la “vista de lado” de la colonia y puede ser:

PLANA ELEVADA CONVEXA

PULVINADA UMBILICADA UMBONADA

CRECIMIENTO HACIA DENTRO DEL MEDIO MONTAÑOSA

4. SUPERFICIE:

LISA RUGOSA PULVERULENTA

 ÁSPERA SECA

5. TEXTURA O CONSISTENCIA: Las colonias bacterianas pueden tener una

consistencia variable, desde seca y frágil a grasienta y cremosa o viscosa y
pegajosa. Esta característica sólo se aprecia cuando tocamos las colonias con el asa
de siembra.

Podremos observar colonias "duras" que se deslizan fácilmente por la superficie

del medio, siendo difícil manipularlas con el asa, a menudo estas colonias se
fragmentan al intentar cogerlas. Otras colonias tienen apariencia cremosa,
generalmente de superficie brillante y fácil de manipular con el asa. Cuando la
consistencia de la colonia es mantecosa es fácil obtener pequeñas porciones de la
misma y quedan bien adheridas al asa de siembra. Algunas veces se encuentran
colonias extremadamente viscosas que tienden a formar filamentos cuando se
manipulan con el asa. Las principales características de textura en las colonias son:

VISCOSA MEMBRANOSA FRAGIL

 CREMOSA PEGAJOSA

6. PROPIEDAD OPTICA: Esta característica hace referencia al comportamiento que

presentan las colonias bacterianas frente a la luz. En algunas ocasiones se hace
necesario la utilización de una lupa para poder determinar esta característica, esto
debido al tamaño de la colonia. Las principales son:

BRILLANTE TRANSLUCIDA

OPACA

7. TAMAÑO: El tamaño de las colonias bacterianas es, en condiciones de cultivo

favorables, bastante uniforme para cada especie o tipo. La visualización del
tamaño se suele hacer a simple vista, aunque a veces es preferible utilizar lupas o
estereoscopios para poder discernir con mayor claridad las características
 morfológicas a observar. Las colonias de estreptococos, por ej., son relativamente
pequeñas (menos de 1 mm de diámetro), mientras que las de estafilococos o las
de algunos bacilos pueden alcanzar hasta 1 cm de diámetro. Existen ligeras
variaciones de tamaño de las células bacterianas dentro de algunas especies,
siendo mayores las fluctuaciones entre las formas bacilares que entre las formas
esféricas.

El tamaño de las colonias bacterianas podemos expresarlo en las siguientes

categorías:
 Pequeñas o puntiformes: 1 mm de diámetro o menor
 Medianas: hasta 4 mm de diámetro
 Grandes: mayores de 4 mm de diámetro

El tamaño de las colonias debe ser considerado y medido en la parte final de la

zona de aislamiento, que es donde presentan su máximo tamaño. No deben
valorarse más que colonias bien aisladas.

8. CONFIGURACION: conformación?
9. COLOR: Esta Característica que hace referencia a la pigmentación que se observa
de la colonia a describir
BIBLIOGRAFIA:

1. M. Pírez, M. Mota, Temas de Bacteriología y Virología Médica: Morfología y

Estructura Bacteriana. Segunda edición Corregida, Oficina del libro FEFMUR,
Uruguay 2006.
2. Gustavo A. Díaz Martín, Fundamentos y Técnicas de Análisis Microbiológicos:
Morfología y Estructura Bacteriana 2, Madrid, Curso 2008 – 2009.
3. Diane Davis, General Microbiology Laboratory, Rutgers; The State University of
New Jersey, 2009.
4. Harley - Prescott, Laboratory Exercises in Microbiology, Fifth edition, McGraw-Hill,
2002.
5. Benson, Microbiological Applications: Laboratory Manual in General Microbiology,
Eighth Edition, McGraw-Hill, 2001.
6. Breakwell, D; Robison, R; Adams, C; Smith, K. Department of Microbiology and
Molecular Biology Brigham Young University 2007.
 ANEXOS

ANEXO 1: FOTOGRAFIAS Y DESCRIPCION DE DIFERENTES MORFOLOGIAS

MORFOLOGIA DE COLONIAS
(Breakwell, D; et al 2007)

Figura 1 Figura 2 Figura 3 Figura 4 Figura 5

Serratia Staphylococcus Streptomyces Corynebacteriu Sinorhizobium

marcescens aureus albus m xerosis meliloti
Figura 6 Figura 7 Figura 8 Figura 9 Figura 10

Lactobacillus Serratia Streptococcus Streptococcus Streptococcus

plantarum marcescens pneumoniae pneumoniae pneumoniae
Figura 11 Figura 12 Figura 13 Figura 14 Figura 15

Aislado no Aislado no Aislado no Pasteurella Nocardia

identificado identificado identificado multocida asteroides
Figura 16 Figura 17 Figura 18 Figura 19 Figura 20

Streptomyces Mycobacterium Mycobacterium Bacillus

albus smegmatis Kurthia sp marinum thuringiensis
Figura 21 Figura 22 Figura 23 Figura 25
Figura 24

Aislado no Bacillus Streptomyces Bacillus

Bacillus subtilis
identificado anthracis albus subtilis
Figura 28 Figura 29 Figura 30
Figura 26 Figura 27

Aislado no Aislado no Bacillus

Bacillus subtilis Bacillus subtilis
identificado identificado licheniformis
Figura 31 Figura 32 Figura 33 Figura 34 Figura 35

Thiomonas-like Thiomonas-like
Thiomonas Mycobacteriu Aislado no Nocardia
bacteria bacteria m smegmatis identificado asteroides
Figura 36 Figura 37 Figura 38 Figura 39 Figura 40

Pseudomona Streptomyces Streptococcus Lactobacillus Aislado no

aeruginosa albus salivarius plantarum identificado.

Figura 42 Figura 44 Figura 45

Figura 41 Figura 43

Serratia Bacillus Streptomyces

Kurthia sp No identificado
marcescens licheniformis albus
FIG. 1. Forma circular. Serratia marcescens cultivada en agar tripticasa de soya.

FIG. 2. Forma circular. Staphylococcus aureus cultivada en agar tripticasa de soya.

FIG. 3. Forma circular. Streptomyces albus cultivada en agar nutriente. Nótese que el agar presenta un
hundimiento debido al crecimiento de la bacteria. La bacteria produce exoenzimas que hidrolizan el agar.

FIG. 4. Forma circular, margen entero. Corynebacterium xerosis cultivada en agar tripticasa de soya.

FIG. 5. Forma circular, margen entero. Sinorhizobium meliloti cultivada en agar tripticasa de soya.

FIG. 6. Forma circular, margen entero. Lactobacillus plantarum cultivada en agar para Lactobacillus.

FIG. 7. Forma circular, margen entero. Serratia marcescens cultivada en agar Columbia.

FIG. 8. Forma circular, margen entero. Streptococcus pneumoniae cultivada en agar sangre de cordero al
5%. Se muestra la hemolisis beta típica de S. pneumoniae creciendo anaeróbicamente.

FIG. 9. Forma circular, margen entero. Cepa mucoide de Streptococcus pneumoniae cultivada en agar sangre
de cordero. El fenotipo mucoide es debido a la presencia de un polisacárido grueso en la capsula.

FIG. 10. Forma circular, margen entero. Cepa no mucoide de Streptococcus pneumoniae cultivada en agar
sangre de cordero. Este fenotipo clásicamente presenta colonias pequeñas, lisas, de 2 a 3mm, con un centro
concavo. En comparación al fenotipo mucoide, esta contiene un `polisacárido atenuado en la capsula.

FIG. 11. Forma circular, margen entero. Aislado no identificado. Cultivado en agar tripticasa de soya.

FIG. 12. Forma circular, elevacion convexa, margen entero. Cultivado en agar tripticasa de soya.

FIG. 13. Forma circular, elevacion convexa, margen entero. Cultivado en agar tripticasa de soya.
FIG. 14. Forma circular, elevacion umbonada. Pasteurella multocida cultivada en agar sheep blood al 5%.

FIG. 15. Forma filamentosa. Nocardia asteroides Cultivado en agar tripticasa de soya.

FIG. 16. Forma filamentosa, margen débilmente ondulado. Streptomyces albus Cultivada en agar nutriente.

FIG. 17. Forma Irregular. Mycobacterium smegmatis cultivada en agar trypticasa de soya.

FIG. 18. Forma debilmente irregular. Kurthia sp. Cultivada en agar trypticasa de soya.

FIG. 19. Forma Irregular. Mycobacterium marinum cultivado en agar Mycobacterium 7H11.

FIG. 20. Forma debilmente irregular. Bacillus thuringiensis cultivada en agar sangre de cordero al 5%.

FIG. 21. Forma irregular, margen ondulado. Aislado no identificado cultivado en agar tripticasa de soya

FIG. 22. Forma irregular, margen debilmente ondulado. Bacillus anthracis cultivado en Agar
Columbia. Notece the typical ground glass appearance.

FIG. 23. Forma irregular, margen ondulado, Streptomyces albus cultivado en agar nutriente.

FIG. 24. Forma irregular, margen ondulado. Bacillus subtilis.

FIG. 25. Forma irregular, margen ondulado. Bacillus subtilis.

FIG. 26. Forma irregular, margen ondulado. Bacillus subtilis.

FIG. 27. Forma irregular, margen ondulado. Bacillus subtilis.

FIG. 28. Forma irregular, margen lobulado. Aislado no identificado, cultivado en Agar tripticasa de soya.

FIG. 29. Forma irregular, margen lobulado. Aislado no identificado, cultivado en Agar tripticasa de soya.

FIG. 30. Forma irregular, margen lobulado. Dos colonias de Bacillus licheniformis cultivado en Agar sangre
de cordero al 5%.

FIG. 31. Forma irregular, margen lobulado. Bacterias que oxidan hierro parecidas a Thiomonas aisladas de
aguas de mina.

FIG. 32. Forma irregular, margen lobulado. Bacterias que oxidan hierro parecidas a Thiomonas aisladas de
aguas de mina.

FIG. 33. Forma irregular, margen lobulado. Morfología rugosa de la colonia de la cepa Silvestre de
Mycobacterium smegmatis (lado izquierdo); el fenotipo mutante (lado derecho) es liso y translucido cuando
es observado a la luz directa.

FIG. 34. Parte de una colonia de forma irregular y margen lobulado. Aislado no identificado cultivado en agar
tripticasa de soya.

FIG. 35. Forma rizoide. Colonias maduras de Nocardia asteroides cultivada en agar tripticasa de soya.

FIG. 36. Elevación plana. Pseudomona aeruginosa. cultivada en agar tripticasa de soya.

FIG. 37. Elevacion convexa. Streptomyces albus Cultivado en agar nutriente.

FIG. 38. Elevacion Pulvinada. Streptococcus salivarius cultivado en Agar mitis – salivarius

FIG. 39. Elevacion Pulvinada. Lactobacillus plantarum cultivado en agar lactobacillus.

FIG. 40. Elevacion Pulvinada. Aislado no identificado, cultivado en agar tripticasa de soya.

FIG. 41. Elevacion débilmente umbonada. Kurthia sp. cultivado en agar tripticasa de soya.

FIG. 42. Elevación débilmente umbonada. Serratia marcescens cultivado en agar tripticasa de soya.

FIG. 43. Elavacion Umbonada. Aislado no indentificado cultivado en agar nutrient.

FIG. 44. Elevacion umbonada. Bacillus licheniformis cultivado en Agar Sangre de Cordero al 5%.

FIG. 45. Margen filamentoso. Streptomyces albus cultivado en agar nutriente.

ANEXO 2: CODIGOS PARA LAS CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS

CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS
No. 1. FORMA 2. MARGEN 3. ELEVACION 4. SUPERFICIE
1 Puntiforme Entero Plana Lisa
2 Circular Ondulado Elevada Rugosa
3 Filamentosa Lobado Convexa Aspera
4 Irregular Forma de Hilos Pulvinada Purvelurenta
5 Rizoide Irregular Umbilicada Seca
6 Espigada Filamentosa Umbonada
7 Crecimiento hacia dentro del medio
8 Montañosa
9
10
11
12
 CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS
No. 5. TEXTURA o CONSISTENCIA 6. PROPIEDAD OPTICA 7. TAMAÑO 8. CONFIGURACION
1 Viscosa Brillante Pequeño o Puntiforme Redonda
2 Membranosa Opaca Mediano Redonda con Margen festoneado
3 Fragil Translucida Grande Redonda con margen elevado
4 Cremosa Arrugada
5 Pegajosa Concentrica
6 Irregular y extendida
7 Filamentosa
8 Forma de L
9 Redonda con margen radeado
10 Filiforme
11 Rizoide
12 Compleja
ANEXO 3: CARTA DE COLORES

TONALIDADES ROJAS TONALIDADES GRISES

Rojo indio (RRI) Gris Claro (GGC)

Coral Claro (RCC) Plateado (GP)
Salmon (RS) Gris Oscuro (GGO)
Salmon Oscuro (RRO) Gris (GG)
Salmon Claro (RSC) Gris Pizarra Claro (GGPC)
Gris Pizarra (GGP)

Rojo (RR) Gris Pizarra Oscuro (GGPO)

Negro (GN)
Rojo ladrillo (RRL)
Rojo Oscuro (RRO)

TONALIADES MARRONES

TONALIDADES ROSADAS

Piel (MP)
Madera (MM)
Rosado (RdR) Sandia (MS)
Rosado Claro (RdC) Oro (MO)
Rosado intense (RdRI) Oro Oscuro (MOO)

Violeta (RdV) Peru (MPe)

Chocolate (MCH)
Rojo Violeta Palido (RdRVP)
Siena ( MSi)
Marron (MMa)
Vino Tinto (MVT)
TONALIDADES NARANJA

Coral (NC)
Tomate (NT)
Naranja Oscuro (NNO)
Naranja (NN)
TONALIDADES PURPURA TONALIDADES VERDES

Violeta (PV) Verde Cesped (VVC)

Orquidea (PO) Verde Profundo (VVP)
Fucsia (PF) Verde Lima (VVL)
Violeta Azulado (PVA) Verde Pálido (VVPa)
Violeta Oscuro (PVO) Verde Claro (VVCl)
Púrpura (PP) Verde Primavera Suave (VVPS)
Indigo (PI) Verde Primavera (VVPr)
Azul Pizarra (PAP) Verde Mar Claro (VVMC)
Verde Mar Oscuro (VVMO)
Verde Bosque (VVB)
Verde (VV)
TONALIDADES AMARRILLAS
Verde Oscuro (VVO)
Verde Amarrillento (VVA)
OliveDrab
Verde Oliva (VVOl)
Amarillo Oscuro (AAO)
Verde Oliva Oscuro (VOO)
Amarillo Claro (AAC)
Caqui (AC)
Caqui Oscuro (ACO)