UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR

MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS
LABORATORIOS
DOCENTE: YUMAR E. RUIDIAZ MENDEZ

DETERMINACIÓN DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES MEDIANTE LA TECNICA DE

FILTRACIÓN POR MEMBRANA EN AGUA POTABLE (GRIFO).

1 OBJETIVO: Determinar la presencia de coliformes totales y fecales mediante la técnica de

filtración por membrana en agua Potable. (grifo).

2 ALCANCE: Abarca a todos los bacilos gram negativos, aerobios y anaerobios facultativos,
no formadores de esporas que fermentan la lactosa a una temperatura de 35ºC ( Coliformes
totales) o a una temperatura de 44.5 ºC , con producción de gas (Coliformes fecales).

3 RESPONSABILIDAD: El encargado de hacer cumplir el procedimiento de análisis es el

docente del área de microbiología de alimentos, el cual debe tener una formación de
microbiólogo o bacteriólogo con una experiencia de 2 años como mínimo.

4 DOCUMENTOS DE REFERENCIA:
4.1. HOLGUIN, M. et, al Manual de técnicas de análisis para el control de calidad
microbiológico para consumo humano. División de laboratorios de alimentos y bebidas
alcohólicas INVIMA 2001.
4.2. LUNA, G. Manual Operativo de análisis microbiológico para alimentos universidad de
Pamplona 1998.

5. CONTENIDO:

5.1. FUNDAMENTO: Es el método consiste en hacer pasar la muestra a través de un filtro de

membrana impermeable a los microorganismos, después de la filtración quedas retenidas los
microorganismos sobre la superficie de la membrana, la cual posteriormente es colocadas en un
medio de cultivo especifico en este caso EMB.

5.2. DEFINICIONES:
5.2.1.Agar EMB: (agar eosina azul de metileno ) Medio selectivo y diferencial que permite
el Aislamiento y detección de Enteróbacterias o bacilos coliformes. Este medio contiene
peptona, lactosa, fosfato dipotasico agar, eosina azul de metileno.
5.2.2. Microorganismo viables: Son aquellos microorganismos que tienen la propiedad de
poder reproducirse, en el caso de las bacteria de formar colonias.
5.2.3. UFC: Unidades formadoras de colonias.
5.2.4. Coliformes fecales: Son todos los bacilos gram negativos, aerobios y anaerobios
facultativos, no formadores de esporas que fermentan la lactosa a una temperatura de 44.5 ºC
, con producción de gas.
5.2.5. Coliformes totales: : Son todos los bacilos gram negativos, aerobios y anaerobios
facultativos, no formadores de esporas que fermentan la lactosa a una temperatura de 35ºC.

5.3. CONDICIONES GENERALES: los coliformes son los indicadores mas reconocidos de
contaminación debido a son indicadores útiles de procesos de saneamientos inadecuados, su
presencia en un numero alto en un alimento procesado indica que la probabilidad de
crecimiento de bacterias patógenas es alta. en el caso de los coliformes fecales indica una
contaminación probable de fuente fecal

5.4. MATERIALES Y REACTIVOS:

5.4.1. Pinzas esteriles
5.4.2. Beaker esteril
5.4.3. Erlenmeyer estéril
5.4.4. Agar EMB
5.4.5. Cajas de petri estériles
5.4.6. Pipetas

5.5. EQUIPOS:
5.5.1. Unidad de filtración estéril
5.5.2. Contador de colonias
5.5.3. Incubadora a 35ºC +/- 2ºC.
5.5.4. Estufa

5.6. PROCEDIMIENTO:
5.6.1 TECNICA DE FILTRACIÓNPOR MEMBRANA
5.6.1.1. Preparar la unidad de filtración
5.6.1.2. verter 100 ml de la muestra en el embudo colector Y Aplique vació
para realizar la filtración
5.6.1.3. Al finalizar la filtración apague la bomba de vació, desenrosque el
El embudo colector del recipiente base.
5.6.1.4. Retire la membrana con ayuda de las pinzas estériles y colóquelas sobre las
Cajas de petri que contienen el medio EMB.
5.6.1.5. Incube las cajas de petri a una temperatura de 35 a 35ºC por un tiempo de 22-
24 para determinar coliformes totales
5.6.1.6 Incube las cajas petri a una temperatura de 44.5ºC por un tiempo de 22 -24
horas para determinar coliformes fecales
5.6.1.7. Para coliformes totales realice el conteo y escoja las cajas que presenten entre
20 y 80 colonias, Las colonias de interés son violeta oscuro o púrpura con o sin
brillo metálico.
5.6.1.8. Para coliformes fecales: Realice el conteo y escoja las cajas que presenten
entre 20 y 60 colonias. Las colonias de interés son violeta oscuro, verde o
negras con superficie brillante metálica.

5.6.1.9. El calculo del numero de coliformes se hace aplicando la siguiente formula:

Colifomes en 100 ml = nº de colonias típicas * 100
ml de muestra filtrada.

5.7. Calculo, conclusión y análisis de resultado:

5.8 ANEXOS: N.A

5.9. REGISTRO: Registro de verificación y aprobación.

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MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS
LABORATORIOS

DOCENTE: YUMAR E. RUIDIAZ MENDEZ

DETERMINACIÓN DE Pseudomona aeruginosa EN AGUA TRATADA Y EMBOTELLADA.

1 OBJETIVO: Determinar la presencia de Pseudomona aeruginosa en agua tratada y

embotellada.

2 ALCANCE: Abarca la determinación de Pseudomona aeruginosa en agua tratada y

embotellada.

3 RESPONSABILIDAD: El encargado de hacer cumplir el procedimiento de análisis es el

docente del área de microbiología de alimentos, el cual debe tener una formación de
microbiólogo o bacteriólogo con una experiencia de 2 años como mínimo.

4 DOCUMENTOS DE REFERENCIA:
4.1. HOLGUIN, M. et, al Manual de técnicas de análisis para el control de calidad
microbiológico para consumo humano. División de laboratorios de alimentos y bebidas
alcohólicas INVIMA 1998
4.2. LUNA, G. Manual Operativo de análisis microbiológico para alimentos universidad de
Pamplona 1998.

5. CONTENIDO:

5.1. FUNDAMENTO: Este método consiste en determinar la presencia de pseudomona

aeruginosa en agua embotellada mediante un medio de cultivo selectivo y diferencial que
permite el crecimiento de diferentes especies de Pseudomonas.
5.2. DEFINICIONES:
5.2.1 Agar cetrimide: Medio selectivo y diferencial para pseudomonas debido a que la
cetrimida derivado del amonio cuaternario es un agente que selecciona este microorganismo,
compuesto por peptona, cloruro de magnesio, sulfato potasico, bromuro de N-cetil N,N,N-
Trimetil amonio y agar.
5.2.2. microorganismo viables: son aquellos microorganismos que tienen la propiedad de
poder reproducirse, en el caso de las bacteria de formar colonias.
5.2.3. UFC: Unidades formadoras de colonias.
5.2.4. Pseudomona aeruginosa: bacilo gram negativo aerobio, no formador de esporas, movil
que tiene la propiedad de producir pigmentos hidrosolubles azul verdosos llamados pioverdina
o piocianina.

5.3. CONDICIONES GENERALES: Este microorganismo es caracterizado por que es el único

microorganismo no fermentador gram negativo que tiene la propiedad de producir piocianina a
una temperatura de 42 ºC.

5.4. MATERIALES Y REACTIVOS:

5.4.1. Cajas de petri esteriles
5.4.2. Beaker estéril
5.4.3. Erlenmeyer estéril
5.4.4. Agar cetrimide
5.4.5. Caldo lactosado con magnesio.
5.4.6. Cloroformo
5.4.7 Pipetas

5.5. EQUIPOS:
5.5.1. Incubadorasl
5.5.2. Contador de colonias
5.5.3. Incubadora a 35ºC +/- 2ºC.
5.5.4. Estufa

5.6. PROCEDIMIENTO:
5.6.1 DETERMINACIÓN DE Pseudomona aeruginosa EN AGUA TRATADA Y
EMBOTELLADA
5.6.1.1. Verter 100ml de agua embotellada en un erlenmeyer que contiene 100ml de
caldo lactosado con magnesio
5.6.1.2. Incubar a 37ºc por 24- 48 horas.
5.6.1.3 Pasado este tiempo adicionar 0.1 ml de la preparación anterior a cajas de petri
que contiene agar cetrimide.
5.6.1.4. Expandir la muestra por toda la superficie de la caja con ayuda de una varilla
de hockey o asa redonda
5.6.1.5. Incube las cajas de petri a una temperatura de 42ºC por un tiempo de 24 -48
horas, la aparición de cualquier crecimiento indica la presencia de Pseudomona
sp, la presencia de pigmentación azul verdosa o fluorescencia ( piocianinas) es
prueba presuntiva de P. aeruginosa.
5.6.1.6 Adicionar colonias presuntivas a 10 ml de agua peptonada e incube a 42ºc por
un tiempo de 24- 48 horas, hasta la aparición de color azul verdoso.
5.6.1.7. Añadir 2 ml de cloroformo a la preparación anterior, la capa cloroformica
subyacente a la capa acuosa se tiñe de azul. La producción de piocianinas
confirma la aparición de Pseudomona aeruginosa.

5.7. Conclusión y análisis de resultado:

5.8 ANEXOS: N.A

5.9. REGISTRO: Registro de verificación y aprobación.