CIENCIAS DE LA VIDA Y DE LA AGRICULTURA

INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA

PERFIL DEL PROYECTO INTEGRADOR

INFORME FINAL DEL PROYECTO INTEGRADOR

NIVEL: V
“COMPARACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE LOS ACEITES
ESENCIALES DE Pimpinella anisum L., Rosmarinus officinalis L. Y Zingiber officinale R.
FRENTE A Staphylococcus aureus”

GRUPO DE PROYECTO
Loor Stephany
Maldonado Helen
Solís Alejandra

SANGOLQUÍ-09/11/18
1. Título del proyecto

Comparación de la actividad antimicrobiana de los aceites esenciales de Pimpinella anisum L.,

Rosmarinus officinalis L. y Zingiber officinale R. frente a Staphylococcus aureus

2. Definición y Justificación del Problema

Las técnicas curativas tradicionales, especialmente el uso de plantas medicinales, todavía juegan
un papel importante para cubrir las necesidades básicas de salud en los países en desarrollo. En
los últimos años, las infecciones han aumentado en gran medida y los efectos de resistencia a los
antibióticos se convierten en un problema terapéutico cada vez mayor (OMS, 2015). La
resistencia de los organismos aumentó debido al uso indiscriminado de antibióticos comúnmente
utilizados para el tratamiento de enfermedades infecciosas. A pesar de que en el Ecuador existen
leyes que no permiten la venta libre de antibióticos, muchas empresas si lo hacen sin prescripción
médica, más que todo en ciudades pequeñas donde no existe un control constante en las ventas
(Eluniverso, 2016).

En los últimos años, la tendencia del uso de plantas medicinales ha aumentado, tanto en los países
desarrollados como en los países en desarrollo, ya que se ha establecido que los efectos
secundarios pueden ser mínimos o incluso inexistentes.

Unos de los productos naturales más utilizados son los aceites esenciales, que son líquidos
hidrofóbicos que contiene compuestos aromáticos volátiles de las plantas, que surgen de un
metabolismo secundario y que generalmente se encuentra en hojas, flores y tallos (OCW, 2015).
El aceite esencial se puede obtener por varios métodos, tal como: expresión, fermentación o
extracción, pero el método de destilación al vapor se usa más, comúnmente, para la producción
comercial. Se han encontrado durante mucho tiempo como una defensa química de la planta
contra insectos, hongos y otros invasores, por lo que poseen propiedades antibacterianas,
antifúngicas, insecticidas antivirales y antioxidantes (Ochando, 2017).

En el presente estudio se muestra la actividad de los componentes encontrados en los aceites

esenciales obtenidos de Pimpinella anisum L., Rosmarinus officinalis L. y Zingiber officinale R.
frente a bacterias de Staphylococcus aureus con el fin de identificar el mejor extracto para la
actividad antimicrobiana, para así poder exhibir una nueva alternativa al consumo natural.

3. Objeto de estudio

Algunos componentes de los aceites esenciales brindan actividades antimicrobianas que pueden
ser de gran importancia para prevenir infecciones causadas por bacterias como Staphylococcus
aureus. Dichos aceites se van a extraer de las especies Pimpinella anisum L., Rosmarinus
officinalis L. y Zingiber officinale R. comercializadas en la ciudad de Sangolquí-Ecuador.

4. Campo de investigación
La línea de investigación del proyecto es Biotecnología vegetal

Sub-línea: química de productos naturales.

5. Sistema de Objetivos

5.1. Objetivo General

 Comparación de la actividad microbiana de los tres aceites.

5.2. Objetivos Específicos:

 Extraer el aceite esencial de las tres plantas

 Analizar y comparar los componentes de los caites esenciales

obtenidos.

 Aplicación de los aceites obtenidos en los cultivos.

6. Hipótesis/ Idea a defender

Los aceites esenciales de Pimpinella anisum L., Rosmarinus officinalis L. y Zingiber officinale R.
presentan actividad antimicrobiana frente a Staphylococcus aureus.

7. Metodología

Extracción del aceite esencial

A partir de 1 kg de muestra seca se realizó la extracción mediante el método de arrastre con vapor
de agua. Una vez destilado se separó por diferencia de densidades entre el agua y el aceite
esencial, se trató con Na2SO4 (sulfato de sodio anhidro), se filtró y se guardó en un frasco de
vidrio de color ámbar bajo refrigeración (4 °C).

Rendimiento del aceite esencial (%RAE)

La determinación del porcentaje de rendimiento de aceite esencial (%RAE), se realizó por el

método gravimetría-volumétrico, aplicando la siguiente fórmula:

% RAE = Vol. AE (mL)/ Pmuestra (g) x 100

Dónde: Vol. AE : Volumen del aceite esencial obtenido en mililitros. Pmuestra : Peso de la
muestra a destilar en gramos.

Cromatografía de gases –espectrometría de masas (GC-SM)

Esta técnica está indicada para la separación de compuestos orgánicos volátiles y semivolatiles
esta combinación permite analizar y cuantificar compuestos de mezclas complejas con un alto
grado de efectividad, para determinar los metabolitos secundarios.

Evaluación de la actividad antimicrobiana del aceite esencial Metodo Kirby-Bauer

La técnica de eficacia antimicrobiana se realizó mediante el método de difusión en disco (Kirby-

Bauer) el cual define la actividad in vitro de un antibiótico frente a un microorganismo
determinado y refleja su capacidad para inhibir el crecimiento de una bacteria o población
bacteriana.

Aplicación de los discos a las placas inoculadas

Los discos con la muestra del aceite esencial a tres concentraciones (50, 75 y 100 µL/mL) fueron
colocados tres discos por cada placa sobre el cultivo de Staphylococus aureus, se presionó
levemente para que queden adheridos, se incubaron a 35-37°C durante 18-24 hs.

8. Marco teórico
Un aceite esencial es una sustancia que se encuentra en diferentes tejidos vegetales posee un
aspecto fluido, su color depende de la planta que fue extraído; este fluido se encuentra segregado
por células específicas que se encuentran en distintas partes de las plantas como en las hojas
(romero, menta piperita) en las flores (lavanda) en la madera (cedro del Atlas) en la raíz (jengibre,
valeriana) y en las semillas (anís, cilantro, verde, zanahoria); se caracterizan especialmente por su
complicada composición química y su carácter vigorosamente aromático.
Antiguamente se los denominaba como “alma de las plantas” porque contiene muchos compuesto
químicos naturales que se han sacado provecho como en la aromaterapia; del millón de plantas
que existen en nuestro planeta solo se conoce aproximadamente 4000 aceites distintos; sin
embargo hay que tener en cuenta que no todas las plantas contienen estas sustancias o se
encuentran en concentraciones muy bajas lo que hace muy dificultoso su obtención.
Zingiber Officinale
TAXONOMÍA
Reino Plantae
Clase Liliopsida
Orden Zingiberales
Familia Zingiberaceae
Genero Zingiber
Especie Zingiber officinale

Imagen 1. Zingiber officinale

Pertenece a una de las especies más antiguas y populares utilizado en Oriente y
fundamentalmente en países árabes, China y en Inda; el uso de su raíz es universal se lo ocupa en
la cocina, pastelería, es el ingrediente principal de algunos cocteles; es conocida como planta
aromática ha sido usada desde hace mucho tiempo por su propiedades naturales y carácter
nutritivo ya que actúa como fagocito inmunoestimulante, posee un poder antiséptico. (Damian,
1996).
Su aceite esencial se extrae de la raíces de la planta y se obtiene por destilación de los rizomas se
presenta en estado más o menos fluido de color amarillo o algunas veces puede presentar color
claro y oscuro, es muy picante. Entre sus componentes principales están sesquiterpenos,
alcoholes sesquiterpénicos (isoborneol-linalol) y terpenos con citrol y resinas. (Ryman, 1995).

Rosmarinus officinalis

TAXONOMÍA
Reino Plantae
Clase Magnoliopsida
Orden Lamiales
Familia Lamiaceae
Genero Rosmarinus
Especie Rosmarinus officinalis

Para el método de extracción de su aceite es por destilación al vapor de las hojas, es utilizado
como analgésico, antidepresivo, cicatrizante, antiséptico, tónico, ayuda al crecimiento de cabello,
favorece la circulación de la sangre, alivia las enfermedades respiratorias. (Sánchez, 2016); sus
constituyentes químicos: Borneol (alcohol), cumínico (aldehído), acetato de bornilo (éster),
alcafor y cayeputol (acetonas), cariofileno (sesquiterpeno), cafeno y pineno (terpenos).
Illicium verum
TAXONOMÍA
Reino Plantae
Clase Magnoliopsida
Orden Austrobaileyales
Familia Illiciaceae
Genero Illicium
Especie Illicium verum

El fruto se encuentra constituido por folículos desecados, de este fruto se puede extraer abundante
aceite esencial, en su mayoría está constituido por trans-anetol aproximadamente de un 80 a 90%
y en su alrededor de un 5% de hidrocarburos monoterpénicos ( limonino, α-pineno) estos
componentes en el aceite esencial de anís verde desaparecen. Su aceite esencial posee acción
carminativa, expectorante y antiséptica, además se aprovecha como corrector del sabor y olor en
la industria alimentaria y en la licorería. (Vanaclocha, 1992); su aceite esencia se obtiene por
medio de la destilación de los frutos que tienen forma de estrella da como resultado un líquido
incoloro que a bajas temperaturas se puede solidificar. (Fco, 2006).
Métodos para la extracción de aceites esenciales
Método de la destilación por arrastre con vapor
Los aceites esenciales se caracteizan por tener puntos de ebullición muy altos y ser insolubles en
agua, sin embargo, puede ser separado de forma natural utilizando el punto de ebullicion del agua
uno de los métodos más sencillos es la destilación por arrastre con vapor , el cual aprovecha las
propiedades que tienen las moléculas del agua en estado de vapor asociandose con las moleculas
del aceite, en cuanto a su equipo su estructura es mjuy sencilla necesita un generador de vapor el
cual puede ser una simple olla depresión, se necesita una cámara de presión hermética donde
debe existir una entrada y salida de vapor donde se deposita el materila de las plantas que puede
ser hojas, semillas, madera, flores; donde el vapor condensa a liquido denuevo y se recoge en un
recipiente el cual se lo denomina vaso floretino. La extraccion se realiza en el momento que el
vapor por presion entra en contacto con las células de las partes de la planta y las rompe liberando
 la esencial y atrapandola en las gotas del agua del vapor y sulego estas se condensan por medio
del destilador como resultado da un aceite de alta pureza. (Olaya, 2003)
Cromatografía
Esta tecnica fue desarollada por primera vez en 1903 por Tswett un botánico que utilizo para
separar mezclas de coloranres de origen vegetal; el proceso de este metodo es poner en contacto
una fase estacionaria puede ser papel, gel o alúmina que actua de soporte y con un disolvente que
es la fase móvil, esto dependera de mayor o meno afinidad de los componentes y se podrá ver si
es más o menos arrastrado y será notoria la distancia que avanzará dando como resultado una
mancha de mayor o menor de . Los acietes senciales tiene componetes químicos como
terpenos y derivados estosabsorben la luz ultra violeta y esto es muy útil para detectar manchas
sobre la placa del cromatograma. (Fco, 2006)

9. Resultados esperados (Alcance del proyecto)

Pimpinella anisum L. constituido por metil chavicol como componente mayoritario, linalol,
canfeno.

Rosmarinus officinalis L. contiene Alfa pineno 15,3 Camfeno 5,7 Mirceno 4,9 Limoneno 3,7 1,8
cineol 21,5 Alcanfor 18,0 Borneol 3,7 Cariofileno 3,4.

Zingiber officinale posee neral y geranial (9.7-10.4% y 11.6- 14.0%, respectivamente),

zingibereno (7.7-8.4%), canfeno (5.4-6.4%), arcurcumeno (2.8-3.3%), a-farneseno (3.2-3.6%),
1,8-cineol geraniol y citronelol

Los aceites esenciales de Pimpinella anisum L., Rosmarinus officinalis L. y Zingiber officinale R.
muestran actividad antimicrobiana frente a Staphylococcus aureus.

Zingiber officinale R. muestra mayor actividad antimicrobiana sobre Staphylococcus aureus que
Pimpinella anisum L. y Rosmarinus officinalis L.

10. Viabilidad (Técnica, Humana, Financiera y ambiental)

Viabilidad Técnica

 Gracias a la Universidad de las Fuerzas Armadas “ESPE” que nos proporciona los laboratorios y
los materiales es posible realizar las pruebas y análisis requeridos en esta investigación. Además,
existe bibliografía confiable y accesible para sustentar los resultados obtenidos en el presente
trabajo.

Viabilidad Humana

 En base a los conocimientos adquiridos podemos realizar la extracción de los aceites esenciales
de anís, romero y jengibre, se determinó sus componentes mediante la cromatografía en capa
fina, y se analizó la actividad antimicrobiana de cada aceite frente a Staphylococus aureus.
 Viabilidad Ambiental

 Las muestras utilizadas para realizar este trabajo pertenecían a plantas con propiedades
medicinales, que son fácilmente adquiridas y asequibles, ninguna de las especies se encuentra
en peligro de extinción.

11. Cronograma
MES 1 MES 2 MES 3 MES 4
ACTIVIDAD
S1 S2 S3 S4 S1 S2 S3 S4 S1 S2 S3 S4 S1 S2 S3 S4
Selección del proceso a realizarse X
Recolección de las plantas que se
va extraer el aceite esencial x x x
Extracción de aceites esenciales por
cromatografía x x x
Extracción de aceites esenciales por
arrastre de vapor x x
Observación y Análisis de los
aceites esenciales x x x x
Análisis costo-beneficio x
Redacción de los resultados x x
Análisis estadistico x x x x

12. Bibliografía (Es la bibliografía inicial o de partida)

Eluniverso. (2016). Obtenido de

https://www.eluniverso.com/noticias/2017/07/23/nota/6293158/antibioticos-pierden-
eficacia-lucha-contra-bacterias
Ochando. (15 de Mayo de 2017). Obtenido de https://www.linkedin.com/pulse/uso-agron
%C3%B3micos-de-los-aceites-esenciales-especies-ochando-mart%C3%ADnez
OCW. (19 de Enero de 2015). Obtenido de http://ocw.upm.es/ingenieria-agroforestal/uso-
industrial-de-plantas-aromaticas-y-medicinales/contenidos/material-de-clase/tema7.pdf
OMS. (2015). Obtenido de https://www.who.int/mediacentre/news/releases/2015/antibiotic-
resistance-lacking/es/https://www.who.int/mediacentre/news/releases/2015/antibiotic-
resistance-lacking/es/
Fco, M. (2006). Manual práctico de aceites esenciales, aromasy perfumes . Spain: AIYANA.
Olaya, J. (2003). Guía de plantas y productos medicinales . Bogotá.
Ryman, D. (1995). Aromaterapia. Barcelona: Kairós.
Sánchez, M. (2016). Los Aceites Esenciales.
Sellar, W. (1996). Guía de Aceites Esenciales . Madrid: EDAF Chiles,S.A.
Vanaclocha, B. (1992). Fitoterapia . Barcelona: MASSON.
Damian, P. (1996). Aromaterapía. México: Lasser Press Mexicana, S.A