Análisis de compuestos plaguicidas organofosforados en muestras de aguas mediante determinación

por cromatografía de gases acoplada a un detector de nitrógeno fósforo (CG-NPD) previa

microextracción en fase sólida

1. INTRODUCCIÓN
Por décadas, el uso extensivo de plaguicidas organofosforados predominantemente en la agricultura ha
venido favoreciendo una mayor persistencia principalmente de los plaguicidas organoclorados debido a las
rápidas tasas de degradación de estos primeros[1]. Este hecho supone un riesgo ambiental que ha aumentado
al punto que se constituye en una preocupación y asunto de interés social debido a la presencia de estos
compuestos en las aguas de consumo. En el presente trabajo se propone el desarrollo de una técnica de
laboratorio para el análisis de plaguicidas organofosforados OPs (clorpirifos, diclorvos, fenitotrión,
metamidofos, dimetoato, etc.) en muestras de aguas mediante extracción con SPME2 en inmersión directa
usando fibra de polidimetilsiloxano (PDMS) o carboxen/polidimetilsiloxano (CAR/PDMS) y su posterior
análisis por cromatografía de gases acoplada a un detector de nitrógeno fósforo (CG-NPD), cabe resaltar
que el proceso de microextracción y preparación de muestra se corresponde enteramente con la ideología
de la química verde.

1.1 CARACTERÍSTICAS DE LOS COMPUESTOS ORGANOFOSFORADOS

La importancia de la determinación de moléculas catalogadas como contaminantes emergentes como son
los compuestos plaguicidas organofosforados (OPs) que se encuentran en el medio ambiente y en cantidades
a nivel de trazas, se debe a que estos compuestos llegan principalmente a las aguas por diversos factores,
cuando es vertido directamente al agua para control de alguna plaga, del lixiviado de los cultivos, erosión
del suelo, por descarga de las aguas residuales domésticas, incluso de las mismas industrias que los
sintetizan o hacen uso de estos. Estas moléculas (Figura 1) tienen probada su actividad negativa en el
ambiente y pueden causar daño a la salud humana y animal a corto, mediano o largo plazo.

Clorpirifós Diclorvos Metamidofós

Dimetoato
Fenitrotión
Figura 1. Moléculas de estudio (compuestos plaguicidas organofosforados)
1.2 CROMATOGRAFÍA DE GASES
La cromatografía de gases es un paso crucial en el análisis de compuestos orgánicos que permiten la
volatilización de compuestos mediante una programación de temperaturas. Los cromatógrafos de gases
(Figura 2) están compuestos por cuatro unidades básicas: el inyector, donde el extracto de la muestra es
introducido dentro de la columna analítica; la columna analítica, en donde el extracto de la muestra es
separado en sus componentes; el detector, en donde una señal es emitida para los componentes a medida
que estos emergen de la columna; y el registrador de la señal, que puede ser un computador con una
impresora. Los compuestos de interés deben ser removidos de la matriz y aislados de cualquier interferencia
en el proceso de extracción de la muestra. El procedimiento de separación ocurre en la columna, la cual
separa un extracto en sus partes constituyentes para que estos puedan ser introducidos uno por uno dentro
de un detector. Hay muchos tipos de detectores disponibles, cada uno con una utilidad en particular. Algunos
son detectores universales como el Espectrómetro de Masas (MS) o el Detector de Ionización de Flama
(FID), los cuales pueden ser usados para detectar la mayoría de los compuestos orgánicos. Algunos son
selectivos ya que solo responden a ciertos tipos de compuestos. Dos ejemplos de detectores selectivos son
el Detector de Nitrógeno Fósforo (NPD) (Figura 3) (usado para el análisis de plaguicidas organofosforados)
y el Detector de Captura de Electrones (ECD) (usado principalmente para el análisis de compuestos clorados
como PCB’s y pesticidas organoclorados)[2].

Figura 2. Componentes principales del sistema de separación cromatográfica y detección

Figura 3. Diagrama de un detector de nitrógeno fósforo

2. OBJETIVOS

2.1 GENERAL
Desarrollo una metodología analítica para la determinación de compuestos plaguicidas
organofosforados OPs en muestras de aguas de consumo.

2.2 ESPECÍFICOS
Estandarización del método cromatográfico para la determinación y cuantificación de compuestos
plaguicidas organofosforados con soluciones estándar y previa extracción con microextracción en fase
sólida SPME en inmersión directa mediante cromatografía de gases acoplada al detector de nitrógeno
fosforo NPD.

Optimización del proceso de microextracción en fase sólida SPME inmersión directa (temperatura y
tiempo de extracción, velocidad de agitación, salting out, etc) de compuestos plaguicidas
organofosforados en muestras dopadas mediante CG-NPD.

Evaluación de muestras reales de agua (agua MilliQ, agua de laboratorio para consumo, agua superficial
de lago o quebrada, etc) para la determinación de compuestos plaguicidas organofosforados.

3. METODOLOGÍA

3.1 MÉTODO CROMATOGRÁFICO PARA ANÁLISIS DE COMPUESTOS PLAGUICIDAS

ORGANOFOSFORADOS POR SPME-GC-NPD
Las principales características del método cromatográfico que se pretende emplear para el análisis de los
cinco (5) compuestos organofosforados elegidos, se resumen en la siguiente tabla.

Tabla 1. Características del método cromatográfico

Equipo Thermo Scientific Trace 1310 detector NPD
Tipo de inyección Sin division modo SPME en inmersión directa en agua
Columna ZB-5 (30 m, 0.25 mm ID, 0.25 μm)
Temperatura puerto de inyección 250°C
Temperatura detector 300°C
Iniciando en 90 °C se mantien por un minuto, luego un
Temperatura horno aumento a una tasa de 15 °C min-1 hasta 300 °C y se
mantiene 1 minuto (tiempo corrida 16 min)
Gas de arrastre Nitrógeno a 1 mL min-1
Presión gas de arrastre 50 Kpa
Gas auxiliar, flujo Nitrógeno, 15 mL min-1
Gases detector Aire 60 mL min-1 e Hidrógeno 2.3 mL min-1
3.2 TÉCNICA DE ANÁLISIS DE COMPUESTOS PLAGUICIDAS ORGANOFOSFORADOS EN
MUESTRAS ACUOSAS
Prepare una recta de calibrado de todos los cinco compuestos en un rango de 1.0 hasta 1000 ng mL-1. A
partir de los estándares individuales de cada uno de los cinco (5) compuestos organosfosforados (1000 µg
mL-1 pesando 0.01 g en 10 mL de acetato de etilo) prepare una disolución estándar (20.0 mL) de una mezcla
de 100 µg mL-1.

1. Optimice las condiciones de extracción SPME en inmersión directa bajo un diseño simple aislado de
las variables críticas del proceso de microextracción: temperatura de extracción (50, 60 y 70 °C); tiempo
de extracción (20,30 40 min); velocidad de agitación (300, 500 y 700 rpm); efecto salting out (1, 5 y
10% NaCl) y tipo de fibra (PDMS, CAR/PDMS).

2. Con las condiciones óptimas de cromatografiado (Tabla 1) y de extracción, proceda a determinar los
compuestos en diferentes muestras da agua, llenando un vial de 20.0 mL completamente con a la
muestra problema y exponiendo la fibra (figura 4) directamente en la muestra acuosa, una vez surtido
el proceso de microextracción inyecte la fibra en el puerto de inyección bajo las condiciones del equipo
y siempre con el acompañamiento del monitor/profesor.

Figura 4. Montaje utilizado en la determinación de compuestos plaguicidas organofosforados en muestras

acuosas3

4. PREGUNTAS
1. Mencione al menos dos (2) métodos oficiales, utilizados actualmente para el análisis de compuestos
plaguicidas organofosforados OPs en muestras de agua.
2. Enuncie las ventajas y desventajas de la metodología propuesta en esta práctica.
3. Explique los usos del modo de inmersión directa y en espacio de cabeza del método de microextracción
SPME.
4. Explique semejanzas y diferencias de las fibras de PDMS (roja) respecto de la fibra CAR/PDMS (azul
claro).
5. REFERENCIAS
1 J. Beltran, F.J. Lopez, O. Cepria, F. Hernandez. Solid-phase microextraction for quantitative analysis of
organophosphorus pesticides in environmental water samples. Journal of Chromatography A. (1998),808,1–
2:257-263
[2] V. Kumar et. al. Alteration of testicular steroidogenesis and histopatology of reproductive system in
male rates treat ed with triclosán. Reproductive toxicology. India, 2008.

3 C.L. Arthur and J. Pawlyszyn. Solid phase microextraction with thermal desorption using fused silica
optical fibers. Anal. Chem. (1990), 62, 19:2145-2148.