BIOSEGURIDAD, ESTERILIZACIÓN Y
MEDIOS DE CULTIVO
Fundación Universitaria de San Gil-Unisangil, Facultad de Ciencias Naturales e Ingeniería
Ingeniería Ambiental
Yopal-Casanare
Resumen- Esta práctica fue desarrollada con el fin de validar
las técnicas de esterilidad y efectividad, para tener más
conocimiento de lo aprendido en clase, además se evidenció
que el buen manejo de la bioseguridad ayudan a que nos
protejamos contra enfermedades, por otra parte se pudo
comprobar que con un buen manejo y buenos cálculos, tanto la
prueba de efectividad como la prueba de esterilidad se
desarrollarían sin ningún margen de error y los medios de
cultivo sean un éxito. Además se utilizaron demás equipos tales
como la autoclave, que es indispensable para el desarrollo de
este tipo de experimentos. La orientación dada por el profesor
de la case y los monitores, nos ayudan a complementar nuestros
conocimientos y destrezas que nos servirán en un futuro a cada
uno de nosotros.
Palabras claves- autoclave, bioseguridad, efectividad,
esterilidad medios de cultivos.
Abstract- This practice was developed in order to validate the
techniques of sterility and effectiveness, to have more
knowledge of what was learned in class, it was also shown that
the good management of biosecurity help to protect us against
diseases, on the other hand it was possible to check that with
good management and good calculations, both the
effectiveness test and the sterility test would be developed
without any margin of error and the culture media are a success.
In addition, other equipment such as the autoclave was used,
which is essential for the development of this type of
experiment. The orientation given by the case teacher and the
monitors help us to complement our knowledge and skills that
will serve each of us in the future.
Keywords- autoclave, biosafety, effectiveness, sterility, culture
media.
I. MARCO TEÓRICO
LA BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO: se refiere al
conjunto de medidas preventivas, destinadas a proteger la salud
de las personas que allí laboran. El propósito básico es obtener
un ambiente de trabajo seguro y ordenado (Rojas 2011). Por
otra parte, en los laboratorios de microbiología se realizan
técnicas de esterilización para que el desarrollo de sus técnicas
arroje resultados confiables una deficiente o manipulación
incorrecta de materiales y medios de cultivo conlleva a
contaminaciones, resultados erróneos o pérdida del material
biológico. Por ello, se requieren buenas prácticas de laboratorio
para su manejo (BPL).
LOS AGENTES BIOPELIGROSOS son aquellos agentes
biológicos y materiales que son potencialmente peligrosos para
el hombre, animales y plantas; entre ellos podemos citar,
bacterias, virus, parásitos, hongos, productos recombinantes,
alérgenos, priones entre otros.
EL RIESGO MICROBIOLÓGICO: se encuentra presente
cada vez que se realiza una actividad práctica en el laboratorio,
donde se requiere de la manipulación de cultivos de
microorganismos pudiendo alcanzar concentraciones elevadas
causando infecciones si no son manipuladas correctamente.
Para la bioseguridad en el laboratorio de microbiología es
fundamental disponer de concomimientos básicos de
esterilización y desinfección.
La esterilización es un método de eliminación total de todo
tipo de organismos que asegura la usencia absoluta de
cualquier forma de vida. La esterilización por calor seco o
húmedo, son los métodos que se utilizan con mayor frecuencia
en el laboratorio de microbiología, los procesos de calor seco
destruye a los microrganismos por oxidación y Los de calor
húmedo afectan la estabilidad de estructuras celulares y
proteínas. El autoclave es el método más eficaz y fiable para
esterilizar materiales del laboratorio.
Como todos los organismos vivos, los microorganismos
requieren ciertos nutrientes básicos y factores físicos para el
mantenimiento de su vida, estas necesidades varían según el
tipo de microorganismo y es necesario saberlas para poder
cultivarlos en el laboratorio. (Rojas 2011).
Los Medios de cultivo: Son ambientes artificiales, semejantes
a su medio natural, elaborados con los nutrientes apropiados
para cada microorganismo y las condiciones ambientales
favorables de pH, presión osmótica, gases, humedad, etc., con
el propósito que puedan vivir o desarrollarse. (Escobar, 2002).
 LOS MEDIOS DE CULTIVO APORTAN A LOS
MICROORGANISMOS

1. Una fuente de carbono: El carbono es el componente esencial

y central para conformar la estructura celular y le permite a la
célula realizar todas las funciones.

2. Una fuente de nitrógeno: Elemento esencial para que la

célula construya macromoléculas como: proteínas y ácidos
nucleicos. Algunos microorganismos usan nitrógeno
atmosférico,

3. Elementos no metálicos: iones no metálicos como el azufre

y el fosforo. El azufre puede encontrarse con proteínas, sulfatos
o como azufre elemental; mientras que el fosforo puede
encontrarse formando sales.

4. Elementos metálicos: (Ca, Zn, Na, K, Cu, Mn, Mg, Fe+2,

Fe+3) llamados también micronutrientes, oligoelementos o
elementos traza.

5. Vitaminas: Los microorganismos pueden tomarlas del medio

ya elaboradas o iniciar procesos de síntesis de las mismas

6. Agua: Los microorganismos necesitan grandes cantidades de

agua. Algunas excepciones se pueden considerar como
organismos acuáticos, requieren cierto grado de humedad para
crecer.

Un medio de cultivo: es una solución acuosa incorporada a un

coloide en estado de gel en las que están presentes todas las
sustancias necesarias para el crecimiento de unos determinados
microorganismos.

Propiedades de los medios de cultivo:

1. Humedad: Indispensable para el crecimiento de los

microorganismos, su carencia (desecación) puede llevar a la
muerte de los microorganismos.

2. Fertilidad: Se refiere a los elementos o compuestos básicos

que permiten el crecimiento bacteriano.

3. pH: Se refiere a los pH óptimos para el desarrollo bacteriano,

indispensable para su aislamiento; variaciones ácidas o
alcalinas, pueden inhibir su crecimiento.

4. Transparencia: Permite la observación microbiológica,

evidenciar morfologías y físicamente su crecimiento en medios
de cultivos adecuados.

II. PROCEDIMIENTO
 Imagen 2. Agar en la estufa
Fuente: Nathalia Castro

III. RESULTADOS OBTENIDOS

Imagen 3. Poniendo el agar en la caja Petri.

Fuente: Nathalia Castro

Imagen 1. Preparación del agar

Fuente: Nathalia Castro
Imagen 4. Agar en las cajas Petri.
Fuente: Nathalia Castro
Luego de servir el agar en las cajas Petri de la misma forma, se
dejaron reposar o gelatinizar por unos minutos, para luego de
esto se destapó uno para que fuera contaminado por el medio
externo y el otro se envolvió en papel vinipel para ser
considerado como el no contaminado.
Los resultados obtenidos en la prueba de efectividad fueron
positivos, pues al someter el medio de cultivo después de su
gelatinización a las condiciones externas del laboratorio,
crecieron en ella:
Imagen 5. Muestra contaminada.
Fuente: Daniela Moreno.
La muestra de esterilidad también se logró eficientemente, pues
en la caja de Petri que no se expuso al ambiente no creció
ningún tipo de microorganismo, por lo tanto se deduce que el
proceso se realizó correctamente:
Imagen 6. Muestra no contaminada.
Fuente: Daniela Moreno.
IV. ANÁLISIS DE RESULTADOS
Por medio de la esterilización realizada a los materiales de
laboratorio, se obtuvo la destrucción completa de los
microorganismos presentes, para llevar a cabo la práctica.
La desinfección del espacio de trabajo, también es un aspecto
importante, el cual se realizó eficientemente, además las
normas básicas de bioseguridad son de vital importancia para
la protección del personal de laboratorio.
Para evitar cualquier forma de contaminación, se utilizó la
técnica de esterilización de calor húmedo, por medio de la
autoclave, en este el vapor a una atmósfera de sobre presión
(121ºC) mata a todos los microorganismos y a sus endosporas
en unos 15 minutos o un poco más, dependiendo del tipo y
volumen del material que está siendo esterilizado.
La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes
complejos similares en composición a los líquidos orgánicos
del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de
cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que
se añadirán otros ingredientes, el medio de cultivo preparado
en el laboratorio fue el Agar (plate count), el cual es utilizado
para evaluar o controlar el crecimiento bacteriano "total" o
viable de una muestra, este no es un medio selectivo y está
compuesto por:
0.5% de peptona
0,25% de extracto de levadura
0.1% de glucosa
1.5% agar
pH ajustado a neutro a 32ºC durante 48 horas.
En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos
materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono,
suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se
adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el
valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de
fermentación de los microorganismos que ayuden a
identificarlos.
V. CUESTIONARIO
1. Complete la tabla con resultados obtenidos en la prueba de
esterilidad y efectividad.
 Nombre del
Aspectos de Aspectos de las
medio de Esterilidad (UFC) Efectividad (UFC) Registro fotográfico
colonias colonias
cultivo
En esta muestra no es
Después de 24 horas,
posible observar La muestra tomo
pudimos darnos cuenta
microorganismos ya un tono más claro,
Agar (Plate No se que se realizó una
que en este cultivo se pero no se
count) No evidencian excelente esterilización
tuvo todas evidenció colonias
contaminada colonias ya que no se observaron
precauciones para no de
microorganismos en el
dejar que se microorganismos.
cultivo.
contaminara.
En esta
muestra Después de 24 horas, La muestra tomo
En esta muestra se encontramos pudimos darnos cuenta un tono más claro,
Agar (Plate observó colonias que se realizó una se evidencio un
count) microorganismos, ya mesófilos, el excelente efectividad ya grupo pequeño de
Contaminada que este cultivo fue cual tenía un que se logró observar la 8 colias mesófilos
expuesto al aire aspecto de formación de colonias de color blanco
color blanco mesófilos en el cultivo. telarañoso.
telarañoso

2. Discuta los resultados obtenidos con base en la efectividad contenido en agua de un alimento más fácil será que crezcan
de la esterilización y el manejo del material. las bacterias.

Los resultados obtenidos en el método de esterilización fueron
los esperados ya que se tuvo una efectividad del 99.9%, esto se
debe al buen manejo de los materiales y al uso correcto de los
implementos de bioseguridad, si la esterilidad hubiera sido
errónea el agar se hubiera contaminado y se hubiera perdido
material biológico.
Acidez (pH): El pH es una medida de la acidez, un medio
neutro es aquel que tiene un pH de 7, los medios ácidos son los
que tienen valores de pH inferiores a 7, mientras que los que
tienen pH superior a este valor se dice que son básicos o
alcalinos. La mayoría de las bacterias crecen mejor en medios
que tengan un pH próximo a la neutralidad.

3. Consulte qué métodos de esterilización serían los más
adecuados para las siguientes muestras ambientales:
a. Un medio solido o liquido contaminado con Escherichia
coli, Salmonella sp.
- El método del Autoclave.
b. Una muestra de agua residual doméstica.
- La esterilización ultravioleta es un método en donde se realiza
el proceso de destrucción de toda vida microbiana por medio
de una luz ultravioleta. El termino ultravioleta o luz (UV), es
uno de los medios probados para tratar aguas, aire o superficies
contaminadas biológicamente.
c. Tejidos de procedencia animal.
- El método del Autoclave.
Nutrientes: La mayoría de los alimentos contienen suficientes
nutrientes para que las bacterias puedan crecer, sobre todo en
casos como lácteos y huevos, carnes y aves de corral y marisco.
Las bacterias requieren elementos como carbono, nitrógeno,
hidrógeno y fósforo, entre otros.
5. ¿En qué nivel de enseñanza se ubica un laboratorio básico
de enseñanza y qué equipos de seguridad necesita? (Revisar
Manual de Bioseguridad OMS)
El nivel en el que se ubica un laboratorio básico de enseñanza
se encuentra en el nivel 1 (el nivel básico) y se necesita utilizar
los implementos de seguridad personal (guantes, tapabocas,
gafas, gorro en caso de que lo requiera, bata o uniforme
especial).
6. ¿Cuál es el símbolo de peligro biológico?

d. Un suelo inoculado con patógenos de plantas.

- El método del Autoclave.

4. ¿Cuáles son los requerimientos necesarios para el

crecimiento bacteriano?

Temperatura: La mayoría de las bacterias crecen con mayor

rapidez a temperaturas entre 40 y 140°F (4.4 °C y 60 °C),
duplicándose en cantidad tan pronto como en 20 minutos.

Humedad: El agua es un elemento indispensable para la vida,

incluida la de los microorganismos, cuanto mayor sea el
7. ¿Cuál es la diferencia entre desinfección, descontaminación
y esterilización? (ejemplo de c/u).

La diferencia entre desinfección, descontaminación y

esterilización es que La esterilización está dirigida a destruir
casi toda la vida microbiana, mientras que la desinfección se
refiere al proceso por medio del cual se destruye parte de la
vida microbiana o se cortan los efectos nocivos de ésta en los
seres humanos, y la descontaminación es el proceso por el cual
los instrumentos y demás materiales, primero e limpian y luego
son procesados por medios químicos o mecánicos, para que su
manipulación sea segura.

• Ejemplos de la desinfección: cuando lavamos los platos,

cuando limpiamos el inodoro.

• Ejemplos de la esterilización: es frecuente en instrumentos

quirúrgicos.

• Ejemplo descontaminación: de un quirófano antes de

comenzar la jornada- durante la cirugía –derrame de sangre:
eliminarse rápidamente con desinfectante hospitalario –
Artículos usados :colocarse en compartimientos herméticos –
Elemento contaminado : Manipularse con precaución para
proteger a personal de la contaminación – Muestra de tejidos
de sangre: recipientes herméticos –Objetos de papel: evitar
contaminación –Apósitos contaminados: Bolsas de plástico-
Instrumento que caiga fuera del campo quirúrgico en bandeja
que contenga desinfectante de nivel hospitalario – Después de
la cirugía : Esterilización.

VI. CONCLUSIONES

1. Se pudo determinar que para hacer un excelente medio de

cultivo se deben realizar correctamente los cálculos necesarios
para obtener un resultado satisfactorio y beneficioso para el
crecimiento de los microorganismos en el medio. Además se
debe tener cuidado a la hora de añadir el medio de cultivo en
las cajas de Petri pues ya que este se puede contaminar muy
fácil

2. Se logró realizar en el laboratorio de manera favorable los

procesos básicos de esterilización y medios de cultivos con el
fin de estudiar los microorganismos y generar el ambiente
apropiado para el crecimiento de estos.

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Carreño Claret, (2018), practica de laboratorio, Yopal,

Unisangil.

http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.ht
m

file:///C:/Users/USUARIO/Downloads/Documento-1274.pdf

https://en.wikipedia.org/wiki/Plate_count_agar

http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/c
atedraMicro/08_Tema_5_Cultivo.pdf