УДК: 615.454.1:547.913:615.242:582.472:615.014.

22
1
Аюпова Р.Б., 2Швайдленко Э., 1Дильбарханов Р.Д.
1
( Казахский национальный медицинский университет имени С.Д. Асфендиярова,
Алматы, Республика Казахстан
2
Ветеринарно-фармацевтический университет г. Брно, Чешская Республика)

РАЗРАБОТКА И СТАНДАРТИЗАЦИЯ СТОМАТОЛОГИЧЕСКОГО ГЕЛЯ С ЭФИРНЫМ

МАСЛОМ ИЗ ABIES SIBIRICA

Аннотация. Разработка и стандартизация нового антифунгального и противовоспалительного,

антимикробного, регенерирующего лекарственного средства на основе отечественного растительного сырья,
предназначенного для применения в стоматологической практике.
Материалы и методы исследования. Объектами исследования явились эфирное масло из Abies sibirica
полученное методом микроволнового нагревания на экстракторе ««STARTE Microwave Exstraction System» и
вспомогательные вещества разрешенные к медицинскому применению: карбомер 974 Р, глицерин, полисорбат-
80, ксилитол, триэтаноламин и вода очищенная.
Результаты исследования и их обсуждение. На основании физико-химических, технологических,
структурно-механических, микробиологических исследований был отобран оптимальный состав геля с
пихтовым маслом
Выводы. В результате проведенных физико-химических, технологических, структурно-механических,
микробиологических исследований разработан состав, способ получения, показатели качества и методы их
оценки. Разработана методика количественного определения терпеновых соединений в эфирном масле из Abies
sibirica в лекарственных формах.

Введение
Разработка лекарственных препаратов для стоматологической практики является весьма
актуальным направлением, так как инфекционно-воспалительные и грибковые заболевания полости
рта являются распространенным явлением среди широких слоев населения [1]. По данным ВОЗ,
воспалительными заболеваниями пародонта (гингивит, стоматит, глоссит и др.) страдает до 95 %
взрослого населения земного шара и до 80 % детей [2].
Следует отметить, что среди современных лекарственных средств указанной направленности
преобладают лекарственные препараты синтетического происхождения, обладающие наряду с
антимикробным действием и рядом недостатков, такими как высокая сенсибилизирующая
активность, высокий риск развития резистентности патогенной и сапрофитной микрофлоры и другими
побочными эффектами. С этой точки зрения, лекарственные препараты на основе лекарственного
растительного сырья при рациональном применении обладают преимуществами: эффективностью,
безопасностью, мягкостью и широтой терапевтического действия, минимальным риском развития
аллергизирующего эффекта и возникновения резистентности у микроорганизмов [3].
Таким образом, учитывая вышеперечисленные факторы, становится очевидным
целесообразность разработки нового лекарственного средства – геля на основе лекарственного
растительного сырья из Abies sibirica обладающего противовоспалительным и антифунгальным
действием.
Целью настоящей работы явилось разработка и стандартизация нового антифунгального и
противовоспалительного, антимикробного, регенерирующего лекарственного средства на основе
отечественного растительного сырья, предназначенного для применения в стоматологической
практике.
В соответствии с вышеназванной целью необходимо было решить ряд задач по обоснованию
состава лекарственного средства, разработке технологического способа его получения, составлению
рациональной технологической схемы получения, изучению параметров качества, обоснованию
подходов к стандартизации и разработке методик качественного и количественного анализа.
Материалы и методы исследования
Объектами исследования явились эфирное масло из Abies sibirica полученное методом
микроволнового нагревания на экстракторе ««STARTE Microwave Exstraction System» и
вспомогательные вещества разрешенные к медицинскому применению: карбомер 974 Р, глицерин,
полисорбат-80, ксилитол, триэтаноламин и вода очищенная.
 В качестве основных методов исследования применялись традиционно используемые для целей
качественного и количественного анализа: газожидкостная хроматография, пробирочные химические
реакции. Для проведения блока медико-биологических исследований применялись
фармакологические методы изучения острой токсичности и специфической фармакологической
активности (регенерирующей и противовоспалительной), микробиологические методы
(антифунгальной активности).
Для получения гелей использовали следующее технологическое оборудование: лабораторную
мешалку для приготовления мягких лекарственных форм «Cito Ungvator – 2000» (Германия).
Изучение реологических параметров (определение структурной вязкости) гелевых композиций,
проводили на приборе «BROOKFIEID viscometer DV-II Pro» (США) при комнатной температуре 20–25 0С.
Значение рН гелей с пихтовым маслом определяли потенциометрически с применением рН -
метра «HI 2210 pH Meter» (Германия). Стандартный электрод марки HI 76404. Калибровку прибора
осуществляли по буферным растворам с рН = 4,01; 7,01 по 20мл.
Микроскопическое исследование получаемых гелей определяли с применением лабораторного
микроскопа («Nikon Еclipse E200», Германия).
Определение коллоидной стабильности гелей проводили с применением центрифуги
лабораторной медицинской с максимальной частотой вращения 8000 об/мин.
Анализ эфирного масла полученного из Abies sibirica в гелях проводили методом ГХ/МС на
приборе Agilent Technologies 7890A GC System, 7683B Series Injector » с масс селективным детектором
«Agilent Technologies G1888 Network ».
Разделение проводили на капиллярной колонке длиной 60м, внутренним диаметром 0,25мм, и
толщиной пленки неподвижной фазы 0,25мкм. Хроматограммы регистрировали на персональном
компьютере, использую программный пакет «Chem Station» («Agilent Technologies», США).
Для идентификации соединений по масс-спектрам электронного удара использовали
библиотеку масс – спектров «NIST 05» и «WILEY 138». Объем вводимой пробы составлял 1 мкл,
температура инжектора - 2000С, скорость потока газа носителя – 1 мл/мин., газ-носитель - гелий.
Температура детектора 2300 С.

Результаты исследования и их обсуждение

В пропись стоматологического геля для лечения воспалительных и грибковых заболеваний
полости рта нами были включены следующие компоненты, разрешенные к медицинскому
применению: эфирное масло из Abies sibirica -0,3г, карбомер-1,0г, полисорбат – 80 - 0,3г, глицерин-
10,0г, ксилитол-20,0г, триэтаноламин - 0,34г и воды очищенной до 100г.
Данный вид лекарственного растения Abies sibirica является признанным источником для
получения мягких и эффективных лекарственных препаратов, обладающих противовоспалительным,
антимикробным, ранозаживляющим, регенерирующим и антифунгальным действиями [4,9].
На основании физико-химических, технологических, структурно-механических,
микробиологических исследований был отобран оптимальный состав геля с пихтовым маслом.
Для изготовления 1000,0 г геля с пихтовым маслом на основе карбомера 974 NP в рабочий
сосуд установки «Cito Ungvator 2000» вносили рассчитанное количество воды очищенной и
глицерина, полисорбата – 80 и включали электропривод механического перемешивания компонентов
геля. Перемешивали при комнатной температуре (+20 0 С) в течение 10 минут до получения
однородного раствора. В полученный раствор постепенно небольшими порциями загружали
карбомера 974 NP и перемешивали в течение 20 минут до получения однородной суспензии. В
полученную суспензию при перемешивании медленно с помощью бюретки вносили триэтаноламина
и продолжали перемешивание в течение 45 минут до получения однородного прозрачного геля.
Проверяли величину рН готовой основы, которая должна быть в пределах от 5,0 до 5,3. В готовую
основу [8] при перемешивании вносили необходимое количество эфирного масла из Abies sibirica,
перенесли в рабочий сосуд установки «Cito Ungvator 2000» и перемешивали в течение 15 минут до
получения однородного геля густой консистенции массой 1000,0г. Отбирали пробу для анализа. При
получении положительного результата готовый продукт передавали на фасовку в тубы.
Стандартизация лекарственных средств является сложной задачей, особенно, когда речь идет
об анализе лекарственного препарата растительного происхождения [5].
Количественное определение терпеновых соединений в эфирном масле из Abies sibirica в новом
геле проводили с использованием метода ГХ /МС.
Для количественного ГХ /МС определения компонентов сложной смеси, как правило,
используют метод внутренней нормировки. При этом суммарная площадь хроматографических пиков
принимается за 100%, а содержание отдельных компонентов определяется в массовых процентах
пропорционально их площади [6,7].
В данной работе предложен подход, предполагающий количественное определение четырех
групп терпеновых соединений в эфирном масле находящейся в стоматологическом геле. Членами
одной группы являются изомерные терпены, схожие по механизму фрагментации при масс-
спектрометрическом детектировании. Было сделано предположение, что отклик масс-спектрометра
на эти соединения являются одинаковыми с некоторой погрешностью, не превышающей случайную
погрешность метода.
Нами было приготовлено 14 образцов для ГХ-МС анализа (таб.1).

Таблица 1. Приготовленные образцы для ГХ-МС анализа

File Vial Sample Method
G01.D 6 Blank 5ml Water
HS_VF624MS
G02.D 7 Blank 5ml Water
HS_VF624MS
G03.D 8 "Osnova" Gel 252.69mg+4mL Water+1mL IPAwith 0.517mg/mL Ess.oil
HS_VF624MS
G04.D 9 "Osnova" Gel 253.35mg+4mL Water+1mL IPAwith 0.517mg/mL Ess.oil
HS_VF624MS
G05.D 10 4mL Water+1mL IPAwith 0.517mg/mL Ess.oil
HS_VF624MS
G06.D 11 4mL Water+1mL IPAwith 0.517mg/mL Ess.oil
HS_VF624MS
G07.D 12 Gel N2 Sample A 253.85mg+4mL Water+1mL IPA
HS_VF624MS
G08.D 13 Gel N2 Sample B 250.39mg+4mL Water+1mL IPA
HS_VF624MS
G09.D 14 Gel N2 Sample A 250.97mg+4mL Water+1mL IPAwith 0.517mg/mL Ess.oil.
HS_VF624MS
G10.D 15 Gel N2 Sample B 251.85mg+4mL Water+1mL IPAwith 0.517mg/mL Ess.oil.
HS_VF624MS
G11.D 16 Gel N2 Sample C 252.97mg+4mL Water+1mL IPAwith 0.517mg/mL Ess.oil.
HS_VF624MS
G12.D 17 Gel N2 Sample D 254.18mg+4mL Water+1mL IPAwith 0.517mg/mL Ess.oil.
HS_VF624MS
G13.D 18 Gel N2 Sample C 251.28mg+4mL Water+1mL IPA
HS_VF624MS
G14.D 19 Gel N2 Sample D 252.24mg+4mL Water+1mL IPA
HS_VF624MS

В таблицах от 2 - 13 приведены значения хроматограмм всех 14 образцов с указанием времени

удерживаний пиков и их площадей (таб.2-13).
Таблица 2. Значение хроматограммы образца G03
TIC: G03.D\data.ms
A-G+W+IPA+ESSO
Peak Ret Time Type Width Area Start Time End Time
1 22.014 M 0.099 489113321 20.769 22.451
2 22.884 M 0.037 36192720 22.798 22.952
3 27.850 M 0.156 44027284 25.062 28.310
4 30.409 M 0.247 350735923 28.318 31.407

Таблица 3. Значение хроматограммы образца G04

TIC: G04.D\data.ms
B-G+W+IPA+ESSO
Peak Ret Time Type Width Area Start Time End Time
1 22.013 M 0.100 492751737 20.778 22.477
2 22.883 M 0.038 35471831 22.759 22.961
3 27.850 M 0.156 41677708 24.907 28.271
4 30.410 M 0.242 375620359 28.271 31.343

Таблица 4. Значение хроматограммы образца G05

TIC: G05.D\data.ms
A-W+IPA+ESSO
Peak Ret Time Type Width Area Start Time End Time
1 22.013 M 0.100 516125085 20.772 22.479
2 22.883 M 0.038 38959955 22.762 22.968
3 27.850 M 0.164 49308262 24.881 28.293
4 30.411 M 0.258 399115400 28.304 31.750

Таблица 5. Значение хроматограммы образца G06

TIC: G06.D\data.ms
B-W+IPA+ESSO
Peak Ret Time Type Width Area Start Time End Time
1 22.013 M 0.098 516854482 20.749 22.420
2 22.884 M 0.038 38724509 22.769 22.944
3 27.849 M 0.166 48331472 24.902 28.286
4 30.411 M 0.253 419112361 28.297 31.342
Таблица 6. Значение хроматограммы образца G07

TIC: G07.D\data.ms
A-N2+W+IPA

Peak Ret Time Type Width Area Start Time End Time
1 22.014 M 0.101 660231951 20.783 22.602
2 22.884 M 0.038 53732089 22.778 22.946
3 25.407 M 0.057 4200292 24.873 25.876
4 27.849 M 0.145 65560891 26.004 28.245
5 30.412 M 0.249 655980196 28.256 31.372

Таблица 7. Значение хроматограммы образца G08

TIC: G08.D\data.ms
B-N2+W+IPA

Peak Ret Time Type Width Area Start Time End Time
1 22.014 M 0.095 468340811 20.788 22.436
2 22.883 M 0.038 41305160 22.749 22.958
3 25.407 M 0.061 4186627 24.846 25.869
4 27.849 M 0.153 48168599 25.963 28.258
5 30.411 M 0.240 533529089 28.268 31.596

Таблица 8. Значение хроматограммы образца G09

TIC: G09.D\data.ms
A-N2+W+IPA+ESSO
 Peak Ret Time Type Width Area Start Time End Time
1 22.019 M 0.108 987218931 20.700 22.580
2 22.885 M 0.038 81370222 22.767 22.953
3 25.407 M 0.051 6066279 24.866 25.861
4 27.850 M 0.146 102449711 25.982 28.268
5 30.416 M 0.259 1027286522 28.268 31.691

Таблица 9. Значение хроматограммы образца G10

TIC: G10.D\data.ms
B-N2+W+IPA+ESSO
Peak Ret Time Type Width Area Start Time End Time
1 22.018 M 0.110 1089112086 20.764 22.585
2 22.884 M 0.038 90502807 22.772 22.949
3 25.407 M 0.052 6843226 24.895 25.883
4 27.849 M 0.147 113761918 25.956 28.266
5 30.416 M 0.257 1135859852 28.287 31.752

Таблица 10. Значение хроматограммы образца G11

TIC: G11.D\data.ms
C-N2+W+IPA+ESSO
Peak Ret Time Type Width Area Start Time End Time
1 22.018 M 0.108 982745478 20.764 22.578
2 22.884 M 0.038 79483885 22.766 22.963
3 25.407 M 0.055 6272976 24.876 25.842
4 27.849 M 0.148 107763071 25.961 28.268
5 30.416 M 0.256 1069473498 28.278 31.394

Таблица 11. Значение хроматограммы образца G12

TIC: G12.D\data.ms
D-N2+W+IPA+ESSO
Peak Ret Time Type Width Area Start Time End Time
1 22.019 M 0.109 1069102646 20.753 22.584
2 22.885 M 0.038 87016381 22.768 22.976
3 25.408 M 0.051 6296318 24.872 25.874
4 27.850 M 0.149 109905959 25.906 28.260
5 30.416 M 0.253 1097097093 28.271 31.648

Таблица 12. Значение хроматограммы образца G13

TIC: G13.D\data.ms
C-N2+W+IPA
Peak Ret Time Type Width Area Start Time End Time
1 22.015 M 0.102 665262565 20.786 22.586
2 22.884 M 0.038 53889917 22.766 22.966
3 25.407 M 0.051 3899781 24.861 25.819
4 27.849 M 0.150 66187698 25.956 28.272
5 30.413 M 0.240 688235095 28.282 31.325

Таблица 13. Значение хроматограммы образца G14

TIC: G14.D\data.ms
D-N2+W+IPA
Peak Ret Time Type Width Area Start Time End Time
1 22.014 M 0.100 670256085 20.792 22.600
2 22.883 M 0.038 55188173 22.772 22.962
3 25.407 M 0.051 3850357 24.788 25.846
4 27.850 M 0.148 62914242 25.999 28.250
5 30.413 M 0.243 649604182 28.250 31.279

Таблица 14. Количественное определение эфирного масла из Abies sibirica в геле (прямое)
 В таблице 14 приведены расчеты количества эфирного масла из Abies sibirica в
разработанном геле. Процентное содержание эфирного масла из Abies sibirica в геле составляет
0,323%. (таб.14).
Для достоверности данной методики нами был использован и метод добавки стандартного
образца. В исследуемые образцы добавлены определенное количество эфирного масла из Abies
sibirica. Проанализированы образцы с добавкой. Результаты представлены в таблице 15.

Выводы
Таким образом, в результате проведенных физико - химических, технологических,
структурно-механических, микробиологических исследований разработан состав, способ
получения, показатели качества и методы их оценки. Разработана методика количественного
определения эфирного масла из Abies sibirica в новой лекарственной форме - геле.

ЛИТЕРАТУРА
1. Шагалиева Н.Р., Куркин В.А., Авдеева Е.В., Байриков И.М., Щербовских А.Е. Актуальные
аспекты разработки и стандартизации стоматологического фитопрепарата «Дентос». Журнал
Фундаментальные исследования. №10, 2013г.
2. Куркин В.А. Фармакогнозия: учебник для студентов фармац. вузов. – 2-е изд., перераб. и доп. –
Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ», 2007. – 1239 с.
3. Kurkin V.A. Phenylpropanoids as biologically active compounds and standards of the medicinal plants
V.A. Kurkin, V.N. Ezhkov, E.V. Avdeeva, I.Yu. Klimova // XXII International Conference on Polyphenols
«Polyphenols communication 2004»: Abstracts. – Helsinki, 2004. – P. 619–620.
4. Дильбарханов Р.Д., Устенова Г.О., Бердибеков М.А., Кожанова К.К., Амантаева М.Е.
Лекарственные препараты на основе пихтового масла. Сообщение 2 // Фармация Казахстана. — 2005. — №
2. — С. 26-27.
5. Самылина И.А. Проблемы стандартизации лекарственного растительного сырья и лекарственных
растительных средств // Традиционная медицина и питание: теоре-тические и практические аспекты:
материалы I Междунар. науч. конгр. – М., 1994. – С. 152.
6. Niessen W.M.A. Current practice of gas chromatography—mass spectrometry. NY: Marcel Dekker,
2001.
7. Alzaga R., Ortiz L., Sánchez-Baeza F., et al. Accurate determination of 2,4,6-trichloroanisole in wines at
low parts per trillion by solid-phase microextraction followed by GC-ECD // J. Agric. Food Chem. 2003.V. 51, N
12. P. 3509–3514.
8. Rizvangul Aupova, Zuyriadda Sakipova, Milan Zemlicka. Study of rheological properties of carbomer
gels // Life Science Journal 2014.11(2s).P.25-27.
9. Ayupova R.B., Sakipova Z.B., Shvaydlenka E., Neyezhlebova M., Ulrikh R., Dilbarkhanov R.D.,
Datkhaev U.M., Zhemlichka M. Chemical composition and antifungal activity of essential oils obtained from Abies
sibirica L., growing in the Republic of Kazakhstan. International journal of experimental education №2, 2014.
P.69-71.

Аюпова Р.Б., Швайдленко Э., Дильбарханов Р.Д.

Abies sibirica өсімдігінен эфир майы негізінде стоматологиялық гельді жасау және
стандарттау
Түйіндеме. Бұл ғылыми мақалада самырсын майы негізінде стоматологиялық гелдің құрамын
жасауда технологиялық өлшем бірліктерін таңдау. Зерттеу нысаны Abies sibirica өсімдігінен эфир майын
микротолқынды STARTE Microwave Exstraction System» қыздыру арқылы және медициналық тараптан
қолдануға болатын қосымша заттарды қолдану: карбомер 974 Р, глицерин, полисорбат-80, ксилитол,
триэтаноламин және тазартылған су. Гельге микроскопиялық зертеулер жасаланды және оның дисперстық
дәрежесі анықталды. Зертеулер нәтижесінде стоматологиялық гельдің оптимальді құрамы анықталды.
Негізгі сөздер: эфирлі майлар, карбомердер, дисперсті дәріжісі,тұрақтылығы, бөлшекткрдің өлшемы
.

Аюпова Р.Б., Швайдленко Э., Дильбарханов Р.Д.

Разработка и стандартизация стоматологического геля с эфирным маслом из abies sibirica
Резюме. В данной статье проведены исследования технологических параметров при разработке геля
с пихтовым маслом. Объектами исследования явились эфирное масло из Abies sibirica, полученное
методом микроволнового нагревания на экстракторе ««STARTE Microwave Exstraction System» и
вспомогательные вещества разрешенные к медицинскому применению: карбомер 974 Р, глицерин,
полисорбат-80, ксилитол, триэтаноламин и вода очищенная. Проведены микроскопические исследования
гелей и определены их степень дисперсности. В результате проведенных экспериментальных исследований
был отобран оптимальный состав и технология стоматологического геля с пихтовым маслом на основе гелей
карбомеров.
Ключевые слова: эфирные масла, карбомеры, размер частиц, степень дисперсности, стабильность.

Ayupova R.B., Shvaydlenko E., Dilbarchanov R.D.

Development of standartisation dental gel with essential oil of abies sibirica
Resume. This article conducted studies of technological options in developing gel with fir oil. The objects of
investigation were essential oil of Abies sibirica, obtained by the method of microwave heating on the extractor
«Starte Microwave Exstraction System» and auxiliary substances permitted for medical use: carbomer 974 R,
glycerin, Polysorbate-80, xylitol, triethanolamine and purified water. Held microscopic examination of gels and
determined their degree of dispersion. As a result of experimental studies was selected the optimum composition
and technology of dental gel with fir oil-based gels carbomer.
Key words: essential oils, carbomer, particle size, degree of dispersion stability.