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Objetivo
Materiales:
Reactivos:
Fundamento
El ADN se encuentra en el interior del núcleo celular, disperso y muy replegado, unido a
proteínas para formar la cromatina. Así, para extraerlo será necesario homogeneizar el
tejido y romper las células para separar el núcleo, romper también la envoltura nuclear
para liberar su contenido, luego separar el ADN de las proteínas que lo protegen y, por
último, precipitarlo para extraerlo de la solución. Una vez realizado esto, el ADN
aparecerá como un agregado de fibras blanquecinas que se adhieren a la varilla de vidrio.
Por último, se puede situar sobre un porta, teñirlo con un colorante básico y observarlo al
microscopio.
Procedimiento
Triturar en frío la muestra de hígado o el choro de mar en el mortero junto con arena o
mediante la batidora para homogeneizar el tejido. Este procedimiento rompe muchas
células liberando su contenido. Parecer ser más eficaz el empleo de una batidora, con la
que se obtiene una mezcla más homogénea y fácil de filtrar después.
Añadir unos 50 ml de agua destilada, y remover suavemente pero mezclando a fondo.
Filtrar varias veces el resultado a través de un pedazo de tela de gasa. Este filtrado es
lento y difícil, pero se retendrá los restos de tejido.
Medir el volumen del filtrado final y añadir a este filtrado resultante un volumen igual de
solución de NaCl 0,2mM. Esta solución, provoca un choque osmótico que es capaz de
romper algunas membranas no afectadas por el tratamiento anterior. Además, las cargas
positivas de los iones Na+ atraerán luego las cargas negativas del ADN manteniéndolo en
la disolución.
El detergente completa la rotura de las membranas al disolver y separar los lípidos de las
mismas. También interviene en la separación de las proteínas que rodean al ADN. Pasar
la mezcla a tubos de ensayo de vidrio y llenar hasta aprox. 1/3 del tubo.
Colocar los tubos en una gradilla para poder adicionar una pizca de ablandador de
Con los pasos anteriores hemos conseguido tener el ADN libre en la disolución acuosa (la
cual contendrá también diversos restos tisulares y celulares en función de la bondad del
filtrado). A continuación hay que separar el ADN haciéndolo precipitar.
Añadir con pipeta 10 ml de alcohol etílico 96% muy frío 0ºC. Se debe dejar escurrir
lentamente el alcohol por la cara interna del tubo cuidando de mantener el tubo inclinado
durante la adición del alcohol. Se formaran 3 fases: el alcohol quedará en la parte
superior, en la intermedia el ADN precipitado y en la inferior los restos de la solución.
Es muy importante evitar que se mezclen ambas soluciones, pues será en la interfase
donde precipitará el ADN.
RESULTADOS
OBSERVACIONES
DISCUSIÓN
CONCLUSIONES
Cuestionario:
Materiales (para cada mesa de práctica, si son 3 mesas multiplicar por 4 cada material):