CURSO : LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

DOCENTE : ELMER RIVEROS AGUERO

ALUMNO : NUÑEZ VELEZ DE VILLA JOHN FRANK

SECCION : A

CICLO : “III “

HUÁNUCO – PERU
1. OBJETIVOS

 Determinar la longitud de Onda Optima.

 Determinar la concentración de una muestra - problema.

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2. PARTE TEORICA

ESPECTROFOTOMETRIA
DEFINICION

La espectrofotometría es el método de análisis óptico más usado en

las investigaciones químicas y biológicas. El espectrofotómetro es un
instrumento que permite comparar la radiación absorbida o
transmitida por una solución que contiene una cantidad desconocida
de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma
sustancia.
Todas las sustancias pueden absorber energía radiante, aun el vidrio
que parece ser completamente transparente absorbe longitud de
ondas que pertenecen al espectro visible; el agua absorbe
fuertemente en la región del infrarrojo.
La absorción de las radiaciones ultravioleta, visibles e infrarrojas
depende de la estructura de las moléculas, y es característica para
cada sustancia química.
Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energía es
absorbida; la energía radiante no puede producir ningún efecto sin
ser absorbida.
El color de las sustancias se debe a que éstas absorben ciertas
longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan
pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbidas.
La base de la espectrofotometría se centra en dos leyes
principalmente:

A. LEY DE BEER

La Ley de Beer declara que la cantidad de luz absorbida por un

cuerpo depende de la concentración en la solución.

Por ejemplo, en un vaso de vidrio tenemos agua con azúcar diluida y en

otro tenemos un vaso con la misma cantidad de agua pero con más
azúcar diluida. El vaso es una celda fotoeléctrica, y la solución de
azúcar es la que se mide su concentración.

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 Según la ley de Beer, si hiciéramos que un rayo de luz atravesara el
primer vaso, la cantidad de luz que saldría del otro lado seria mayor
que si repitiéramos esto en el segundo; ya que en el segundo, las
ondas electromagnéticas chocan contra un mayor número de átomos
y/o moléculas y son absorbidos por estos.

B. LEY DE LAMBERT

En la Ley de Lambert se dice que la cantidad de luz absorbida por un

objeto depende de la distancia recorrida por la luz.

Por ejemplo, retomando el ejemplo de los vasos, pero ahora, pensemos

que ambos tiene la misma cantidad de agua y la misma concentración
de azúcar, pero, el segundo tiene un diámetro mayor que el otro.

Según la ley de Lambert, si hiciéramos que un rayo de luz atravesara

el primer vaso, la cantidad de luz que saldría del otro lado seria
mayor que si repitiéramos esto en el segundo; ya que en el segundo,
las ondas electromagnéticas chocan contra un mayor número de
átomos y/o moléculas y son absorbidos por estos; de la misma forma
que se explicó en la ley de Beer.

Un espectrómetro típico posee cuatro componentes básicos: una

fuente de radiación que tiene intensidad constante en el rango de
longitud de onda que cubre (usualmente es lámpara de tungsteno para
luz visible, y deuterio para ultravioleta), un compartimiento para la
muestra, un monocromador que separa la banda de longitud de onda
deseada del resto del espectro y la dispersa al compartimiento de la
muestra, y un fotodetector, que mide cuantitativamente la radiación
que pasa por la muestra.

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3. PARTE PRACTICA
Materiales:
 Pipeta de 1 y 10 ml
 Fiola
 Tubos de ensayo
 Gradilla para tubo de ensayo
 Regla
 Papel milimetrado
 Lápiz
 Borrador

Equipo:
 Calculadora
 Espectrofotometro

Reactivos:
 Dicromato de Potacio 0.12 g%
 Agua destilada

Procedimientos:
1. Determinación de la longitud de Onda Optima:
(Paso 1)

1 2 3
K2Cr2O7 (0.12%) 2 3 4
H2O(d) c.s.p. 10 ml 8 7 6
[]

 Otro método de cuantificación de sustancias

 L.O. invisible (rayos x, uv, infrarrojos) 0 – 379 nanómetros
 L.O. visible 380 – 750 nanómetros

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2 Fenómenos

Sustancia Pura = 100% absorbancia

Sustancia Mezcla = 50% absorbancia – 50% transmitancia.

(Paso 2)

350 nm 380 nm 420 nm 520 nm 610 nm 680 nm 720 nm 800 nm

Tubo 1
Tubo 2
Tubo 3

(Paso 3)

Grafico 1 Grafico 2 Grafico 3

A A A

L(nm) L(nm) L(nm)

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2. Determinar la concentración de una muestra problema.

1 2 3 4 5 MUESTRA
K2Cr2O7 (0.12%) 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 -
H2O(d) c.s.p. 10 ml 9.5 9.0 8.5 8.0 7.5 -
[] 1 2 3 4 5 X
A 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.25

A
ESPECTRO DE
ABSORVANCIA

L(nm)

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4. CONCLUSIONES

 Se ha llegado a la conclusión de que la espectrofotometría es un

método analítico indirecto porque se basa en la medición de la
absorbancia o transmitancia de las radiaciones; es de gran utilidad
en la actualidad para la identificación de un analito en una muestra
problema.
 La espectrofotometría es el método más usado, debido a que es
sencillo, específico y sensible.

5. CUESTIONARIO

A. Jovana desea hacer su trabajo de investigación en principio no sabe a

que longitud de onda debe trabajar ¿Qué deberá hacer primero?
Una vez conocida la longitud de onda debe elaborar su curva de
calibración y trabaja con 6 estándares cuyos datos son:
(% mg) % Transmitancia
Estándares 1 100 79.5
Estándares 2 200 63.1
Estándares 3 300 50.1
Estándares 4 400 39.8
Estándares 5 500 31.6
Estándares 6 600 25.1
* ¿Qué comentarios le merece el trabajo de JOVANA?

B. Se requiere averiguar el contenido de cierta sustancia en una

muestra “x” y se determina la ABSORVANCIA de 3 muestras de 620
nm al igual que 4 ESTANDARES y los datos son:

[ ] (% mg) A
Estándares 1 10 0.10
Estándares 2 20 0.20
Estándares 3 30 0.30
Estándares 4 40 0.40
Muestra 1 X 0.32
Muestra 2 X 0.15
Muestra 3 X 0.45

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6. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

o http://es.wikipedia.org/wiki/Espectrofotometr%C3%ADa
o http://es.wikipedia.org/wiki/Ley_de_Beer-Lambert
o http://es.wikipedia.org/wiki/Ley_de_Beer-Lambert
o http://es.wikipedia.org/wiki/Espectrofot%C3%B3metro
o http://es.wikipedia.org/wiki/Ley_de_Beer-Lambert
o www.uhu.es/tamara.garcia/quimI/apuntes/TEMA%203.pdf
o www4.ujaen.es/~mferna/master%20olivar/espectrofotom_pres.pdf
o dspace.universia.net/.../6_Fundamentos_de_Espectrofotometria_82
69.pdf
o www.bioquimica.ucv.cl/.../apuntes%20de%20espectrofotometria.pdf
o depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/cineticapractica6_19764.pdf

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