INTRODUCCION

La función del agua es satisfacer las necesidades del ser humano, principalmente
para el consumo. Por ende, es muy importante saber si se encuentra apta para el
consumo humano, según lo indica los parámetros establecidos en la resolución
2115-2007.La cual nos habla sobre las técnicas empleadas para el análisis y sobre
los parámetros establecidos microbiológicamente. Al no realizar el análisis
fisicoquímico y microbiológico al agua, es un riesgo muy alto para el consumidor,
debido a que el agua al estar contaminada por materia orgánica y microorganismos
(bacterias, protozoos, virus), puede generarles enfermedades e intoxicaciones
graves, las cuales pueden ocasionar la muerte, por eso es muy importante realizar
los análisis. A continuación, se va a conocer paso por paso los procedimientos,
equipos y materiales que se van a utilizar para el muestreo de agua tratada, por el
cual al final del muestreo, se hará el respectivo análisis de la muestra y con su
respectivo resultado. En este caso el agua que se analiza no contiene cloro, por
tanto, es agua no tratada, la función de este es desinfectar el agua para combatir
diferentes tipos de microorganismos.
 OBJETIVOS

General:
 La práctica de muestreo de agua se realizó con el fin de lograr identificar en
el agua no tratada, los diferentes tipos de microorganismos, seguido de los
parámetros IN-SITU, del grifo del laboratorio de microbiología.

Especifico:
 Se va a utiliza una bolsa de 100ml, la cual contiene tiosulfato sódico, el cual
neutraliza el cloro residual de la muestra de agua.
 Se utilizara el método de filtración por membrana, en donde se va a utilizar
una membrana filtrante de 0,45um.
 Se utilizará el medio de cultivo cromoculth y la incubadora a 37ºC
 MATERIALES, EQUIPOS Y MEDIOS DE CULTIVO

Materiales:

Papel vinipel Cajas de Petri

Mechero Encendedor

Pinzas Membrana millipore de 0.45 μm

 Tiosulfato de sodio: antes denominado hiposulfito sódico, es un compuesto
inorgánico cristalino que se encuentra con mayor frecuencia en forma de
pentahidrato Na2S2O3·5H2O. Su estructura cristalina es de tipo
monoclínica,utilizado para neutralizar el cloro para el muestreo de agua
tratadas.
EQUIPOS:
 Incubadora: es un equipo de uso frecuente en aplicaciones en el área de
microbiología, como cultivos celulares e incubación de bacterias(37ºC) y
hongo(28ºC).

 Método filtración por membrana: filtra un volumen de agua determinado

de la muestra de agua a analizar a través de una membrana de 0.45 um.
 Multiparametro: es un equipo versátil el cual podemos obtener los
siguientes parámetros: Ph,Mv,ORP,oxigeno
disuleto,conductividad,temperatura,turbidez. En donde se debe dejar
aproximadamente 5 minutos,mientras nos arroja un resultado más
acertado.Luego se hace limpieza del electrodo con agua destilada y por
último se agregan 2 gotas de cloruro de potasio para mantenerlo hidratado.

 Cloro residual: es el más utilizado como desinfectante en el agua para el

consumo humano, debido a su alto carácter de oxidar. Se utiliza el equipo Kit
de Cloro, el cual su uso se emplea de la siguiente manera: se procede abrir
la llave donde se va a tomar la muestra, dependiendo del caudal, si es lento
se deja fluir el agua 5 minutos, pero si es rápido se deja 3minutos.Despues
se purga el beaker,la jeringa y el frasco donde va la muestra 3 veces,
después se llena la jeringa 6cm y se depositan en el frasco, agregándole
luego 3 gotas de Cl2-1,luego 1 gota de Cl2-2,y por último se deposita el frasco
en el medidor de cloro, el cual nos indica la cantidad que se encuentra en la
muestra, según la tonalidad de color rosado que presente.
 Turbidimetro: Instrumento que a través del análisis óptico determina la
cantidad de sustancias en un líquido, se emplea en la medición de partículas
en suspensión en un líquido o gas disuelto, tiene como principio de
funcionamiento la detección de las partículas con una fuente de haz lumínico
y un detector de luz fijado a 90 grados del haz original.
MEDIOS DE CULTIVO
Chromocult-Agar para coliformes: El agar para coliformes Chromocult® es un
medio de cultivo cromógeno diferencial para el análisis microbiológico de muestras
de agua. En un plazo de 24 horas este medio permite la detección, la diferenciación
y la enumeración simultáneas de E. coli y bacterias coliformes del agua potable. El
recuento de coliformes se basa en la capacidad de la ß-D-galactosidasa, una
enzima que es característica de las bacterias coliformes, para escindir el sustrato
Salmon-GAL. La reacción produce colonias de coliformes de color rojo asalmonado.
El recuento de E. coli se basa en la escisión de los sustratos X-glucurónido por la
ß-D-glucuronidasa y Salmon-GAL por la ß-D-galactosidasa, una combinación
enzimática que es característica de E. coli. Cuando hay E. coli presente se escinden
los dos sustratos, lo que da lugar a colonias que adquieren un color entre azul
oscuro y violeta en oposición al rojo asalmonado de otras colonias de bacterias
coliformes. Las bacterias no coliformes aparecen como colonias incoloras o, con
baja frecuencia, de color turquesa. La formulación del CCA contiene, como inhibidor
de las bacterias grampositivas, heptadecilsulfato sódico (por ejemplo, Tergitol 7®),
que no tiene efectos negativos sobre el crecimiento de E. coli ni de las bacterias
coliformes que se desean cultivar.
 METODOLOGIA

Para el analisis de coliformes totales y E.coli se tuvo encuenta el procedimiento

tecnico de determinacion y recuento de coliformes totales y escherichia coli,el cual
se encuentra documentado e implementado utilizando el metodo de filtracion por
membrana acorde a la resolucion 2115 del 2007 ,junto los parametros IN-SITU
deacuerdo con los pasos del manual de instrucciones para la toma,preservacion y
transporte de muestras de agua para el consumo humano para el analisis de
laboratorio,realizado en el laboratorio de microbiologia. La muestra de agua se tomo
directamente del grifo numero 4 de laboratorio,en donde la fuente de captacion es
subterranea.Se deposito la muestra de agua en un sobre esteril de 100ml con
tiosulfato de sodio.
 PROCEDIMIENTOS

1. Se desinfecta el grifo con hipoclorito de sodio, se deja actuar 5 minutos

y luego se procedió a abrir el grifo, si el caudal es débil, se dejar fluir
el agua por 5 minutos, de lo contrario se dejará 3 minutos para luego
tomar la muestra en el sobre de 100ml de tiosulfato de sodio.
2. Se procede a realizar los análisis IN-SITU
3. Se depositó la muestra en la nevera a una Tº de 2 a 5ºC
4. Se preparó el medio de chromocult
5. Se procede a realizar el método de filtración con una membrana
millipore de 0.45um con el sobre de 100ml de la muestra de agua. Se
realiza el procedimiento en la cabina de flujo laminar, es muy
importante de realizar la esterilización de las pinzas, flameándola con
el mechero, junto al equipo de filtración para evitar contaminación de
al a muestra.
6. Al finalizar la filtración se retira la membrana con las pinzas y se
depositan en el medio de chromocult, donde luego se envuelve en
papel minipel y se almacena boca abajo en la incubadora a 37º de 24
a 48 horas.
 RESULTADOS

Cadena de custodia:
 CONCLUSIONES

 Después de realizar el método de filtración por membrana, no se observó

presencia de UFC de coliformes fecales E.coli y totales en el medio de cultivo
chromorult.

 En los análisis IN-SITU,el parámetro que no cumplió con lo estipulado en la

resolución 2115 del 2007, fue el de cloro residual con un resultado de 0.
 REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

 https://www.ecured.cu/Turbid%C3%ADmetro

 https://www.infoagro.com/instrumentos_medida/medidor.asp?id=6086&_medidor_portatil_
multiparametrico_de_calidad_del_agua_+_gps_+_turbidez_hi_9829_tienda_on_line
ANEXOS