Enzimas Imobilizadas
Uso de enzimas imobilizadas
Vantagens
Desenvolvimento de sistemas contínuos
Maior establidade enzimática
Uso mais eficiente do catalisador através
de reutilizações
Flexibilidade no projeto de reatores
Efluentes livres de catalisadores
Maior versatilidade na etapa de separação
Possibilidade de utilização das enzimas
“in-natura”
Desvantagens
Custo adicional de suportes, reagentes e
da operação de imobilização
Perdas de atividade durante a
imobilização
g
Possíveis exigências adicionais de
purificação do catalisador
Técnica pouco adequada a substratos
insolúveis ou de alto peso molecular
Maiores riscos de contaminação na
operação contínua dos reatores
1
 Usos em escala industrial
9Resolução de misturas racêmicas de aminoácidos:

Tecnologia Japonesa
Origem da enzima – microbiana (E. coli)
Suporte usado – DEAE-Sephadex
D,L – R – CH – COOH + H2O L – R – CH – COOH + R’ – COOH

NH – COR
COR’ NH2

+
D – R – CH – COOH

NH – COR’

ç de xaropes
9Produção p de frutose a p
partir de g
glicose:

Enzima – glicose isomerase

Origem da enzima – Streptomyces sp.,
sp Arthrobacter sp.
sp
Suporte usado – proteína entrecruzada ou vidro poroso ativado
2
 Usos em escala industrial
9Produção de ácido 6-amino-penicilâmico (6-APA):

Enzima – penicilina amidase

Origem
g da enzima – E.coli, Bacillus megaterium
g
Suporte usado – bentonita entrecruzada

Penicilina-G + H2O 6 APA + R – COOH

9 Produção de leites e soros deslactosados:

Origem da enzima – Saccharomyces lactis,

lactis Aspergillus niger
Suporte usado – fibras de acetato de celulose ou vidro poroso
ativado

3
4
 Efeitos de Imobilização
Retenção da atividade → algumas moléculas podem ser
desnaturadas ou inativadas por reagentes ou produtos
envolvidos na formação da matriz encapsulante.
encapsulante
Efeitos difusionais → a difusão do substrato e produtos
dos centros ativos para a solução (ou viceversa) ocorre
através de mecanismos de difusão molecular e convectiva.
Efeitos de microambiente → os efeitos eletrostáticos
promovidos no valor KM e no pH ótimo são dependentes
d força
da f iônica
iô i
Efeitos esteroespecíficos
p → resultado de impedimento
p
estéreo, formado pelo suporte, ao acesso de moléculas
grandes ao centro ativo da enzima.
Efeitos na estabilidade → mudanças na estabilidade 5
térmica
Critérios para avaliação de um
sistema
i t enzima
enzima-
i -suportet
Estabilidade de fixação → as forças existentes no
processo de fixação podem ser insuficientes,
acarretando perdas.
Estabilidade enzimática → a fragilização
g da enzima
deve ser evitada
Resistência mecânica → resistir a várias condições
ç
desfavoráveis
Capacidade
p de carga
g → número elevado de unidades
enzimáticas por unidade de área

6
Catálise em Fase Heterogênea
Cinética Intrínseca
Enzima Solúvel
Efeitos conformacionais
Impedimentos estéreos
Cinética Intrínseca
Enzima Imobilizada

Efeitos de partição

Cinética Inerente
Enzima Imobilizada

Restrições difusionais

Cinética Efetiva
Enzima Imobilizada

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 Efeitos de Partição
S
P So
(a)
S Po
P

S
So P
(b) Po S
P

Perfis de concentração de substrato (S) e produto (P)

para enzima imobilizada sujeita a restrições difusionais
com efeito de partição (a) e sem efeito de partição (b).
8
 Deslocamento do
perfil
fil d
de pH
Hdde
glucoamilase de
Aspergillus niger
imobilizada em
DEAE-celulose (EI)
com relação
ç a
enzima em solução
(Esol).

pH − pH o = 0.43 ε' φ k ' T onde ε’ ≡ carga do elétron;

φ ≡ potencial eletrostático do suporte;
T ≡ temperatura absoluta;
k’ ≡ constante de Boltzman
9
 Restrições difusionais
externas
t

V' S o
v ' inh = reação
ã cineticamente
i ti t controlada
t l d
K + So

reação limitada por difusão

v ' dif = h S o
10
 V'
β = S K; βo = So K ; α=
hK

Comportamento cinético de uma enzima imobilizada

sujeita a restrições difusionais externas, empregando o
no de Damkoehler (α) como parâmetro
11
 V' S
K + S β (1 + β o )
η= =
V' S o β o (1 + β)
K + So

Fator de efetividade (η) versus no de Damkoehler (α),

com concentração adimensional de substrato (βo) como
parâmetro, para enzima imobilizada sujeita a restrições
difusionais externas

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Determinação
D t i ã experimental
i t lddos parâmetros
â t cinéticos
i éti
inerentes e número de Damkoehler para uma enzima
imobilizada sujeita a restrições difusionais externas
mediante gráficos de inversos.
inversos
13
 Restrições difusionais
Modelo da Membrana Enzimática i t
internas

J' A x − J' A x + Δx = v ' ' A Δx

dJ'
− = v' '
dx
δS
J' = − D
δx
J’ ≡ fluxo de substrato
v’’ ≡ velocidade máxima de reação por unidade de
volume do suporte
D ≡ coeficiente de difusão do substrato no interior
do suporte

Esquema da membrana com enzima imobilizada 14

uniformemente distribuída em seu interior
 Condições
C di õ de d contorno:
t
z = 0; β = βo
δβ
z = 0.5; =0
δz

Φ = L(V' ' K D)
12
β = S K; βo = So K ; z = x L;

Perfil de concentração de substrato no interior de uma lâmina

enzimática em função do módulo de Thiéle: ( ___ )solução
numérica;; (---)
( ) solução
ç analítica p
para cinética de p primeira ordem

15
 Fator de efetividade médio integrado (η) versus módulo de Thiéle (Φ)
com concentração adimensional de substrato (βo) como parâmetro
para lâmina com enzima imobilizada sujeita a restrições difusionais internas

16
 Restrições difusionais
Modelo de Partícula Esférica i t
internas

Condições de contorno:

ξ= 1; β = βo

ξ = 0; δ β = 0
δξ

Φ = R 3 (V ' ' K D)
12
β = S K; βo = So K ; ξ = r R;

Perfil de concentração de substrato no interior de uma partícula 17

enzimática esférica em função do módulo de Thiéle
 Fator de efetividade médio integrado (η) versus módulo de
Thiéle (Φ) com concentração adimensional de substrato (βo)
como parâmetro para partícula esférica com enzima imobilizada
sujeita a restrições difusionais internas

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 Enzima sujeita
j a restrições
ç
difusionais externas e internas
Nestas condições o número adimensional de Biot como:

h' L
Bi =
D'
onde D’ ≡ coeficiente de difusão de substrato na película estagnada;
h‘ ≡ coe
coeficiente
c e te de ttransferência
a s e ê c a de massa
assa

Este número adimensional representa a magnitude

g relativa das
restrições difusionais internas e externas:

Um valor de Bi elevado implica que as restrições difusionais

externas são de pouca consideração em relação às internas.
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