UNIVERSIDAD NACIONAL

AUTONOMA DE MEXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS
SUPERIORES CUAUTITLÁN
CAMPO 1

Química Industrial
Laboratorio de Bioquímica Microbiana.
Equipo: 10
Grupo: 1551 AB

Profesor:
Alma Susana Gracia Barron
Práctica 3:

“Esterilización de material”
 Objetivos

• Conocer diferentes métodos para la esterilización del material de laboratorio.

• Conocer las condiciones generales para realizar una correcta esterilización
en los diferentes materiales.
• Poner en practica la manipulación de los materiales a esterilizar.
• Conocer las partes de una autoclave por vapor, así como conocer el uso
correcto de esta.
•Poner en práctica las condiciones de una autoclave de vapor mediante el
proceso por calor húmedo de esterilización asi como las condiciones que
afectan en este proceso.

Introducción.

.
La Esterilización es el proceso mediante el cual se alcanza la muerte de todas las formas de vida
microbianas, incluyendo bacterias y sus formas esporuladas altamente resistentes, hongos y sus
esporos, y virus. Se entiende por muerte, la pérdida irreversible de la capacidad reproductiva del
microorganismo. Se trata de un término absoluto, donde un objeto está estéril o no lo está, sin rangos
intermedios.
La desinfección es un proceso donde se eliminan los agentes patógenos reconocidos, pero no
necesariamente todas las formas de vida microbianas. Es un término relativo, donde existen diversos
niveles de desinfección, desde una esterilización química, a una mínima reducción del número de
microorganismos contaminantes.

Cuando una población bacteriana es expuesta a un agente letal físico o químico, se produce una
progresiva reducción del número de sobrevivientes. Existen además un conjunto de condiciones
fundamentalmente ambientales que afectan la cinética de destrucción. Dentro de estos se
encuentran: 1) concentración del agente 2) tiempo de exposición 3) pH del medio 4) temperatura 5)
presencia de materiales extraños 6) resistencia propia del microorganismo 7) número inicial de la
población.
 Materiales y métodos.

Materiales Materiales biológicos Equipo Reactivos

Pipetas graduadas Solución Salina Fisiológica al - Autoclaves - NaCl

0.9 % - agua
Tubos de ensaye -2 Mecheros destilada
Fisher
Cajas Petri

2 matraces
Enlenmeyer

Algodón

Papel estraza

Cerillos o
encendedor
 Procedimiento experimental

Esterilización de material

Pipetas Cajas de Petri Matraces

Tubos de ensaye

Colocar cada una de las

Colocar a Colocar en cada
Colocar 9 ml de cajas Petri con la tapa
cada pipeta matraz un tapón
solución salina al hacia abajo sobre el
un filtro de de algodón que
0.9% en cada tubo papel estraza
algodón no selle
Tomar 0.9
completamente el
gr de NaCl
matraz y
por cada Envolver por separado
procurando no
Tapar cada tubo sin 100 ml de cada una de las cajas
dejar lo flojo.
sellar completamente agua petri
destilada

Nunca colocar la tapa Colocar a cada

hacia arriba cuando se matraz un gorro
Colocar los tubos en el envuelve y anotar la fecha de papel estraza
interior de un bote, Envolver cada una de preparación.
protegerlos con papel. de las pipetas con
Anotar
papel estraza
fecha de
preparación

Marcar sobre el
papel el volumen
de la pipeta

Acomodar el material en la
resistencia para luego
colocarla en la autoclave.
 Pasos para la Función de la
autoclave

Llenar la olla con agua destilada hasta cubrir

la resistencia

Colocar el material dentro de la olla dejando

que el vapor pueda circular entre ellos

Ajustar el tubo de salida de aire y checar

que este dentro del recipiente

Cerrar la tapa ajustando con las mariposas

Calentar la autoclave con mecheros Fisher

hasta alcanzar 121 °C, una vez alcanzado
esta temperatura dejar 15 min a esta
misma.

Cronometrar el tiempo de esterilización, de

acuerdo al material que se esté
esterilizando. (35 minutos en zona verde
para instrumental).

Una vez sin vapor de aire caliente, aflojar las

perillas opuestas y retirar la tapa.

Sacar los paquetes cuando estén fríos y secos

y almacenar.
Resultados.

Análisis de Resultados.

• Se deben colocar los elementos a esterilizar en orden, de manera que

permitan libre circulación del vapor durante la esterilización.
• Se utilizó una ampolla indicadora biológica, esta nos ayudará a el monitoreo
de la esterilización por vapor, estos indicadores contienen esporas llamadas
Geobacillus stearothermophilus que son altamente resistentes a altas
temperaturas y cambian de color ante la presencia de crecimiento por esporas
con ello podremos saber si hubo o no esterilización.
•La solución de NaCl utilizada debe ser fisiológica al 0.9% es decir la misma
osmolalidad que se tiene el agua en la sangre del cuerpo, esta solución
isotónica nos permite diluir las células bacterianas con el fin de proporcionar
una concentración adecuada, determinar recuentos de células, analizar
propiedades genéticas o metabólicas. La solución salina se utiliza de manera
sistemática como diluyente para ajustar la turbidez de las suspensiones de
células bacterianas y así mantener la integridad y viabilidad de las células.
•Se debe checar la presión con el barómetro conectado a la válvula y nunca
debe de llegar o marcar la línea roja, gracias a la presión extra dentro del
sistema el punto de ebullición del agua se elevará de 100°C a 120°C
destruyendo todos los microorganismos en un tiempo de 15 minutos a
temperatura constante.

Recomendaciones:
•Ubicar en posición vertical la válvula de escape de aire. Dejar que haya un
escape vigoroso de vapor, durante 7 minutos y volverla a colocar en posición
horizontal.

• Cambie el tapón de presión cada seis meses, éste debe ser reemplazado
cuando se vuelve duro o se deforme.
• Nunca afloje la mariposa hasta que la presión en el manómetro registre cero.
•Siempre se debe retirar el agua restante, después de cada proceso de
esterilización.

Conclusión.

Se puso en práctica todos los pasos a seguir para la esterilización del material
por el método de calor húmedo con autoclave, es esencial el manejo y buen
uso de esta herramienta así como los cuidados que se deben de tener para
que se tenga el objetivo deseado ya que son muchos factores los que afectan
durante nuestro método, el no sellar bien la autoclave, los diferentes tipos de
materiales a esterilizar y los diferentes tipos de esterilización para cada uno,
el tiempo que se deja esterilizar y la temperatura(120°C) a la que se quiere
llegar entre otros para tener la eliminación de microorganismos en el medio.

Bibliografía: