UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA MESA N°01

FACULTAD DE CIENCIAS
DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

PRACTICA N° 6

DETERMINACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA DE
CREATININA

Integrantes (Apellidos y Nombres):

1. Paulet Nuñez Lopez

2. Jessica Sánchez Herrera
3. Lesly Chombo Luna
4. Rosario Donayre Salinas

Grupo (día/hora) : A* Martes 11:00 am-1:00 pm

Fecha de la práctica : 09/052017

Fecha de entrega de informe : 23/05/2017

2017- I
INTRODUCCIÓN
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La creatinina es un compuesto orgánico que se genera a partir de la degradación de

la creatina, un nutriente útil para los músculos. Más concretamente, viene a ser un
producto de desecho del metabolismo normal de los músculos, que tiende a ser
producida por el cuerpo de forma constante, y normalmente es filtrada por los
riñones y excretada por la orina.
Su parámetro básico se estudia habitualmente en el análisis de sangre rutinario, y
sirve para conocer el buen funcionamiento de los riñones, los principales órganos de
depuración de nuestro cuerpo.
Cuando se diagnostica una creatinina alta en sangre significa que, con una
probabilidad más o menos mayor, nuestros riñones no funcionan correctamente,
precisamente porque no la depuran de forma correcta, causando unos niveles de
creatinina altos en nuestra sangre.
Precisamente, la creatinina sirve para monitorizar y conocer la correcta función de
los riñones.
Por regla general, el rango típico de referencia en las mujeres oscila entre 0.5 a 1.0
mg/dL, mientras que para los hombres es de 0.7 a 1.4 mg/dL. Por lo que en el
presente laboratorio analizaremos la concentración de esta en la sangre y asi
observar si se encuentra dentro de los parámetros normales.
Pero hay veces que la creatinina puede aumentar, motivo por el cual es útil conocer
cómo bajar la creatinina

RESULTADOS
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BLANCO ESTANDAR MUESTRA

H2O Destilada 3.0 mL --- ---

Sol. Estándar de creatinina --- 3.0 mL ---

Muestra clasificada (filtrada) --- --- 3.0 mL

Picrato Na 1.5 mL 1.5 mL 1.5 mL

Absorbancia

M1 0.079 0.216 0.133

M2 0.07 0.148 0.111

M3 0.058 0.205 0.122

M4 0.068 0.071 0.114

M5 0.067 0.223 0.118

M6 0.07 0.076 0.139

Promedio

0.069 0.157 0.123

Diferencia

--- 0.088 0.054

Sol. Stock
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100 mg --------- 100ml

0.6mg ---------- 0.6 ml

0.6 ml ---------- 100 ml

1.8x10-2 mg ----------- 3 ml

1.8x10-2 mg --------- 4.5 ml

X mg ---------- 1 ml
X = 4x10-3

CM = (0.004 x 0.054)/0.088=2.45 X 10-3

2.45x10-3 ---------- 1 ml
11.05x10-3 ----------- 4.5 ml

11.05x10-3 ---------- 3ml filtr.

0.073mg creat. --------- 20 ml

0.073 mg creat. ---------- 2 ml sangre

X ----- 100 ml sangre
X = 3.65 mg creat
E
n mg/dL:
3.65mg/100mL= (0.0365mg/mL) x (1000mL/1L)=36.5mg/L
36.5mg/L x 0.1= 3.65mg/dL

DISCUSIONES
Los valores obtenidos de concentración de creatinina son un poco elevados y escapan
incluso a los rangos más elevados de concentración tanto en hombres adultos como en
vacunos. Se cometieron errores en la práctica de laboratorio. Estos errores pudieron ser de
calibración del espectrofotómetro o tal vez al homogeneizar la muestra o quizá en el filtrado
. Observamos en el cuadro 1 que el valor del blanco es demasiado bajo. Por otro lado
notamos que la concentración de la muestra es menor que la de la standard.
Con valores fuera del rango de valores normales de creatinina en sangre de vacunos tanto
como en hombres adultos , se podría hablar de ciertas deficiencias que se serán explicadas
a continuación.

CONCLUSIONES
Los niveles normales de creatinina en sangre de vacuno son de 1.5 mg/dl, pero los
resultado que se obtuvieron en el laboratorio utilizando el espectrofotómetro fue de
3.65mg/dL, una cantidad un poco superior .En este caso de que la medida creatinina no
fuera extremadamente grande, se podría hablar de un animal con Glomerulopatías
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(enfermedades que se caracterizan por una pérdida de las funciones normales del
glomérulo renal), la cual se traduce en una insuficiencia renal aguda, rápidamente
progresiva y crónica. Pero por ser un valor alto, se debió hacer un mal manejo del equipo y
de los reactivos.

PROBLEMAS ENCARGADOS

1. Una disolución aislada de E. coli de una absorbancia de 0.7930 a 260nm en

una celda de 1cm a pH 4.5. Si el E1% 1cm es 197. calcular la concentración en
mg/ml.

Concentración ST/Absorbancia ST = Concentración Muestra/Absorbancia Muestra

(1mg)/Absorbancia E = X/0.7930
197 = X/0.7930
X = 156.221mg/ml
2. Calcule el coeficiente de extinción molar a 361nm para la acuocobalamina en
tampón fosfato 0.1M a pH 7.0 a partir de los siguientes datos obtenidos en una
celda de 1cm.

SOLUCIÓN CONC. x10-5 M I0 I

A 2.23 93.1 27.4

B 1.90 94.2 32.8

Para “A”
A = ε.l.c
2 –log(93.1)= (ε)(1)(2.23 x10-5)
ε = 0.031/2.23 x10-5
ε = 1392.39
A = ε.l.c
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2 –log(27.4)= (ε)(1)(2.23 x10-5)

ε = 0.56/2.23 x10-5
ε = 25112.11
Para “B”
A = ε.l.c
2 –log(94.2)= (ε)(1)(1.90x10-5)
ε = 0.026/1.90 x10-5
ε = 1368.42
A = ε.l.c
2 –log(32.8)= (ε)(1)(1.90 x10-5)
ε = 0.48/1.90 x10-5
ε = 25263.16

(25263.16+1368.42+25112.11+1392.39)/4 = 13284.02

3. En una determinación de glucosa se obtuvieron los siguientes resultados:

Glucosa (mg%) 50 75 100 125 150 175 200 250

Transmitancia 92.9 89.9 86.3 84.3 81.3 78.7 73.8 70.5

Hallar el factor de calibración promedio, y la concentración de 2 muestras

de suero que resultaron con una transmitancia de 88.3 y 85.11.

Glucosa 50 75 100 125 150 175 200 250

(mg%)

Transmitanci 92.9 89.9 86.3 84.3 81.3 78.7 73.8 70.5

a
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Absorbancia 0.032 0.046 0.064 0.074 0.090 0.104 0.132 0.152

Factor de 1562.5 1630.4 1562.5 1689.1 1666.6 1682.6 1515.1 1644.7

Calibración 3 9 7 9 5 4

Factor de Calibración Promedio = 1619.23

Para un suero con transmitancia de 88.3
Concentración ST/Absorbancia ST = Concentración Muestra/Absorbancia Muestra
1619.23 = X/[2-log(88.3)]
1619.23 = X/0.054
X = 87.44mg/ml
Para un suero con transmitancia de 85.11
Concentración ST/Absorbancia ST = Concentración Muestra/Absorbancia Muestra
1619.23 = X/[2-log(85.11)]
1619.23 = X/0.070
X = 113.35mg/ml

4. Para evaluar un metabolito “x”, una muestra fue sometida a dilución tomando
una parte de ella con 4 partes de agua y luego fue comparada
espectrofotométricamente con un estándar de 10mg/ml obteniéndose las
siguientes lecturas de absorbancia: Blanco=0.0023, Estándar=0.357,
Muestra=0.677. calcule la concentración de la muestra en mg%.

Concentración ST/Absorbancia ST = Concentración Muestra/Absorbancia Muestra

10/0.357= X/0.677
X = 18.96mg/ml
94.8mg/ml de metabolito “x”
9480mg%

5. ¿Qué es el factor de dilución? Explique mediante un ejemplo.

El factor de dilución es el número total de volúmenes al que se lleva un volumen

dado de muestra original, o parte alícuota. En otros términos, el factor de dilución
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también corresponde a la división de la concentración de la muestra original sobre la

concentración de la muestra diluida.
Ejemplo: Cuando un volumen de una solución A de concentración 0,1 M se diluye
con un volumen de agua destilada, haciendo un total de 2 volúmenes de solución
diluida, se habla de una dilución 1:2 (también expresada como ½), y la
concentración B teórica así lograda es 0.05 M.

Si la dilución buscada es 1:10, se tomaría un volumen de la solución 0,1M y se

añadirían 9 volúmenes de disolvente, con lo que la concentración teórica lograda
sería 0,01 M.

6. ¿Qué es el factor de calibración? Explique mediante un ejemplo.

El Factor de Calibración de una técnica fotométrica es absolutamente necesario

para determinar la concentración desconocida de la molécula en estudio, mediante
la ecuación de Lambert-Beer.

7. Explique la preparación de la muestra problema (sangre) para la determinación

de creatinina.

● Se deposita en un tubo de ensayo 14 mL de agua destilada, 2 mL de

sangre, 2 mL de Na2WO4 (agente desproteinizante) y 2 mL de H2SO4.
Aquí la sangre de desnaturalizara por acción del Na 2WO4. Se dejara
reposar por unos minutos.
● Luego de someterá a filtrado, en este proceso las proteínas
desnaturalizadas (hemoglobina) quedará impregnado en el papel filtro.
● La sangre filtrada será incolora pero aun contendrá creatinina, glucosa,
triglicéridos entre otros. Pero, ya que el objetivo es obtener solamente
creatinina, la solución obtenida será sometida a una reacción (reacción
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de Jaffé) en donde se le hará reaccionar con picrato, el cual formara

ácido picrático.

8. Diferencias entre una solución stock, solución estándar y solución trabajo

● Solución estándar: Este término es utilizado de referencia tan concentrados
que no pueden ser usados directamente durante las mediciones, deben de
ser diluidos adecuadamente, se prepara con reactivos a alta pureza y se
deben pesar con exactitud la cantidad calculada para obtener la
concentración.
● Solución stock: Es una solución estándar intermedia entre la solución madre
y los estándares de trabajo.
● Solución trabajo: Son solución estándar de concentración exactamente
conocida normalmente preparada por dilución conveniente de la solución
stock y dentro del rango de concentración establecida para el método
utilizado.

9. ¿Qué función bioquímica cumple la creatinina? Escriba su fórmula.

Gran parte de la creatina se almacena en todos los músculos del cuerpo (alrededor
del 90%), se sabe que un adulto que tenga 70 kg de peso corporal posee cerca de
120 g de creatina. La finalidad del almacenamiento es la creación junto con el
fósforo de la fosfocreatina (PCr) presente en las células musculares de los
vertebrados así como algunos invertebrados, se encuentra presente con la enzima
creatina quinasa. Los músculos no son capaces de sintetizar la creatina y es por
esta razón por la que la toman del torrente sanguíneo. La creatina constituye la
fuente inmediata y directa para regenerar ATP (Adenosín trifosfato) un constituyente
energético de las células musculares.

10. ¿Qué papel cumplen los siguientes reactivos en la cuantificación de

creatinina?
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ü Tungstato de sodio: Es un desproteinizante utilizado para desnaturalizar y

precipitar la proteína (hemoglobina) por el cambio brusco que sufre por el
cambio de pH. A este proceso se le conoce con el nombre de
“Desproteinizacion de Folin-Wu”
ü Ácido sulfúrico: Mantendrá el pH, que cambio a causa del tungstato de
sodio, constante
ü Acido pícrico: Se basa en la reacción de Jaffé. La creatinina con el ácido
pícrico en medio alcalino formando un complejo de color rojo a una
longitud de onda entre 510 – 520 nm.

11. El coeficiente de extinción molar de un complejo yodo – glucógeno a 450 nm

es 0,20. Calcule la concentración del glucógeno en una solución de complejo
en yodo que tiene una absorbancia de 0,36, medida en una cubeta de 3 cm.
A=a.b.c
0.36=0.2x3xc
c=0.6M