“AÑO DE LA LUCHA CONTRA LA CORRUPCIÓN E IMPUNIDAD”

UNIVERSIDAD NACIONAL JOSE FAUSTINO SÁNCHEZ CARRIÓN

FACULTAD DE INGENIERÍA QUIMICA Y METALURGICA

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA METALURGICA

NORMAS DE SEGURIDAD Y MATERIALES DE LABORATORIO

CURSO: Biotecnología

CICLO: V

DOCENTE: Ing. Ocrospoma Dueñas, Robert

CARRERA: Ing. Metalúrgica
INTEGRANTE:

 Gaspar Corcino, Jolsen

HUACHO – PERÚ

2019
 PRACTICA N°01

NORMAS DE SEGURIDAD Y MATERIALES DE LABORATORIO

1. INTRODUCCIÓN
Los estudiantes de los laboratorios de microbiología trabajan con microrganismos
infecciosos o con materiales que los contienen. Algunos de estos son patógenos o
con potencial de convertirse en ellos. De acuerdo a lo anterior, es importante que
los estudiantes que trabajan en el laboratorio apliquen todos los conceptos de
Bioseguridad. En 1983, la OMS publico la primera edición del Manual de
bioseguridad en el laboratorio; en la que se alentaba a los países a aceptar y aplicar
conceptos básicos en materia de seguridad biológicos, así como elaborar códigos
nacionales de prácticas para la manipulación sin riesgo de microorganismos
patógenos en los laboratorios que se encuentran dentro de sus fronteras nacionales
la bioseguridad en el laboratorio se refiere al conjunto de medidas preventivas
destinadas a proteger la salud de las personas que allí trabajan. El propósito básico
es obtener un ambiente de trabajo seguridad y ordenado. Para la elaboración de
un análisis microbiológico es importante identificar en forma precisa el
microorganismo involucrado, para ello debemos obtener un cultivo axénico
evitando a contaminación de origen ambiental. Siendo entonces indispensable un
resultado veraz por parte del laboratorio; debemos descartar o eliminar falsos
positivos causadas por esta clase de microbiota. Para realizar una excelente
práctica debemos comprender los principales básicos de la esterilización.
La destrucción completa de todo el microorganismo presentes sobre cualquier
material o dentro de él es indispensable en todos los procedimientos analíticos
como la preparación de medios de cultivos y otros materiales.
2. MARCO TEÓRICO
2.1 BIOSEGURIDAD
1. El ingreso de laboratorio, debe estar regulado por el responsable del
mismo y limitado al personal autorizado.
2. El personal que ingresa a las instalaciones debe responsabilizar del
cumplimiento de las normas de bioseguridad.
3. El laboratorio siempre debe permanecer LIMPIO Y ORDENADO,
durante la ejecución de la preparación de las muestras, siembra y lectura
de las pruebas experimentales.
4. Todas las áreas deben estar rotuladas con la señal de riesgo biológico.
5. No pipetee con la boca, utilice para ellos bombas de pipeteadores o el
dispositivo adecuado.
6. Ingrese al laboratorio con mandil blanco, abotonado y limpio.
7. Las mesas de trabajo deben permanecer libres de objetos y pertenencias
personales.
8. Las puertas y ventanas deben permanecer libres de objetos y pertenencias
de las prácticas.
9. Lave correctamente las manos al inicio y al final de las prácticas.
10. AL INICIO Y AL FINALIZAR las pruebas experimentales limpie la
superficie de trabajo con solución desinfectante y ubique adecuadamente
los bancos y materiales y equipos utilizados.
11. Las personas con cabello largo deben recogerlo al inicio de las actividades,
así como utilizar, mandil blanco y sin esmalte.
12. Prohibido comer, beber, aplicarse cosméticos, utilizar zapatos cerrados y
mantener las uñas cortas, limpias y sin esmalte.
13. No manipule equipos sin la autorización respectiva y menos si no se posee
las destrezas para hacerlo.
14. Realice el transporte de muestras dentro o entre laboratorios en los
recipientes apropiados (cajas herméticas o hielo seco), con los cuales se
eviten salpicaduras y sean de fácil desinfección.
15. Al finalizar las practicas, disponga el material contaminado o limpio en
sus respectivos lugares, pero No sobre las mesas de trabajo.
16. Evitar el contacto de piel con material infeccioso. El uso de guantes es
adecuado para la manipulación de muestra o cultivos de patógenos. Si a
 utilizados guantes, deberá desecharlos antes de salir del trabajo y NO tocar
implementos, puertas, equipos o materiales con ellos puestos.
17. Los derrames y accidentes deben ser informados inmediatamente al
profesor del laboratorio.
18. Cada grupo de trabajo debe contar son su equipo básico de trabajo (jabón
desinfectante, lápiz o marcador de vidrio, papel toalla, asa bacteriológica,
guantes pipetas de 1,5 y 10 Ml, medios de cultivos de acuerdo a lo
solicitado por el docente, 06 placas Petri, probetas de 10 mL, Frasco de
vidrio1 L).
2.2 DESINFECCION Y AGENTES DESINFECTANTES
La desinfección describe la reducción de microrganismos presentes en la
superficie de implementos, equipos y manipuladores, utilizando sustancias
químicas denominadas desinfectantes. La desinfección no implica
esterilización pues no se eliminan todos los microrganismos y sus estructuras
de resistencia. Los desinfectantes son sustancias químicas aplicadas sobre el
pie y mucosa.
Todo buen desinfectante deberá cumplir las siguientes condiciones:
a) Reducir el mayor número de microorganismo (al menos todos los
patógenos).
b) No debe ser corrosivo, toxico o irritante para los tejidos.
c) Debe ser soluble en agua
 Para el laboratorio de microbiología existen diferentes moléculas que pueden ser
utilizadas con fines de desinfección.

AGENTE MECANISMO DE ACCION APLICACIÓNES

- Efecto letal por la contaminación

Halógenos
compuestos clocados
Hipoclorito de sodio (NaClO)
rápida con proteínas.
- Los clorados reaccionan con el - Purificación del agua.
agua para formar ácido hipódromo - Somatización de utensilios
que es bandeada. en industria.
- Oxidante, corrosivo para metales, - En superficie se
de degradación con el tiempo, se recomienda una
recomienda almacenarla en frasco concentración de 1% con
color ámbar, guardar las soluciones variaciones entre 1g/L y 10
en frascos homéricamente cerrada, g/L
protegidos de la luz, el calor y la
humedad, preparar la cantidad para
uso.

- Altera la estructura de proteínas e

Componentes fenólicos induce su precipitación. Recomendación para la
Fenol - Surfactante. desinfección en solución al
- Alteración de la membrana celular. 5%
- Irritante y alternamente toxico.
Compuesto con base en todo. - No se tiene claro el mecanismo de - La tintura de lodo es
Tintura de lodo, solución acción. Se presume que ocasiona la empleada como antiséptico.
Povidona- lodo. precipitación de las proteínas. - Efectivo contra esporas,
- Agente activo de superficie. hongos y virus.
Agentes desinfectantes comúnmente utilizados en microbiología de acción. Realizar los
cálculos para la preparación de las siguientes soluciones.

C1*V1=C2*V2

Como el cloro viene a 5.25% = 52500 ppm

C1: Concentración de la lejía a usar (52500 ppm) V1: Volumen de lejía

C2: Concentración de lejía requerida de acuerdo al área a desinfectar (50, 100, 200, 400
ppm). V2: Volumen de agua que se requiere preparar (1, 2, 5, 10,20 litros).

Ejemplo: Preparar una solución de cloro activo de 50 ppm, para un volumen total de 1
litro, a partir de lejía al 5,25%. C1*V1=C2*V2

52500ppm * V1= 50 ppm * 1 L

V1= 1000ml * 50ppm / 52500ppm = 0,95 mL

Para preparar una solución a 50mppm y para un volumen de 1 litro se requiere 0,95mL
de lejía del 5,25%.

RESULTADOS: Se reporta

Lejía Concentración Volumen a volumen de volumen de

(concentración requerida preparar (L) lejía (mL) agua (L)
de hipoclorito (ppm)
de sodio) %
5,25 50 1 0,95 0,99905

2.3 ESTERILIZACION
La esterilización es la eliminación de todos los microrganismos que contiene
un objetivo o sustancias, por lo general se acondicionan de tal forma que no
pueden contaminarse nuevamente. El material que se utiliza para
determinación de microorganismo debe esterilizarse previamente para llevarlo
del microbiota ambiental. Existen varios métodos de esterilización, los
agentes físicos (calor seco, calor húmedo, radiaciones) y agentes químicos
 (cloro y compuesto clorados, aldehídos, óxidos de estileno, compuestos
ferrólicos, ácidos y álcalis.
2.4 LAVADO Y ESTERILIZACION DE MATERIALES DE VIDRIO
Los microrganismos pueden producir enfermedades cuando infectan
personas, animales y plantas cuya gravedad oscila entre una infección débil,
intoxicación e incluso la muerte. Pueden contaminar los alimentos y producir
cambios físicos y químicos en ellos, haciéndolos en algunos casis incomibles
e incluso venenosos. Los microrganismos son responsables también de la
alteración de muchos otros materiales, generando graves pérdidas
económicas. Por ello es indispensable disponer de procedimiento para
controlar la contaminación y el crecimiento microbiano. Las principales
razones para controlar la contaminación y el crecimiento microbiano. Las
principales razones para controlar a los microrganismos pueden resumirse de
la siguiente forma:
 Para evitar la transformación de las enfermedades y las infecciones.
 Para eliminar los microrganismos de un hospedador que está infectado.
 Para elimina microrganismos de diferentes materiales y así evitar su
deterioro y alteración. Se utilizan varios términos específicos para
escribir a estos agentes y procesos.

Esterilización: El proceso que destruye todas las formas de vida se llama

esterilización. Un objeto, estéril en sentido microbiológico está libre de
microrganismo vivo. Un objeto o una sustancia están estéril o no está estéril,
no puede estar nunca semiestéril o casi estéril.

Desinfectante: Un agente, usualmente un producto químico que mata las

células vegetativas, pero no necesariamente las formas esporuladas de los
microrganismos productores de enfermedades, se denomina un
desinfectante.

Antiséptico: Una sustancia que se opone a la infección (sepsis) o previene

crecimiento o acción de los microrganismos, bien se destruyendo o bien
inhibiendo su crecimiento o actividad, se denomina un antiséptico. El
término está usualmente asociado a sustancias aplicadas al cuerpo.
Higienización:

Un agente que reduce la población microbiana hasta niveles que se juzgan

seguros para las exigencias de la salud pública se denomina un higienizaste.
Usualmente es un agente químico que mata el 99.9% de las bacterias en
crecimiento. Los higienizaste suelen aplicarse a objetos inanimados y
generalmente se emplean en el cuidado diario de equipos y utensilios en las
plantas lecheras y de preparación de alimentos, así como para los vasos,
platos y utensilios en los restaurantes. El proceso de desinfección producirá
higienización.

Germicida (microbicida):

Un agente que mata las células vegetativas, pero necesariamente las formas
esporuladas de los gérmenes se llaman germicida (microbicida). En la
práctica, germicida es casi sinónimo de desinfectante. Pero un germicida se
usa generalmente para toda clase de gérmenes microbios y para cualquier
aplicación.

Bactericida:

Un agente que mata las formas vegetativas de las bacterias. Del mismo modo,
los términos fungicida, viricida y esparcida se refieren a agentes que matan a
los hongos, virus y esporas respectivamente.
 Bacteriostasis:

Una condición en la que se previene (se Inhibe) el crecimiento de las

bacterias se denomina bacteriostasis (adjetivo: bacteriostático. Del mismo
modo, fungistático describe la acción de un agente que detiene el crecimiento
de los hongos. Los agentes que tienen en común la capacidad de inhibir los
crecimientos de los microorganismos se designan colectivamente, como
agentes microbiostaticos.

Agentes antimicrobianos: El término de agente antimicrobiano se refiere a

un agente interfiere con el crecimiento y metabolismo de los microbios. En el
uso común, el término denota inhibición de crecimiento y cuando se refiere a
grupos específicos de organismos, suelen usarse con frecuencia los términos
tales como antibacteriano o anti fúngico. Algunos agentes antimicrobianos se
utilizan específicamente para el tratamiento de infecciones, estos se
denominan agentes terapéuticos.

3. OBJETIVOS
Conocer los aspectos básicos de la bioseguridad y reglas generales de trabajo
para el desarrollo de actividades en el laboratorio de microbiología.
Reconocer las metodologías para la desinfección de superficie e implementos
del laboratorio.
Aplicar métodos utilizados para la esterilización de medios de cultivos
materiales y accesorios utilizados en el laboratorio
Reconocer los diferentes materiales y equipos que se usan en el laboratorio
para el desarrollo de las prácticas programadas.
4. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS
EL MICROSCOPIO

Un microscopio simple no es más que una lente biconvexa, es decir solo tiene
un sistema de lentes, pero al microscopio compuesto emplea dos sistemas de
lentes separados, con ellos mayores aumentos. Al ser el microscopio compuesto
un instrumento fundamental en microbiología, el conocer los principios básicos
de la microscopía tabla pericia en el empleo y la manipulación de este
instrumento, son requisitos imprescindibles para casi cualquier estudio en esta
ciencia.
DESCRIPCIÓN DE LAS PARTES DEL MICROSCOPIO PARTE
MECÁNICA

Pie base o soporte basal. Es una pieza maciza y pesada para asegurar la
estabilidad del aparato y servir de soporte a sus demás partes. Platina: es
una pieza metálica redondo o cuadrada, donde se colocan las
preparaciones; tienen en el centro una abertura por la cual pasan los rayos
luminosos procedente del sistema de iluminación. En el microscopio
corriente puede estar fija o adosada a un carro con tornillos de cremallera
que permiten dos movimientos de translación para controlarla, y también,
los tornillos están graduadas para medir su desplazamiento.

Tubo:

En él está instalado el sistema óptico. Está constituido por dos tubos o

cuerpos. Uno de ellos es terno, en el cual se encuentran la cremallera y el
ocular y otro interno adosado al interior, donde está el objetivo. Son
corrientes en los aparatos modernos los binoculares, le facilita la visión
con ambos ojos.

Revólver:

Pieza circular y giratoria. En ella se insertan en sentido antihorario los

objetivos; sin embargo, su movimiento, para colocar en que posición un
objetivo, debe ser en sentido horario. Brazo o soporte vertical: parte por
medio de la cual debe hacerse el microscopio para trasladarlo de un lugar
a otro. Carro o escuadra, pinzas: Parte mecánica accionables, mediante dos
tornillos que permiten movimientos laterales o longitudinales para colocar
la preparación en posición de observación. En algunos casos es
reemplazables por pinzas. Tornillo micrométrico: Tornillo de paso largo y
por el cual se ejecutan desplazamiento a veces imperceptibles a simple
vista. Tornillo micrómetro: encontrar posición al anterior su paso es
pequeñísimo y su desplazamiento a veces imperceptibles. Debe utilizarse
con sumo cuidado.
PARTE OBTICA

1. OBJETIVOS: Son uno de los elementos más importantes del

microscopio. Están formado por la reunión de varias lentes para corregir
las aberraciones. Deben tratarse con mucho cuidado, pues cualquier golpe
puede variar la posición de las lentes y averiarlas. Se atornilla a la parte
del tubo o revolver porta-objetivo. En cuanto a los objetivos tenemos dos
clases

2. OBJETICOS SECOS: Son los que se emplean más corrientemente.

Entre la lente frontal y el portal objetivo solo hay aire. A este grupo
perteneces los objetivos a menores aumentos tales como 10X a 40X.

3. OBJETIVOS DE INMERSIÓN: Como se había mencionado

anteriormente se llama así aquellos en los cuales, para la observación de
interponerse entre la lente frontal y la preparación de un líquido como por
ejemplo aceite.

4. OCULARES: Los forman dos lentes separados por un diafragma y van

montados en la parte superior del tubo. La lente superior se llama lente
ocular; inferior lente de campo. Sistema de iluminación: Se encuentra
situado bajo la platina y tiene la misión de iluminar los objetivos por medio
de la luz transmitida, con excepción del microscopio que utilizan el sistema
de iluminación descrito anteriormente.

Espejo: Redondo y adaptable a las más variables posiciones, tiene una

superficie plana y otra cóncava que pueden intercambiarse a voluntad.
Diagrama: Va montado sobre la platina y permite graduar según la
necesidad, la intensidad luminosa; el más usado hoy es el tipo iris,
accionable mediante manecilla lateral.

Condensador: consta de un sistema de lentes colocados bajo la platina. Su

función es condensar el haz de rayos luminosos, permitiendo una
luminosidad uniforme del campo microscópico. Se acciona por medio de
un tornillo, el cual permite graduar la intensidad.
RECOMENDACIONES PARA LA ADECUADA CONSERVACION
DEL MICROSCOPICO

No tocar nunca las lentes: Si se ensucian estas, limpiar suavemente con papel
de seda especialmente para lentes.

No dejar No inclinar el microscopio cuando se está trabajando con aceite de

inmersión. Este puede caer el sistema mecánico de la platina de donde es
difícil limpiarlo, o puede gotear al condensador y allí solidificarse.

Cuando no esté en uso el microscopio, cubrirlo con la funda y guardarlo.

No bajar el tubo del microscopio con el tornillo de enfoque grueso mientras

se está mirando por el ocular.
INCUBADORA Una incubadora sirve para mantener y hacer crecer cultivos
microbiológicos regulando factores de crecimiento viables como por ejemplo
la temperatura, la humedad y la ventilación. Existen incubadoras que tienen
la capacidad de controlar temperaturas extremadamente bajas (incubadoras
microbiológicas), humedad y nivelación de dióxido de carbono (incubadora
para cultivos celulares). Las incubadoras microbiológicas se usan
principalmente en el crecimiento y almacenamiento de cultivos bacterianos a
temperatura entre 5 y 37oC. Por su parte las incubadoras para cultivo celular
trabajan a temperatura de 37oC, simulando las condiciones de la temperatura
corporal.

ESTUFA: La estufa de secado es un equipo que se utiliza para secar y

esterilizar recipiente de vidrios y metal en el laboratorio. Se identifica también
con el nombre de Horno de secado.
AUTOCLAVE: Utiliza vapor de agua a 121°C durante 15 a 20 minutos. Esta
temperatura se logra si se obtiene una presión de una atmósfera relativa (dos
atmósfera absoluta o 15 libras de presión por pulgada al cuadrado), ya que el
aumento de presión provoca aumentos proporcionales en el punto de
ebullición del agua. Es el mecanismo de destrucción microbiana más efectivo
y bien utilizado asegura esterilización (destruye la forma de vida vegetativa y
esporulada).

CONTADOR DE COLONIAS:

Está diseñado para el conteo rápido y preciso de las colonias de baterías y

moho en placas de agar de cultivo. Construida con un registrador eléctrico,
operado a través de marcas. Cada vez que un contador es registrado se emite
un sonido para verificar su entrada. El sistema de sensor de presión provee
sensibilidad uniforme sobre todo el campo de trabajo. Un botón resetea el
contador poniéndolo en cero. Se ajusta de manera flexible a cápsulas de ptri
e 10 a 15cm, su brazo ajustable permite posicionar la lente en varios ángulos
para lograr una significación de 1.5X. La plataforma de fondo puede ser
cambiada de blanco a negro para facilitar el conteo, la lámpara provee un
campo de iluminación uniforme en toda el área de trabajo.
 PLACAS PETRI: Son recipiente de vidrio, plásticos u otros materiales
constituidos por dos piezas; una tapa y una base, la base descansa sobre la
tapa y se utilizan para colocar los medios de cultivo sólidos y se logra el
desarrollo de cultivos en amplia superficie y facilitar el conteo de las colonias.

5. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Para esta experiencia tuvimos que ir al laboratorio para poder observar
cada uno de los materiales y equipos que aquí se encuentran.
Como siguiente paso será el reconocimiento de estos materiales, es decir
saber para qué son utilizados
6. RESULTADOS
La experiencia con estos materiales y como resultado obtuvimos los
conocimientos sobre la ficha técnica de estos.
7. CONCLUCIONES
Cada equipo y material que se encuentra en el laboratorio tiene un uso
específico para análisis que se vayan a realizar, es por ello que fue
necesario adquirir estos conocimientos para los experimentos que se vayan
a ser en adelante.
8. RECOMENDACIONES
Recomiendo que el ingeniero nos enseñe las funciones de cada
instrumento del laboratorio
9. CUESTIONARIO

1. ¿Qué es la bioseguridad; de cuantos niveles consta y que características

posee cada una de estos niveles?

La bioseguridad se logra mediante la aplicación de diversos grados de control

en el laboratorio, a través del diseño y las restricciones de acceso a las
instalaciones, la experiencia y formación del personal, el uso de equipos de
contención, y métodos seguros de manejo de materiales infecciosos.
Nivel de Bioseguridad 1- representa un nivel básico que se fundamenta en
prácticas microbiológicas estándar sin ninguna barrera primaria o secundaria
especialmente recomendada, salvo una pileta para lavado de manos.

Nivel de Bioseguridad 2- son aplicables a laboratorios educativos, de

diagnóstico, clínicos u otros laboratorios donde se trabaja con un amplio
espectro de agentes de riesgo moderado que se encuentran presentes en la
comunidad y que están asociados con enfermedad humana de variada
gravedad.

Nivel de Bioseguridad 3- pueden aplicarse a instalaciones clínicas, de

producción, investigación, educación o diagnóstico, donde se trabaja con
agentes exóticos o indígenas con potencial de transmisión respiratoria, y que
pueden provocar una infección grave y potencialmente letal.

Nivel de Bioseguridad 4- son aplicables al trabajo con agentes peligrosos o

tóxicos que representan un alto riesgo individual de enfermedades que ponen
en peligro la vida, que pueden transmitirse a través de aerosoles y para las
cuales no existen vacunas o terapias disponibles.

2. Mencione las diferencias entre un laboratorio de microbiología y un

laboratorio convencional

Los equipos: Los laboratorios convencionales poseen equipos estándar para

prestar servicios de salud ya establecidos, mientras que los laboratorios de
microbiología tienen equipos personalizados bajo parámetros requeridos.

Estudios: Los laboratorios convencionales estudian parámetros referido a la

salud en general, mientras la microbiología, estudia materias muy pequeñas,
mucho más de la convencional.

3. ¿Cuáles son los riesgos y problemáticas en el grupo que se tendrán al

no seguir las indicaciones recomendadas?

Al no utilizar las esas necesarias al surgir un accidente estas personas podrían

salir lesionadas gravemente.

4. Diferencia entre limpieza y desinfección

 Limpiar implica quitar gérmenes y suciedad de superficies u objetos. Este
proceso no elimina por completo los gérmenes, disminuye la cantidad y el
riesgo de propagar la enfermedad.

Desinfectar implica eliminar los microorganismos nocivos y evitar su

desarrollo. Este proceso no limpia necesariamente superficies sucias, pero al
destruir gérmenes se disminuye considerablemente el riesgo de propagar
enfermedad o infecciones.

5. Que es asepsia.

Asepsia es un término médico que define al conjunto de métodos aplicados

para la conservación de la esterilidad. La presentación y uso correcto de ropa,
instrumental, materiales y equipos estériles, sin contaminarlos en todo
procedimiento quirúrgico se conoce como asepsia.

10. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Fernández. E; Santacruz l. 2012. Manual de prácticas de laboratorio de

microbiología general-Universidad

Autónoma Metropolitana