Actualizada febrero 2018

Departamento de Biotecnología y
Tecnología Alimentaria

ANÁLISIS INSTRUMENTAL

Guía de Actividades de Laboratorio

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 TRABAJO PRÁCTICO N° 1

ESPECTROMETRÍA SUBJETIVA

I. Objetivo.
Este trabajo práctico tiene por objetivo lograr que el estudiante adquiera habilidad en la compara-
ción visual de intensidades de color en soluciones utilizando tubos de Nessler.
Para este fin se ensayará con el ion peroxotitanio(IV).

II. Desarrollo.
a. Aparatos. Tubos de Nessler de 50 cm3 bureta de 10 cm3
gradilla para tubos de Nessler pipeta graduada de 10 cm3
probeta graduada de 100 cm3 soportes y abrazaderas
b. Reactivos. Ácido sulfúrico 1 + 19
agua oxigenada al 3 %
solución patrón de titanio (1,0 cm3 0,10 a 0,15 mg TiO2)
agua destilada
c. Procedimiento.
Dentro de uno de los tubos de Nessler vierta, medido mediante bureta, 1,0 cm3 de solución patrón
de titanio, agregue 35 cm3 de ácido sulfúrico y 5 cm3 de agua oxigenada; complete el volumen con agua.
Homogeneíce.
Utilizando los tubos restantes repita el procedimiento, pero con porciones de 2,0, 5,0 y 10,0 cm3 de
solución patrón de titanio.
Dentro de un quinto tubo vierta, medidos mediante pipeta, 10,0 cm3 de solución muestra y continúe
según se describió.
Efectúe la comparación de la intensidad del color obtenido a partir de la solución de la muestra con
la de las diferentes soluciones tipo mirando en la dirección del eje de cada tubo, sobre fondo blanco y sin
apoyar.
Si la intensidad de color del tubo que contiene la solución muestra se halla entre dos de las solucio-
nes tipo prepare una nueva, de contenido intermedio, y efectúe la comparación correspondiente.

III. Expresión de los resultados.

En función de las observaciones realice los cálculos correspondientes.
 TRABAJO PRÁCTICO N° 2

INTRODUCCIÓN A LA ESPECTROMETRÍA OBJETIVA

I. Objetivo.
Este trabajo práctico tiene por objetivo lograr que el estudiante adquiera habilidad en la
interpreta- ción de los valores indicados por un instrumento y en la construcción de una curva analítica
de calibración.

II. Desarrollo.
a. Aparatos. Matraces aforados de 100 cm3 cubetas
3
bureta de 25 cm soportes y
abrazaderas espectrómetro de absorción de filtro
b. Reactivos. Ácido nítrico 1 + 139 (0,71 cm3 de HNO3 conc en 100 cm3 de
solución) solución patrón de permanganato de potasio 1,00.10-3 F en
ácido nítrico 1 + 139
c. Procedimiento.
1ª. parte. Espectrograma de absorción.
Dentro de un matraz vierta, medidos mediante bureta, 25,0 cm3 de solución patrón de
permangana- to de potasio; complete el volumen con ácido nítrico. Homogeneíce.
Dentro de una de las cubetas del espectrómetro vierta ácido nítrico (blanco) y dentro de otra la
so- lución preparada según se describió. Cuide que no quede líquido ni impresiones digitales sobre las
paredes externas de las cubetas.
Enchufe al aparato, con su descarga a tierra. Accione la llave de encendido.
Aguarde por lo menos 15 minutos hasta que el equipo se ponga en régimen.
quede líquido ni impresiones digitales sobre las paredes externas.
Coloque la cubeta con el blanco en el portacubeta. Cierre el compartimiento correspondiente.
Ajuste la longitud de onda en 390 nm; presione la tecla 0 ABS/100% T. Espere que el equipo
se estabilice.
Retire la cubeta con el blanco y coloque en su lugar la que contiene la solución objeto de la
medición. Lea el resultado de la medición.
Incremente la longitud de onda en 30 nm y reitere el procedimiento de ajuste de cero y medición.
Continúe las mediciones hasta completar el espectrograma.
Establezca la longitud de onda de mayor absorbancia interna para el permanganato de potasio.

2ª. parte. Preparación de las soluciones tipo y construcción de la curva analítica de

calibración. Dentro de un matraz vierta, medidos mediante bureta, 5,0 cm3 de la solución
patrón de permanga-
nato de potasio; complete el volumen con ácido nítrico. Homogeneíce.
Utilizando los matraces restantes repita el procedimiento, pero con porciones de 10,0, 15,0,
20,0 y 25,0 cm3 de solución patrón.
Con la longitud de onda óptima coloque la cubeta con el blanco en el portacubeta. Cierre el
compartimiento correspondiente presione la tecla 0 ABS/100% T y mida la absorbancia de cada
una de las soluciones tipo.

3
 III. Expresión de los resultados.
En función de los datos obtenidos realice los gráficos y cálculos correspondientes.

TRABAJO PRÁCTICO N° 3

ESPECTROMETRÍA DE ABSORCIÓN MOLECULAR EN EL VISIBLE

DETERMINACIÓN DE HIERRO EN HARINAS

I. Objetivo.
Este trabajo práctico tiene por objetivo lograr que el estudiante adquiera habilidad en efectuar de-
terminaciones mediante espectrometría de absorción molecular en el visible.
En su transcurso se determinará el contenido de hierro en una muestra de harina aplicando una
adaptación del método AOAC 944.02.

II. Desarrollo.
1a. parte. Preparación de una solución patrón de hierro.
a. Aparatos. Espátula embudo
vaso de precipitados de 100 cm3 matraz aforado de 1000 cm3
probeta graduada de 50 cm3 frasco de 1 litro
varilla balanza analítica
b. Reactivos. Ácido clorhídrico concentrado
hierro puro, en alambre o gránulos
agua destilada
c. Procedimiento.
Tare el vaso de precipitados.
Pese, con exactitud, la cantidad de hierro necesaria para preparar 1000 cm3 de solución patrón de manera que:
1,00 cm3 de solución patrón 0,100 mg de hierro
Agregue 20 cm de ácido clorhídrico y 30 cm3 de agua. Deje disolver.
3

Transfiera cuantitativamente al matraz. Complete el volumen con agua; homogeneíce.

Enjuague el frasco con la solución patrón, transfiera el resto de la solución y rotule.

2a. parte. Espectrograma de absorción..

a. Aparatos. Probeta graduada de 50 cm3 espectrómetro de absorción molecular
pipeta graduada de 5 cm3 en el visible
matraces aforados de 100 cm3 cubetas
bureta de 25 cm3 soportes y abrazaderas
b. Reactivos. Ácido clorhídrico concentrado
amoníaco concentrado
cloruro de hidroxilamonio al 10 %
, ‘-bipiridina al 0,2 % en ácido clorhídrico 8 + 99
solución patrón de hierro
papel de pH

5
 agua destilada
c. Procedimiento.
. Descripción e instrucciones para la operación del espectrómetro Spectronic 20 Genesys.

1. Tecla para encendido – apagado (en la parte trasera).

2. Dispositivo digital de lectura.
En él se muestran indicaciones diversas y resultados de las mediciones.
Puede leerse en varios idiomas, entre ellos castellano, que se seleccionan mediante la tecla UTILITY.
3. Tapa del compartimiento para cubetas.
4. Teclado.
Contiene:
· dos teclas de función, ubicadas inmediatamente debajo de la pantalla
la de la izquierda permite salir, retroceder o borrar
la de la derecha permite entrar, aceptar o continuar
· dos teclas de selección, ubicadas entre las dos anteriores (flechas hacia arriba y hacia
abajo)
se utilizan para recorrer el menú y para ingresar valores numéricos
· dos controles de longitud de onda (señalados con nm)
permiten seleccionar la longitud de onda (en valores ascendentes o descendentes)
el instrumento opera entre 325 y 1100 nm.
· tecla 0ABS/100% T
 permite ajustar 0 de absorbancia ó 100 % de transmitancia
· tecla A/T/C
permite operar en los modos absorbancia (A), transmitancia (T) o concentración (C)
· tecla UTILITY
permite seleccionar idioma, efectuar ajustes y diagnósticos en el instrumento
· tecla PRINT
envía datos a una impresora
5. Impresora interna (optativa).
6. Acceso al compartimiento de lámpara.
Contiene lámpara de tungsteno – halógeno.
Especificaciones.
Anchura de banda espectral: 8 nm
Exactitud de la longitud de onda: 2 nm
Repetibilidad de la longitud de onda: 0,5 nm
Exactitud fotométrica: 1 %, en unidades de absorbancia
Selector de banda espectral: red de difracción
Detector: semiconductor de estado sólido
Enchufe el instrumento, con su descarga a tierra. Accione la tecla de encendido.
El dispositivo de lectura se ilumina y el equipo realiza automáticamente una serie de operaciones de
control.
Aguarde por lo menos 15 minutos hasta que se ponga en régimen.
Seleccione el modo (absorbancia o transmitancia) en que efectuará las lecturas.
Presione los controles de longitud de onda hasta seleccionar el valor al cual realizará la medición.

. Parte experimental.
Dentro de un matraz vierta, medidos mediante bureta, 4,0 cm3 de solución patrón de hierro.
Agregue 40 cm3 de agua, 10 cm3 de cloruro de hidroxilamonio y 2 cm3 de ,‘ -bipiridina.
Añada, de a pequeñas porciones y agitando, amoníaco hasta aparición de color.
Verifique que el pH sea 4 - 5. Si es mayor regule con ácido clorhídrico; si es menor continúe la
adición de amoníaco.
Complete el volumen con agua; homogeneíce.
En otro matraz prepare un blanco con 1 cm3 de ácido clorhídrico, 10 cm3 de cloruro de hidroxila-
monio y 2 cm3 de ,‘-bipiridina, regulando a pH 4 - 5 con amoníaco y completando el volumen con agua.
Vierta el blanco en una de las cubetas y solución objeto de la medición dentro de la otra; cuide que
no quede líquido ni impresiones digitales sobre las paredes externas.
Coloque la cubeta con el blanco en el portacubeta. Cierre el compartimiento correspondiente.
Ajuste la longitud de onda en 390 nm; presione la tecla 0 ABS/100% T. Espere que el equipo se
estabilice.
Retire la cubeta con el blanco y coloque en su lugar la que contiene la solución objeto de la medición.
Lea el resultado de la medición.
Incremente la longitud de onda en 30 nm y reitere el procedimiento de ajuste de cero y medición.
Continúe las mediciones hasta completar el espectrograma.
En función de los resultados obtenidos establezca la longitud de onda más adecuada para las medi-
ciones a efectuar en la tercera y cuarta partes de este trabajo.

3a. parte. Curva analítica de calibración.

a. Aparatos. Los usados en la segunda parte.
b. Reactivos. Los usados en la segunda parte.
c. Procedimiento.
Dentro de sendos matraces vierta, medidos mediante bureta, porciones de solución patrón de mane-
ra de obtener soluciones tipo que contengan 0,10; 0,20; 0,25; 0,30; 0,35 y 0,40 mg de hierro.
Agregue a cada matraz 40 cm3 de agua, 10 cm3 de cloruro de hidroxilamonio y 2 cm3 de ,‘-
bipiridina.
Continúe como se describió en la segunda parte para regular el pH al intervalo adecuado.
Complete el volumen con agua; homogeneíce.
En base a la operatoria descripta en la segunda parte, mida la absorbancia interna de cada una de las
soluciones tipo a la longitud de onda establecida en función del espectrograma de absorción.
Con los resultados obtenidos trace la curva analítica de calibración.

4a. parte. Determinación de hierro.

a. Aparatos. Espátula mufla regulada de 550°C
cápsula de porcelana de baño de vapor
diámetro no mayor de 6 cm pipeta graduada de 5 cm3
varilla pipeta aforada de 20 cm3
piseta matraz aforado de 100 cm3
mechero espectrómetro de absorción molecular
aro metálico en el visible
triángulo de arcilla cubetas
embudo soportes y abrazaderas
papel de filtro balanza analítica
b. Reactivos. Ácido clorhídrico concentrado
ácido nítrico concentrado
amoníaco concentrado
cloruro de hidroxilamonio al 10 %
, ‘-bipiridina al 0,2 % en ácido clorhídrico 8 + 99
solución patrón de hierro
papel de pH
agua destilada
c. Procedimiento.
Tare la cápsula de porcelana.
Pese, con exactitud, alrededor de 10 g de harina.
Comenzando con fuego muy suave calcine la harina hasta oxidar la mayor parte del carbón.
Humedezca el contenido de la cápsula con 1 cm3 de ácido nítrico.
Con suavidad, continúe el calentamiento hasta sequedad.

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 Transfiera a la mufla. Mantenga hasta desaparición del carbón. Deje enfriar.
Agregue 5 cm3 de ácido clorhídrico; mueva la cápsula de manera de mojar toda la superficie interior.
Lleve a sequedad en baño de vapor.
Añada al residuo 2,0 cm3 de ácido clorhídrico.
Cubra con el vidrio de reloj; caliente en baño de vapor durante 5 minutos.
Filtre; lave con agua. Transfiera cuantitativamente los líquidos al matraz. Deje enfriar.
Agregue 10 cm3 de cloruro de hidroxilamonio y 2 cm3 de ,‘-bipiridina.
Continúe como se describió en la segunda parte para regular el pH al intervalo adecuado.
Complete el volumen con agua; homogeneíce.
En base a la operatoria descripta en la segunda parte, mida la absorbancia interna de la solución así
obtenida a la longitud de onda establecida en función del espectrograma de absorción.
Calcule el contenido de hierro de la muestra.

III. Expresión de los resultados.

En función de los resultados obtenidos complete el siguiente cuadro.

Espectrometría molecular en el visible

Espectrograma de absorción
Instrumento empleado
Longitud de onda (nm) Absorbancia interna

Curva analítica de calibración

Longitud de onda Composición del tipo Absorbancia interna
(nm) (mgFe/100 cm3)
0,00
0,10
0,20
0,25
0,30
0,35
0,40
 Represente en papel milimetrado los puntos experimentales para la gráfica Ai = f(c).
Calcule la ecuación de la curva analítica de calibración indicando los límites de confianza para un
95 % de probabilidad.
En función de la ecuación trace la curva analítica de calibración.
Calcule el coeficiente de correlación.
Calcule el límite de concentración.

Contenido de hierro en la muestra

Masa de la cápsula (g) Masa de Transmitancia Absorbancia Composición Hierro
vacía con muestra muestra (g) interna (%) Interna (mgFe/100cm3) (mg kg-1)

Exprese la composición de hierro en la muestra indicando los límites para un 95 % de probabilidad.

Incluya en su informe el detalle de todos los cálculos efectuados.

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 TRABAJO PRÁCTICO N° 4

ESPECTROMETRÍA DE ABSORCIÓN MOLECULAR UV

DETERMINACIÓN DE CAFEÍNA EN GASEOSAS COLA

I. Objetivo.
Este trabajo práctico tiene por objetivo lograr que el estudiante adquiera habilidad en efectuar de-
terminaciones mediante espectrometría de absorción molecular en el ultravioleta.
En su transcurso se determinará el contenido de cafeína en una muestra de bebida gaseosa.

O CH3
H3C C N
N C H
C N
O N
CH3
Cafeína

II. Desarrollo.
1ª. parte. Preparación de una solución patrón de cafeína
a. Aparatos. Espátula embudo
vaso de precipitados de 100 cm3 matraz aforado de 100 cm3
probeta graduada de 50 cm3 frasco de 250 cm3
varilla balanza analítica
b. Reactivos. Cafeína
cloroformo o éter dietílico
c. Procedimiento.
Tare el vaso de precipitados.
Pese, con exactitud, la cantidad de cafeína necesaria para preparar 100 cm3 de solución patrón de
manera que:
1,00 cm3 de solución patrón 0,200 mg de cafeína
Agregue 20 cm3 de cloroformo o de éter dietílico. Agite suavemente hasta disolver.
Transfiera cuantitativamente al matraz. Complete el volumen con cloroformo o con éter dietílico;
homogeneíce.
Enjuague el frasco con la solución patrón, transfiera el resto de la solución y rotule.

2ª. parte. Espectrograma de absorción.

 a. Aparatos. Matraz aforado de 100 cm3 espectrómetro de absorción molecular
bureta de 10 cm3 en el ultravioleta
cubetas soportes y abrazaderas
b. Reactivos. Solución patrón de cafeína
cloroformo o éter dietílico
c. Procedimiento.
. Descripción e instrucciones para la operación del espectrómetro Shimadzu, modelo
UV – 1203.

1. Pantalla digital (cristal líquido).

En ella se muestran menús de operación, resultados de mediciones, etc.
Las indicaciones se pueden leer en inglés y también en castellano; el equipo cuenta de un selec-
tor de idioma en la parte posterior.
La inclinación y el brillo se pueden ajustar a la necesidad del operador; para esto último el equi-
po dispone de un dial sobre el lateral a mano derecha.

2. Teclado.
Contiene:
· diez teclas numéricas
permiten incorporar valores numéricos
· cuatro teclas de función (F 1 ... F 4)
permiten ejecutar las funciones que se indican en la base de la pantalla
· tecla START
permite iniciar la medición, una vez ingresadas las condiciones
· tecla GOTO 
permite incorporar valores de longitud de onda
el instrumento opera entre 200 y 1100 nm
· tecla CE

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 permite borrar el último valor incorporado
· tecla ENTER
permite ingresar valores numéricos
se pulsa luego de incorporarlos mediante las teclas correspondientes
· tecla AUTOZERO
permite ingresar valor cero de absorbancia
· tecla RETURN
permite volver a la pantalla anterior a la que está a la vista
· teclas de cursor
permiten mover el cursor en la pantalla
la tecla izquierda se utiliza también para fijar signo negativo al valor que se incorpora
3. Ranura para tarjeta.
A través de esta ranura se pueden introducir programas, que se proveen en tarjetas.
4. Compartimiento para el portacubetas.
5. Soporte portacubetas.
Tiene capacidad para seis cubetas.
6. Compartimiento de fuentes de radiación.
Contiene una lámpara de deuterio (ultravioleta) y una de tungsteno - halógeno (visible).
Especificaciones.
Anchura de banda espectral: 5 0,5 nm
Exactitud de la longitud de onda: 1 nm
Repetibilidad de la longitud de onda: 0,3 nm
Exactitud fotométrica: 0,005, en unidades de absorbancia
Repetibilidad fotométrica: 0,002, en unidades de absorbancia
Selector de banda espectral: red de difracción
Detector: semiconductor de silicio
Enchufe el instrumento, con su descarga a tierra. Accione la tecla de encendido, que se halla en la
parte posterior.
La pantalla se ilumina y el equipo realiza automáticamente una serie de operaciones de control.
Aguarde por lo menos 15 minutos hasta que se ponga en régimen.
Presione la tecla 1; aparece la pantalla para medición fotométrica.
Presione la tecla GOTO .

. Parte experimental.
ADVERTENCIA. Dado que las soluciones contienen solvente volátil mantenga tapados todos los
recipientes (matraces, cubetas del espectrómetro) que las contengan, a fin de no alterar la concentración.
Dentro de un matraz vierta, medidos mediante bureta, 10,0 cm3 de solución patrón de cafeína;
complete el volumen con el solvente usado en dicha solución. Homogeneíce.
Vierta solvente en una de las cubetas y la solución objeto de la medición dentro de la otra.
Cuide que no quede líquido ni impresiones digitales sobre las paredes externas.
En el portacubetas coloque en la posición 1 la que contiene el solvente (blanco) y en la posición 2
la que contiene la solución objeto de la medición. Cierre el compartimiento correspondiente.
Mediante las teclas numéricas seleccione la longitud de onda en 250 nm; luego apriete ENTER.
Presione la tecla de función F 1 de modo de leer valores de absorbancia.
El ángulo inferior derecho de la pantalla debe indicar “Celda 1”; de no hacerlo presione la tecla F 2
(control de muestra).
Presione la tecla 3 de manera que para el ítem 3 del menú de la pantalla (corrección reactivo de
referencia – celda 1) se lea SÍ.
Presione la tecla 4 de manera que para el ítem 4 del menú de la pantalla (corrección por cada celda)
se lea SÍ.
Presione la tecla AUTO ZERO. Espere que el instrumento indique 0,000 ABS.
Mediante la tecla F 2 pase a la cubeta ubicada en la posición 2.
Lea en la pantalla la absorbancia interna de la solución.
Presione la tecla F 2 de modo de volver a la cubeta ubicada en la posición 1.
Apriete nuevamente GOTO .
Incremente la longitud de onda en 5 nm; reitere el procedimiento de ajuste de cero y medición.
Continúe las mediciones hasta llegar a los 300 nm.
En función de los resultados obtenidos establezca la longitud de onda más adecuada para las medi-
ciones a efectuar en la tercera y cuarta partes de este trabajo.

3ª. parte. Curva analítica de calibración.

a. Aparatos. Los usados en la segunda parte.
b. Reactivos. Los usados en la segunda parte.
c. Procedimiento.
Dentro de sendos matraces vierta, medidos mediante bureta, porciones de solución patrón de mane-
ra de obtener soluciones tipo que contengan 0,25; 0,50; 1,00; 1,50 y 2,00 mg de cafeína.
Complete el volumen con el solvente usado en dicha solución. Homogeneíce.
Vierta las soluciones tipo en cubetas, tápelas y colóquelas, en orden ascendente de composición, en
las posiciones 2 a 6. Mantenga la que contiene el blanco en la posición 1.
Recuerde mantener tapados los recipientes que contienen las soluciones para no alterar la concen-
tración.
En base a la operatoria descripta en la segunda parte, seleccione la longitud de onda más adecuada
en función del espectrograma de absorción; ajuste el valor cero de absorbancia.
Presione la tecla RETURN y luego START.
El instrumento medirá automáticamente la absorbancia interna de cada una de las soluciones tipo;
los resultados se leerán en la pantalla.
Con los valores obtenidos trace la curva analítica de calibración.

4ª. parte. Determinación de cafeína.

a. Aparatos. Vaso de precipitados de 100 cm3
varilla
pipeta aforada de 5 cm3
pipeta graduada de 1 cm3
probeta graduada de 50 cm3
matraces aforados de 100 cm3
bureta de 10 cm3
espectrómetro de absorción molecular
en el ultravioleta
cubetas

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 ampollas de decantación soportes y abrazaderas
b. Reactivos. Carbonato de sodio al 20 %
solución patrón de cafeína
cloroformo o éter dietílico
agua destilada
c. Procedimiento.
. Extracción de cafeína de la bebida.
Vierta bebida dentro de un vaso de precipitados.
Agite suavemente para dejar salir el gas.
Mida, mediante pipeta aforada, 5 cm3 de muestra; transfiera a una ampolla.
Agregue 10 cm3 de agua, 1 cm3 de carbonato de sodio y 15 cm3 del solvente usado en la solución
patrón.
Tape la ampolla y agite vigorosamente durante dos minutos.
Durante el tiempo de agitación deje salir los gases desprendidos a través del robinete.
Deje en reposo para que se separen las capas. Recuerde que la densidad del cloroformo es mayor
que la del agua y que la del éter es menor.
Destape.
Transfiera la capa orgánica a un matraz.
Efectúe otras cuatro extracciones con el mismo volumen de solvente, transfiriendo la capa orgánica
al matraz.
En sendos matraces prepare otros cinco extractos siguiendo el procedimiento descripto.

. Determinación aplicando el método de los tipos en serie.

Tome uno de los extractos.
Complete el volumen con solvente. Homogeneíce.
En base a la operatoria descripta en la segunda parte, mida la absorbancia interna del extracto obte-
nido a la longitud de onda más adecuada en función del espectrograma de absorción.

. Determinación aplicando el método del agregado conocido.

Tome otro de los extractos.
Agregue, medidos mediante bureta, 1,25 cm3 de solución patrón.
Complete el volumen con solvente. Homogeneíce.
Con los extractos restantes proceda de la misma manera, pero agregando respectivamente 2,5, 5,0,
7,5 y 10,0 cm3 de solución patrón.
En base a la operatoria descripta en la segunda parte, ajuste el valor cero de absorbancia para la
longitud de onda establecida en función del espectrograma de absorción.
Siguiendo el procedimiento descripto en la tercera parte para las soluciones tipo mida la absorban-
cia interna de cada uno de los extractos obtenidos.
Con los valores obtenidos trace la curva correspondiente.

III. Expresión de los resultados.

En función de los resultados obtenidos complete el siguiente cuadro.
 Espectrometría de absorción molecular en el ultravioleta
Espectrograma de absorción
Instrumento empleado.
Longitud de Absorbancia Longitud de Absorbancia Longitud de Absorbancia
onda (nm) interna onda (nm) interna onda (nm) interna
250 270 290
255 275 295
260 280 300
265 285

Represente en papel milimetrado Ai = f ().

Curva analítica de calibración

Longitud de onda Composición del tipo Transmitancia interna Absorbancia interna
(nm) (mg cafeína/100 cm3) (%)
0,00
0,25
0,50
1,00
1,50
2,00
Represente en papel milimetrado los puntos experimentales para la gráfica Ai = f (c).
Calcule la ecuación de la curva analítica de calibración indicando los límites de confianza para un
95 % de probabilidad.
En función de la ecuación trace la curva analítica de calibración.
Calcule el coeficiente de correlación.
Calcule el límite de detección.

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 TRABAJO PRÁCTICO N° 5

ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA

DETERMINACIÓN DE SODIO Y POTASIO EN AGUA MINERAL

I. Objetivo.
Este trabajo práctico tiene por objetivo determinar Sodio y Potasio en agua mineral, mediante es-
pectrofotometría de absorción atómica.
.

II. Desarrollo.

Las muestras se analizan mediante un espectrofotómetro Perkin Elmer, de acuerdo con un procedi-
miento recomendado por la AOAC.

a. Aparatos.
espectrofotómetro Perkin Elmer
lámparas de cátodo hueco para Sodio y Potasio
micropipetas de 0-20 µ L y de 20-1000 µ L
matraces aforados de 50 y 100 mL
b. Reactivos.
standard de Sodio de 900 µg/mL
standard de Potasio de 900 µg/mL
solución de HNO3 2M
acetileno
aire comprimido

c. Procedimiento.

La curva de calibración para cada elemento se construye con patrones cuya concentración varía de
1 hasta 5 µg/mL, para lo cual se efectúan las diluciones pertinentes. Repetir las mediciones hasta lograr un
r2 > 0.999, utilizando el software provisto en el equipo. Se miden 100 mL de cada muestra en matraz afo-
rado y se evaporan en cristalizador hasta llegar al 10% del volumen inicial. Posteriormente se reconstituye
a un volumen de 50 mL y se aspiran. En todos los casos el solvente es solución de HNO3 2M y la relación
de caudal combustible-oxidante es 2:4.

Los resultados se expresan como mg/L.

 TRABAJO PRÁCTICO N° 6

TITULACIONES CONDUCTOMÉTRICAS

DETERMINACIÓN DE OXALATO Y HEXACIANOFERRATO

I. Objetivo.
Este trabajo práctico tiene por objetivo lograr que el estudiante adquiera habilidad en localizar el
punto final de una titulación mediante conductometría.

II. Desarrollo.
a. Aparatos. Espátula pipeta aforada de 25 cm3
vaso de precipitados de 300 cm3 bureta de 25 cm3
(tipo Berzelius) agitador magnético
vaso de precipitados de 100 cm3 conductómetro
varilla celda de conductividad
probeta graduada de 250 cm3 soportes y abrazaderas
embudo balanza analítica
matraz aforado de 250 cm3
b. Reactivos. Solución valorada de amoníaco 0,2 N
solución valorada de nitrato de plata 0,1 N
agua destilada
c. Procedimiento.
Descripción e instrucciones para la operación del conductómetro Altronix modelo CTX-1.
Este instrumento cuenta, en su parte frontal con:
Dispositivo digital de lectura.
En él se muestran los resultados de las mediciones.
Indicaciones de unidad de medida como conductómetro (S, mS) o como termómetro (°C).
La unidad de medida seleccionada aparece iluminada al costado del dispositivo de lectura.
Controles:
· CTE. CELDA (0,1 – 10 cm-1)
mediante el mismo se ajusta la constante de la celda.
· COEF. TEMP. (% °C-1)
La conductancia de una solución depende, además de los solutos presentes y su concen-
tración, de la temperatura; normalmente se toma como referencia 20°C. El coeficiente de
temperatura (t) tiene por objeto compensar las diferencias que surgen de efectuar medi-
ciones de conductancia fuera de este valor. Se define mediante la ecuación:
Gt - Gt
100 2 1
t = G20 C t2 - t1

23
 Este control afecta la pendiente de la función temperatura.
Si bien se puede determinar experimentalmente para cada caso, el valor habitual de este
coeficiente es del orden de 2 % °C-1.
· TEMP. (°C)
tiene por finalidad expresar el valor de conductancia medido bajo las condiciones expe-
rimentales a la temperatura de referencia.
Teclas:
· MAN.
destinada a la compensación manual de la temperatura.
· AUT.
destinada a la compensación automática de la temperatura.
· TEMP.
permite operar el instrumento como termómetro.
· CONT.
simulador que permite verificar el funcionamiento del equipo electrónico.
Selectores de escala de conductividad:
· 20 S cm-1
· 200 S cm-1
· 2000 S cm-1
· 20 mS cm-1
· 2000 mS cm-1
Especificaciones.
Precisión: 1 dígito.
Tensión de excitación de la celda: máximo 750 mV.
Frecuencia de medición: 85 Hz entre 0 y 200 S cm-1.
1700 Hz entre 0 y 200 mS cm-1.
Enchufe el instrumento, con su descarga a tierra. Accione la tecla de encendido, que se halla en la
parte posterior. El dispositivo de lectura se ilumina.
Ajuste el conductómetro de la siguiente manera:
· COEF. TEMP.: 2 % °C-1
· CTE. CELDA: 1 cm-1
· Tecla AUT.

1ª parte. Titulación de ácido oxálico.

Tare el vaso de precipitados pequeño.
Pese, con exactitud, alrededor de 1,0 g de muestra.
Vierta 50 cm3 de agua; agite hasta disolución.
Transfiera cuantitativamente al matraz.
Complete el volumen con agua; homogeneíce.
Mediante pipeta aforada mida 25 cm3 de la solución contenida en el matraz.
Transfiera al otro vaso de precipitados.
Agregue 150 cm3 de agua.
 Ponga en marcha el agitador.
Introduzca la celda en el vaso; el líquido la debe cubrir totalmente y no debe haber burbujas en su
interior.
Presione la tecla que corresponde a la escala más alta. Observe si el valor obtenido contiene sufi-
ciente número de dígitos; de no ser satisfactorio presione las teclas selectoras de escala en orden descen-
dente hasta lograr la mejor respuesta del instrumento.
Mida la conductancia de la solución contenida en el vaso.
Titule con amoníaco, agregando porciones de 0,5 cm3 y midiendo la conductancia después de cada
agregado.
La titulación se da por terminada cuando se han gastado 10,0 cm3 de amoníaco.
Al finalizar el trabajo retire el vaso y enjuague el interior de la celda con agua destilada.

2ª. parte. Titulación de hexacianoferrato(II).

Tare el vaso de precipitados pequeño.
Pese, con exactitud, alrededor de 0,6 g de muestra.
Vierta 50 cm3 de agua; agite hasta disolución.
Transfiera cuantitativamente al matraz.
Complete el volumen con agua; homogeneíce.
Mediante pipeta aforada mida 25 cm3 de la solución contenida en el matraz.
Transfiera al otro vaso de precipitados.
Agregue 150 cm3 de agua.
Ponga en marcha el agitador.
Introduzca la celda en el vaso; el líquido la debe cubrir totalmente y no debe haber burbujas en su
interior.
Presione la tecla que corresponde a la escala más alta. Observe si el valor obtenido contiene sufi-
ciente número de dígitos; de no ser satisfactorio presione las teclas selectoras de escala en orden descen-
dente hasta lograr la mejor respuesta del instrumento.
Mida la conductancia de la solución contenida en el vaso.
Titule con nitrato de plata, agregando porciones de 0,5 cm3 y midiendo la conductancia después de
cada agregado.
La titulación se da por terminada cuando se han gastado 10,0 cm3 de amoníaco.
Al finalizar el trabajo retire el vaso y enjuague el interior de la celda con agua destilada.

III. Expresión de los resultados.

Señale en la gráfica los puntos finales.
Incluya en su informe el detalle de todos los cálculos efectuados.
En función de los resultados obtenidos complete el siguiente cuadro.

25
 Titulaciones conductométricas
Titulación de ácido oxálico
Instrumento empleado.
Constante de la celda.
Ecuaciones de titulación
Primer punto de equivalencia Segundo punto de equivalencia

Masa del vaso de precipitados (g) Masa de muestra (g)

Vacío Con muestra

Volumen de NH3 .... N Conductancia Volumen de NH3 .... N Conductancia

agregado (cm3) (S) agregado (cm3) (S)

Volumen en el punto Contenido de ácido oxáli- Volumen en el punto Contenido de ácido oxáli-
final (1) (cm3) co (g%g) final (2) (cm3) co (g%g)

Señale en la gráfica los puntos finales.

Titulación de hexacianoferrato(II)
Instrumento empleado.
Constante de la celda.
Ecuación de titulación.
Masa del vaso de precipitados (g) Masa de muestra (g)
Vacío Con muestra

Volumen de AgNO3 ....N Conductancia Volumen de AgNO3 ....N Conductancia

agregado (cm3) (S) agregado (cm3) (S)

Volumen en el punto final Contenido de hexacianoferrato(II) de potasio

(cm3) (g%g)
 TRABAJO PRÁCTICO N° 7

DETERMINACIÓN DE FLUORUROS EN AGUA MINERAL

I. Objetivo.
Este trabajo práctico tiene por objetivo lograr que el estudiante adquiera habilidad en determinacio-
nes con electrodos selectivos de iones.
Para este fin se realizará una determinación de fluoruro en una muestra de agua mineral.

II. Desarrollo.
a. Aparatos. Espátula pipeta aforada de 5 cm3
vidrio de reloj pipeta aforada de 50 cm3
varilla bureta de 50 cm3
vasos de precipitados de 100 cm3 potenciómetro
vasos de precipitados de 250 cm3 electrodo sensible de fluoruro, combinado
probeta graduada de 250 cm3 frascos de plástico, de 1 litro
matraces aforados de 100 cm3 soportes y abrazaderas
matraces aforados de 1000 cm3 balanza analítica
b. Reactivos. Ácido etanoico (acético) glacial
ácido ciclohexilamino dinitrilo tetraacético
fluoruro de sodio previamente secado en estufa a 110°C durante 2 horas
cloruro de sodio
hidróxido de sodio al 24 %
papel de pH
agua destilada
Preparaciones especiales.
Solución patrón de fluoruro.
En un vaso de precipitados pese con exactitud la cantidad de fluoruro de sodio necesaria para la
preparación de 1000 cm3 de solución patrón de fluoruro de manera que
1,00 cm3 0,100 mg de fluoruro
Agregue 100 cm3 de agua. Agite suavemente hasta disolución.
Transfiera cuantitativamente a un matraz de 1000 cm3.
Diluya con agua hasta la marca. Homogeneíce.
Enjuague uno de los frascos con la solución. Transfiera el resto y rotule.
Solución reguladora de ajuste total de fuerza iónica (TISAB).
Dentro de un vaso de precipitados coloque 58 g de cloruro de sodio, 57 cm3 de ácido etanoico y 4 g
de ácido ciclohexilamino dinitrilo tetraacético.
Agregue unos 400 cm3 de agua. Agite suavemente hasta disolución.
Ajuste a pH 5,0 – 5,5 mediante adición de hidróxido de sodio y ligera agitación.
Transfiera a un matraz de 1000 cm3. Diluya con agua hasta la marca; homogeneíce.

27
 Reserve la solución dentro de un frasco, debidamente rotulado.

c. Procedimiento.
Descripción e instrucciones para la operación del potenciómetro Altronix modelo TPX-1.

Este instrumento cuenta, en su parte frontal con:

Dispositivo digital de lectura.
En él se muestran los resultados de las mediciones.
Indicaciones de unidad de medida como potenciómetro (pH, mV) o como termómetro (°C).
La unidad de medida seleccionada aparece iluminada al costado del dispositivo de lectura.
Controles:
· TEMP. (°C).
El pH de una solución depende, además de los solutos presentes y su concentración, de la
temperatura; se toma como referencia 25°C.
La compensación de temperatura se logra adecuando la pendiente de la curva E = f(pH)
bajo la cual opera el instrumento.
Se puede efectuar en forma manual haciendo coincidir el control en el valor de tempera-
tura de la solución o en forma automática colocando en control en la posición ATC y
sumergiendo el sensor correspondiente por lo menos dos centímetros dentro de la solución.
· CAL.
tiene por finalidad desplazar verticalmente la curva E = f(pH) bajo la cual opera el ins-
trumento.
· SLOPE.
tiene por finalidad compensar la falta de linealidad de los electrodos, que se acentúa con
el transcurso del tiempo.
Teclas selectoras de función:
· pH.
permite operar el instrumento de manera que las indicaciones del instrumento de lectura
estén expresadas en unidades de pH.
· mV.
permite operar el instrumento de manera que las indicaciones del instrumento de lectura
 estén expresadas en unidades de fuerza electromotriz (mV).
· °C.
permite operar el instrumento de manera que las indicaciones del instrumento de lectura
estén expresadas en unidades de temperatura (°C).
· MEAS.
pone en funcionamiento el dispositivo de medición.
Cuando se presiona la tecla para que el instrumento efectúe la medición se enciende un
led rojo ubicado encima de esta tecla.
Especificaciones.
Intervalo de medición: 0,00 a 14,00 en unidades de pH.
0,00 a 1999 en unidades de fem (mV).
Deriva: 1 mV en 24 h.
Enchufe el instrumento, con su descarga a tierra. Accione la tecla de encendido, que se halla en la
parte posterior.
Coloque el control TEMP en la posición ATC.

1ª. parte. Curva analítica de calibración.

Dentro de un matraz de 100 cm3 vierta, medidos con pipeta aforada, 5,0 cm3 de solución patrón de
fluoruro.
Complete el volumen con agua. Homogeneíce.
Enrase la bureta con esta solución.
Dentro de un matraz de 100 cm3 vierta 5,0 cm3 de la solución contenida en la bureta.
Agregue 50 cm3 de TISAB. Complete el volumen con agua; homogeneíce.
Repita esta última parte del procedimiento con porciones de 10,0, 25,0 y 50,0 cm3 de la solución
contenida en la bureta.
Transfiera porciones de cada una de las soluciones tipo a vasos de precipitados.
Introduzca el electrodo combinado dentro del vaso que contiene la solución de menor concentración.
Presione la tecla selectora de función mV.
Deje transcurrir unos minutos hasta que se estabilice.
Presione la tecla MEAS; observará que se enciende el led correspondiente.
Registre el valor de fuerza electromotriz obtenido.
Vuelva a presionar la tecla MEAS; observará que el led se apaga.
Enjuague el electrodo con agua destilada y seque con papel absorbente.
Introduzca el electrodo combinado dentro del vaso que contiene la solución que le sigue, en orden
creciente de concentración.
Reitere el procedimiento de medición de fuerza electromotriz.
Continúe con el resto de las soluciones tipo.
El instrumento debe estar activo (led encendido sobre la tecla MEAS) solamente cuando el electro-
do combinado está en contacto con la solución objeto de la medición. No olvide enjuagar y secar cada vez
que pasa el electrodo de una solución a la siguiente.
2ª. parte. Determinación mediante la curva analítica de calibración
Dentro de un matraz de 100 cm3 vierta, medidos con pipeta aforada, 50 cm3 de muestra.
Complete el volumen con TISAB. Homogeneíce.

29
 Mida, con pipeta aforada, 50 cm3 de la solución contenida en el matraz.
Transfiera a un vaso de precipitados.
Siguiendo el procedimiento descripto en la primera parte mida la fuerza electromotriz de la solu-
ción de la muestra.
3ª. parte. Determinación mediante el método del agregado conocido.
Al contenido del vaso de precipitados agregue 5,0 cm3 de la solución contenida en la bureta.
Agite suavemente para homogeneizar.
Vuelva a medir la fuerza electromotriz.

III. Expresión de los resultados.

En función de los resultados obtenidos complete el siguiente cuadro.

Determinación potenciométrica de fluoruro

Composición del tipo fem
(mg F- en 100 cm3) (V)
0,000
0,025
0,050
0,125
0,250
Volumen de muestra tomado (cm3) sin agregado con agregado

Contenido de fluoruro en la muestra (mg dm-3)

Calcule la ecuación de la curva analítica de calibración.
Calcule el coeficiente de correlación.
Incluya en su informe el detalle de todos los cálculos de resultado final efectuados.
 TRABAJO PRÁCTICO N° 9

TITULACIONES POTENCIOMÉTRICAS

DETERMINACIÓN DE ACIDEZ EN VINO, CLORUROS EN SAL DE MESA Y GLUCOSA EN JARABE

I. Objetivo.
Este trabajo práctico tiene por objetivo lograr que el estudiante adquiera habilidad en localizar el
punto final de una titulación mediante potenciometría.

II. Desarrollo.
1ª. parte. Determinación de acidez en vino.
a. Aparatos. Pipeta aforada de 10 cm3 bureta de 25 cm3
vasos de precipitados de 100 cm3 agitador magnético
probeta graduada de 100 cm3 potenciómetro
papel de filtro electrodo de vidrio combinado
piseta soportes y abrazaderas
b. Reactivos. Solución de referencia de pH 4
solución de referencia de pH 7
solución valorada de hidróxido de sodio 0,05 N
agua destilada
c. Procedimiento.
Enchufe el instrumento, con su descarga a tierra. Accione la tecla de encendido, que se halla en la
parte posterior.
Coloque el control TEMP en la posición ATC.
Presione la tecla selectora de función pH.
Deje transcurrir unos minutos hasta que se estabilice.
Proceda a la calibración del equipo para la determinación de pH según se describió en la segunda
parte del trabajo práctico anterior
Mediante pipeta aforada mida 10 cm3 de muestra.
Transfiera a un vaso de precipitados. Agregue 30 cm3 de agua.
Ponga en marcha el agitador.
Introduzca el electrodo combinado dentro del vaso; el líquido debe cubrir totalmente la parte inferior.
Siguiendo la operatoria ya descripta determine el pH de la solución contenida en el vaso.
Titule con hidróxido de sodio, agregando porciones de 0,5 cm3 y determinando el pH después de
cada agregado.
La titulación se da por terminada cuando el pH sobrepasa el valor 10.
Repita el procedimiento, con otros 10 cm3 de muestra, pero agregando porciones mayores de titu-
lante (por ejemplo 1 a 2 cm3) en las zonas alejadas del punto final y menores (por ejemplo 0,1 cm3) en las
zonas de mayor incremento de pH.
Recuerde que el instrumento debe estar activo (led encendido sobre la tecla MEAS) solamente

31
cuando el electrodo combinado está en contacto con la solución objeto de la medición y enjuagar y secar
el electrodo cuando termina el trabajo.

2ª. parte. Titulación de una mezcla de cloruro y bromuro.

a. Aparatos.Vaso de precipitados de 100 cm3 potenciómetro
probeta graduada de 50 cm3 electrodo de plata combinado
pipeta aforada de 10 cm3 soportes y abrazaderas bureta
de 25 cm3 balanza analítica
agitador magnético
b. Reactivos. Ácido nítrico concentrado
nitrato de calcio o nitrato de bario
solución valorada de nitrato de plata 0,1 N
agua destilada
c. Procedimiento.
Enchufe el instrumento, con su descarga a tierra. Accione la tecla de encendido, que se halla en la
parte posterior.
Coloque el control TEMP en la posición ATC.
Presione la tecla selectora de función mV.
Deje transcurrir unos minutos hasta que se estabilice.
Mida, mediante pipeta aforada, 10 cm3 de solución muestra.
Vierta dentro del vaso; agregue 40 cm3 de agua, unas gotas de ácido nítrico y 0,2 g de nitrato de
calcio o nitrato de bario.
Ponga en marcha el agitador.
Introduzca el electrodo combinado dentro del vaso; el líquido debe cubrir totalmente la parte inferior.
Siguiendo la operatoria ya descripta determine la fuerza electromotriz de la solución contenida en
el vaso.
Titule con nitrato de plata, agregando porciones de 0,5 cm3 y midiendo la fuerza electromotriz des-
pués de cada agregado.
La titulación se da por terminada cuando se han gastado entre 22 y 25 cm3 de solución.
Repita el procedimiento, con otros 10 cm3 de muestra, pero agregando porciones mayores de titu-
lante (por ejemplo 1 a 2 cm3) en las zonas alejadas del punto final y menores (por ejemplo 0,1 cm3) en las
zonas de mayor incremento de fuerza electromotriz.
Recuerde que el instrumento debe estar activo (led encendido sobre la tecla MEAS) solamente
cuando el electrodo combinado está en contacto con la solución objeto de la medición y enjuagar y secar el
electrodo cuando termina el trabajo.

3ª. parte. Determinación de hidratos de carbono en jarabe.

a. Aparatos.Vaso de precipitados de 250 cm3
pipeta graduada de 5 cm3
espátula
vidrio de reloj
probeta graduada de 100 cm3
bureta de 25 cm3
agitador magnético
potenciómetro
electrodo de platino
electrodo de calomel
soportes y abrazaderas
balanza analítica
 b. Reactivos. Ácido sulfúrico concentrado
dicromato de potasio
solución valorada de sulfato ferroso amónico 0,5 N
agua destilada
c. Procedimiento.
Tare el vaso de precipitados.
Agregue unos 3 cm3 de muestra.
Pese el vaso con su contenido.
Agregue 75 cm3 de agua.
Ponga en marcha el agitador.
Agregue, pesados con exactitud, aproximadamente 0,7 g de dicromato de potasio.
A continuación añada 10 cm3 de ácido sulfúrico.
Continúe la agitación hasta disolución. Luego deje en reposo unos 15 minutos.
Enfríe, de ser necesario.
Enchufe el instrumento, con su descarga a tierra. Accione la tecla de encendido, que se halla en la
parte posterior.
Coloque el control TEMP en la posición ATC.
Presione la tecla selectora de función mV.
Introduzca los electrodos.
Vuelva a poner en marcha el agitador.
Siguiendo la operatoria ya descripta determine la fuerza electromotriz de la solución contenida en
el vaso.
Titule con sulfato ferroso amónico, agregando porciones de 0,5 cm3 y midiendo la fuerza electro-
motriz después de cada agregado.
La titulación se da por terminada cuando se han gastado entre 22 y 25 cm3 de solución.
Repita todo el procedimiento, con una nueva porción de muestra, pero agregando porciones mayo-
res de titulante (por ejemplo 1 a 2 cm3) en las zonas alejadas del punto final y menores (por ejemplo 0,1
cm3) en la zona de mayor incremento de fuerza electromotriz.
Recuerde que el instrumento debe estar activo (led encendido sobre la tecla MEAS) solamente
cuando los electrodos están en contacto con la solución objeto de la medición y enjuagar y secar los elec-
trodos cuando termina el trabajo.

III. Expresión de los resultados.

En función de los resultados obtenidos complete el siguiente cuadro.

33
 Titulaciones potenciométricas
Titulación de acidez en vino
Instrumento empleado.
Ecuación de titulación.
Volumen de NaOH pH pH V pH
....N agregado (cm3) V
(cm3)

Volumen en el punto final Acidez total en la muestra de vino

(cm3) (g de ác tartárico dm-3)
 Titulación de cloruro y bromuro
Instrumento empleado.
Ecuaciones de titulación correspondientes
al primer punto final al segundo punto final

Volumen de fem fem V fem

AgNO3 ....N (V) (V) (cm3) V
agregado (cm3)

Volumen en el punto final (cm3) Contenido (g en 100 cm3)

primer punto segundo punto bromuro (como KBr) cloruro (como NaCl)

Determinación de carbohidrados en jarabe

Instrumento empleado.
Ecuación de titulación.
Volumen de fem fem V fem
FeSO4.(NH4)2SO4 V
.... N agregado (V) (V) (cm3)
(cm3)

Volumen en el punto final Contenido de hidratos de carbono, como sacarosa

(cm3) (g % g)

Incluya en su informe el detalle de todos los cálculos de resultado final efectuados.

35
 TRABAJO PRÁCTICO N° 10

DETERMINACIÓN DE HUMEDAD EN ACEITES

I. Objetivo.
Este trabajo práctico tiene por objetivo lograr que el estudiante adquiera habilidad en determinacio-
nes de humedad.
Para este fin se realizará una determinación por destilación y una por titulación mediante genera-
ción culombimétrica del reactivo con determinación biamperométrica del punto final.

II. Desarrollo.
1a. parte. Determinación en miel, por destilación.
a. Aparatos. Papel impermeable mechero o manta calefactora
plegado en forma de bandeja tela metálica
probeta graduada de 250 cm3 aro metálico
balón de 250 cm3 soportes y abrazaderas
trampa de Dean – Stark de 10 cm3 balanza analítica
refrigerante de Liebig
b. Reactivos. Tolueno saturado con agua destilada
c. Procedimiento.
Tare la bandeja impermeable.
Pese, con exactitud, alrededor de 12 g de muestra.
Introduzca la bandeja con la muestra dentro del balón.
Vierta 150 cm3 de tolueno.
Monte el equipo de destilación.
Lleve a ebullición suave, incrementando luego la intensidad.
Prosiga la destilación hasta que deje de observar caída de gotas de agua del refrigerante o entur-
biamiento del tolueno recogido en la trampa.
Deje en reposo hasta completa separación de las capas.
Mida el volumen de agua recogida en la parte graduada de la trampa.

2ª. parte. Determinación en aceite comestible, por titulación.

a. Aparatos. Jeringa de 10 cm3 balanza analítica
equipo de titulación
b. Reactivos. Hydranal Coulomat AG – H (anolito)
Hydranal Coulomat CG (catolito)
c. Procedimiento.
. Descripción e instrucciones para la operación del titulador culombimétrico KEM
modelo MKC – 500.
Este instrumento cuenta, en su parte frontal con:
Dispositivo digital de lectura.
En él se muestran indicaciones de procedimiento y resultados de las titulaciones.
Los textos aparecen en inglés.
Teclado.
Contiene:
· diez teclas numéricas
permiten incorporar valores numéricos
· tecla de ingreso ()
permite ingresar al sistema parámetros o valores numéricos
· tecla TITRATION
permiten incorporar el parámetro de titulación.
· tecla RESULT.
permite incorporar los parámetros para el resultado final.
· tecla SAMPLE
permite incorporar datos para identificar la muestra
· tecla FUNCTION
permite incorporar el parámetro de función
· tecla SETUP
permite incorporar parámetros de identificación del análisis (p ej. fecha, hora, n° de serie)
· tecla ESC

37
 permite al dispositivo de lectura volver al texto anterior
· tecla BS
permite volver atrás un espacio cuando se incorporan parámetros
· tecla CLR
permite borrar la última incorporación efectuada
· teclas de cursor
permiten desplazar el cursor sobre el dispositivo de lectura
· tecla PRINT
permite poner en funcionamiento una impresora.
· tecla STIRRER
permite poner en funcionamiento el agitador magnético
se puede ajustar la velocidad mediante las teclas numéricas
· tecla PRE-TITR
permite titular la humedad de los reactivos
· tecla START
permite iniciar la titulación de la muestra
· tecla RESET
permite efectuar una nueva titulación.
Celda de titulación
Contiene
· electrodo de trabajo
· electrodo auxiliar
· electrodos indicadores
· sello para inyección de muestra
· tubo con material desecante
Especificaciones.
Precisión: < 0,3 %.
Intervalo de operación: 10 g a 100 mg de agua por muestra.
Límite de detección: 0,1 g de agua.
Dentro del compartimiento más pequeño del instrumento vierta 5 cm3 de catolito.
Dentro del compartimiento más grande vierta 50 cm3 de anolito.
Enchufe el instrumento, con su descarga a tierra. Accione la tecla de encendido, que se halla en la
parte posterior. El dispositivo de lectura se ilumina.

. Parte experimental.
Presione la tecla PRE-TITR.
Acto seguido el instrumento efectúa la titulación de la humedad contenida en los reactivos.
Cuando ella esté por terminar (puede llevar varios minutos) aparecerán en la pantalla las leyendas
“Pre – Titr” y “Ready” y, al finalizar, “Stable”.
Tare la jeringa.
Tome 5 cm3 de muestra.
Pese la jeringa con la muestra.
Presione la tecla START.
 Lea las instrucciones en el dispositivo.
Transfiera la muestra al compartimiento del anolito, a través del sello de goma.
Presione nuevamente la tecla START, con lo que se inicia la generación de reactivo titulante.
Cuando la titulación está por completarse se observa que la generación de reactivo se hace más
lenta.
Al terminar la titulación se escucha un “beep”.
Lea el resultado (g de agua) en el dispositivo.
Para efectuar otra determinación presione la tecla RESET.

III. Expresión de los resultados.

En función de los resultados obtenidos complete el siguiente cuadro.

Determinación de humedad
Por destilación
Masa de muestra (g) Volumen de agua (cm3) Humedad (g%g)

Por titulación
Instrumento empleado.
Ecuación de titulación.
Masa de la jeringa (g) Masa de muestra (g) Masa de agua (g) Humedad (ppm)
vacía con muestra

Incluya en su informe el detalle de todos los cálculos de resultado final efectuados.

 TRABAJO PRÁCTICO N° 11

CROMATOGRAFÍA EN SUPERFICIE

I. Objetivo.
Este trabajo práctico tiene por objetivo lograr que el estudiante adquiera habilidad en el desarrollo
de cromatogramas en superficie y evaluar la eficiencia del lecho.
Para este fin se realizará una separación por partición y una por adsorción.

II. Desarrollo.
1a. parte. Separación de especies catiónicas mediante cromatografía sobre papel.
En esta parte del trabajo práctico se procederá a separar iones cobalto (II), cobre (II), hierro (III) y ní-
quel (II) y revelar con ditiooxamida en medio amoniacal.
En estas condiciones los iones cobalto forman con el reactivo un precipitado pardo amarillento, los
iones cobre verde oscuro y los iones níquel azul violeta, mientras que los iones hierro se ponen en eviden-
cia por el precipitado pardo a que dan lugar en presencia de amoníaco.
a. Aparatos.Vidrio de reloj hilo blanco
vaso de precipitados de 500 cm3 secador de cabello
probeta graduada de 100 cm3 lápiz
caja de Petri regla
micropipetas rociador
papel para cromatografía n° 1 hoja de afeitar
papel de filtro circular W 1 tijeras
aguja
b. Reactivos. Ácido clorhídrico concentrado
amoníaco concentrado
cloruro de cobalto(II) al 2,4 % en ácido clorhídrico 1 + 5
cloruro de cobre(II) al 1,7 %en ácido clorhídrico 1 + 5
cloruro de hierro(III) al 2,7 % en ácido clorhídrico 1 + 5
cloruro de níquel(II) al 2,4 % en ácido clorhídrico 1 + 5
ditiooxamida al 1 %en etanol
propanona (acetona)
agua destilada
Preparación especial.
Solvente. Mezcle 87 cm3 de propanona con 8 cm3 de ácido clorhídrico y 5 cm3 de agua.
c. Procedimiento.
. Cromatografía ascendente.
Dentro del vaso vierta el volumen de solvente necesario para alcanzar una altura de 2 cm.
Cubra con el vidrio de reloj.
Deje que el espacio libre dentro del vaso se sature con los vapores del solvente.

43
 Corte trozos de papel para cromatografía de 10 x 15 cm.
A 3 cm del borde de mayor longitud trace con el lápiz una recta paralela a éste; marque sobre ésta
un punto cada 3 cm.
Coincidentes con dichos puntos siembre, por separado y con la ayuda de micropipetas, una gota de
cada una de las soluciones muestra por cada punto.
Seque mediante el secador de cabello.
Indique en cada caso de qué catión se trata para tomar como referencia.
Una los bordes de menor longitud haciendo una ligera costura en cada ángulo, de manera de formar
un cilindro.
Introduzca el cilindro de papel dentro del vaso de modo que la zona sembrada esté en la parte infe-
rior, sin que toque el líquido. Cubra con el vidrio de reloj.
El solvente ascenderá por capilaridad. Cuando observe que llega a unos 2 cm del borde superior del
papel, retírelo. Seque.
Corte las costuras. Rocíe el revelador; vuelva a secar.
Por último someta el papel a la acción de vapores de amoníaco.
Observará manchas, a diferentes distancias de la línea de siembra, que corresponden a cada uno de
los cationes ensayados, de acuerdo a la descripción de colores indicada más arriba.
Mida las distancias entre la línea de siembra y el frente de solvente y entre la línea de siembra y el
centro de cada mancha. Calcule para cada catión el valor del factor de retardo.
Tome otro trozo de papel, de las mismas dimensiones, pero proceda sembrando en los puntos ex-
tremos dos de las soluciones muestra, en el tercer punto, tres de ellas y en el restante las cuatro, cuidando
de secar después de la caída de cada gota.
Continúe según se describió más arriba; evalúe la eficiencia de la separación.

. Cromatografía circular.
Dentro de una caja de Petri vierta solvente de manera de llenar hasta aproximadamente la mitad de
la altura. Cubra con la tapa, en forma invertida.
Deje que el espacio libre se sature de los vapores.
Tome un disco de papel de filtro; con la ayuda de una hoja de afeitar efectúe en el centro un corte
en V.
Doble el corte hacia abajo en ángulo recto de manera que forme una mecha.
Sobre la base de la mecha siembre gotas de dos de las soluciones muestra, secando después de cada
agregado.
Coloque el disco en forma horizontal sobre la caja de Petri; deje que la mecha entre en contacto con
el solvente. Cubra con la tapa, en forma invertida.
Cuando el frente de solvente haya avanzado lo suficiente retire el papel, séquelo; proceda al revela-
do como se describió.
Repita el procedimiento sembrando gotas de las cuatro soluciones.

2a. parte. Separación de colorantes orgánicos mediante cromatografía sobre placa.

En esta parte del trabajo se procederá a separar eritrosina y tartrazina; el colorante más polar (tar-
trazina) queda más retenido.
a. Aparatos.Cuba cromatográfica regla
micropipetas rociador
 b. Reactivos. Amoníaco concentrado
eritrosina (0,352 g dm-3) en agua - propanona (1 + 9)
tartrazina (1,200 g dm-3) en agua - propanona (1 + 9)
placa cromatográfica de sílicagel G60
1-butanol
etanol
agua destilada
Preparación especial.
Solvente. Mezcle 37 cm3 de 1-butanol, 37 cm3 de etanol, 9 cm3 de agua y 16 cm3 de amoníaco.

c. Procedimiento.
Dentro de la cuba cromatográfica vierta el volumen de solvente necesario para alcanzar una altura
de 1 cm. Cubra.
Deje que el espacio libre dentro de ella se sature con los vapores del solvente.
A 2 cm de uno de los bordes de la placa, y con la ayuda de una micropipeta, siembre una gota de
una de las soluciones en estudio, a unos 2 a 3 cm haga lo mismo con otra de ellas y, por último siembre las
dos soluciones en el mismo punto. Deje secar al aire.
Introduzca la placa dentro de la cuba de modo que la zona sembrada esté en la parte inferior, sin
tocar el líquido. Apoye la placa para que su posición sea casi vertical. Cubra la cuba.
El solvente ascenderá por capilaridad. Cuando observe que llega a unos 2 cm del borde superior de
la placa retírela; deje secar al aire.
Observará manchas a diferentes distancias de la línea de siembra, que corresponden a cada uno de
los solutos ensayados.
Mida las distancias entre la línea de siembra y el frente de solvente, entre la línea de siembra y el
centro de cada mancha, así como la base de cada mancha.
Calcule para cada sustancia los valores de: factor de retardo, factor de capacidad, número de platos
y altura de plato.
Calcule para la separación efectuada: factor de selectividad y resolución.

III. Evaluación de los resultados.

En función de los resultados obtenidos complete el siguiente cuadro.
Cromatografía plana
Partición (ascendente)
Soluto Mancha Frente de Rf Conclusiones
Color Distancia (cm) solvente (cm)
Co2+
Cu2+
Fe3+
Ni2+
mezcla

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 Adsorción
Soluto Mancha Frente de Rf k’ N A  R
Color Distancia (cm) solvente (cm)
eritrosina
tartrazina

Incluya en su informe el detalle de todos los cálculos efectuados.

 TRABAJO PRÁCTICO N° 12

CROMATOGRAFÍA GASEOSA

INTRODUCCIÓN
La Cromatografía Gaseosa es una de las expresiones instrumentales de la Cromatografía analítica
(Método) y es una herramienta indispensable para el conocimiento y valoración de principios activos como
de la mayoría de las sustancias orgánicas.
Tiene como reserva, que la sustancia a analizar debe ser soluble en un solvente orgánico y volátil a la tem-
peratura de trabajo del Cromatógrafo Gaseoso (GC), sin esto la sustancia problema no puede ser cromato-
grafiada.
Un GC consta de dos canales, cada canal está compuesto por un Inyector, una Columna Cromato-
gráfica y un Detector.
Para detectar sustancias en concentraciones porcentuales se utiliza, en general, un detector llamado FID
(Detector de Ionización de Llama)

Una de las técnicas universalmente utilizadas en química legal y forense es la técnica de Head Spa-
ce (Espacio de cabeza) que propone en una forma sencilla, inyectar gases en un Cromatógrafo de gases.
La ventaja de esta técnica es que no se necesita extraer el analito en estudio de una matriz, es limpia, rápi-
da y de muy bajo costo.
Las desventajas radican en que el gas a inyectar debe estar siempre a la misma temperatura, no se pueden
hacer varias inyecciones del mismo vial, dado que cada vez que tomamos muestra con la jeringa, bajamos
la concentración instantánea del gas en ese espacio de cabeza; lo que hace que tengamos que preparar por
lo menos tres viales de muestra y tres viales de la misma concentración de cada patrón a inyectar. Como la
inyección es imprecisa, siempre se debe usar un estándar interno.
La presión atmosférica también tiene efecto, pero como en nuestra residencia local (Capital Federal) la
misma no es muy variable para los rangos de trabajo, contribuye con un error menor que la medición del
volumen, por lo que se transforma en una variable despreciable.

DETERMINACIÓN DE ETANOL EN SALIVA

I. Objetivo.
Analizar la presunta presencia de Etanol (Alcohol Etílico) presente en una muestra de saliva.

II. Desarrollo.

Se basa o fundamenta en la elución y separación de Etanol de un Estándar Interno (Cl3CH) por me-
dio del método de Cromatografía gaseosa, utilizando la técnica de Head Space. Esta última se puede reali-
zar gracias a que la presión de vapor del etanol a la presión atmosférica normal es lo suficientemente alto
como para tener una concentración elevada en un volumen relativamente pequeño de fase vapor, dentro de
un recipiente de 10 mL

47
 Se utiliza en todo tipo de fluidos biológicos.

a. Drogas y Reactivos
Etanol Absoluto p.a. de título conocido
Cloroformo (Cl3CH) p.a.
Sulfato de sodio Na2SO4 p.a.
Solución de Sulfato de sodio 10 % m/v
H2O

b. Materiales
12 viales de 10 mL, con tapa de goma y sello circulares de aluminio tipo bozal radial
Pinza para cerrar sellos de aluminio tipo bozal radial.
Pipetas de 1 y 2 mL graduadas al 0.01 mL
Jeringa tipo insulina con aguja
Papel absorbente
Matraz de 100.00 y 50.00 mL con tapa de polipropileno

c. Instrumentos

Baño de maría
Cromatógrafo Gaseoso compuesto por:
Inyector: Split / Splitless
Detector: FID
Columna Cromatográfica: Capilar HP-INNOWAX (Crosslinked Polyethylene Glycol) Long: 60 m
Diámetro Interno: 0.32 mm Fase estacionaria: 0.25 µm
Temperatura Inyector: 220 ºC
Temperatura Horno de columna: 70 ºC (Isotérmica)
Temperatura Detector: 300 ºC
Gas portador: N2 99.999 % de pureza
Flujo: 2.0 mL / min.
Relación de Split: 1/25
Volumen de inyección: 500 µ L (0.5 mL)
Tiempo de corrida: 5.5 minutos
Gas Combustible: Hidrógeno 99.99 % de pureza o superior
Gas comburente: Aire comprimido de alta pureza cromatográfica
Solución Madre de Etanol (Patrón analítico)
Tome 1.00 mL de Etanol y lleve a 100.00 mL con H2O. Tome 1.00 mL e esta solución y lleve a
10.0 mL con H2O.

Solución Estándar Interno

Tome 0.1 mL de Cl3CH y lleve a 50.00 mL con H2O. Tome 5.00 mL de esta solución y lleve a 50.0
mL con H2O.

Preparación de Patrón Analítico de Uso

En 9 viales de 10 mL coloque 1 mL de Solución de Sulfato de sodio 10 %. Agregue 0.1 mL de So-
lución Estándar Interno a cada uno, y tape rápidamente con la tapa de goma cuando termina cada agregado
en los sendos viales, para no perder vapor de Cl3CH.
Patrón 1 Rotule tres viales como 0.1A, 0.1B y 0.1C agregue 1 mL de H2O y 0.1 mL de Solución
Madre de Etanol a cada uno y tape rápidamente con la tapa de goma cuando termina cada agregado en los
sendos viales.
Patrón 2 Rotule otros tres viales como 0.5A, 0.5B y 0.5C y agregue 0.6 mL de H2O y 0.5 mL de
Solución Madre de Etanol a cada uno, teniendo el mismo cuidado, destreza, y utilizando las mismas pipe-
tas que en el anterior.
Patrón 3 Rotule los últimos tres viales como 1.0A, 1.0B y 1.0C y agregue 0.1 mL de H2O y 1.0 mL
de Solución Madre de Etanol, conservando las mismas características de desempeño.

Selle los 9 viales con el bozal de aluminio con ayuda de la pinza para bozales.

Mezcle perfectamente con agitación vigorosa y lleve por 3 minutos a los 9 viales a un baño de maría a
30 ºC. El tiempo de Retención del Etanol es de alrededor de 4.2 minutos y el de Cl3CH de 5.0 minu-
tos. Datos aproximados.
Realice una curva de calibración con los 3 puntos de concentración señalados (0.1 – 0.5 – 1.0), uti-
lizando las series de 3 viales para cada uno de los niveles de concentración (Triplicado) Note que este tipo
de triplicado no es el mismo que en soluciones líquidas.

Solución Problema
En otros 3 viales de 10 mL coloque 1 mL de Solución de Sulfato de sodio 10 %. Agregue 0.1 mL
de Solución Estándar Interno y 0.1 mL de H2O, a cada uno, y tape rápidamente con la tapa de goma cuan-
do termina cada agregado en los sendos viales, para no perder vapor de Cl3CH.
Rotule estos tres viales como MA, MB y MC y desde pipeta de 2 mL agregue 1.0 mL de Saliva He-
parinizada o citrada y tape rápidamente con la tapa de goma cuando termina cada agregado en los sendos
viales.
Selle los 3 viales con el bozal de aluminio con ayuda de la pinza para bozales.

Mezcle perfectamente con agitación vigorosa y lleve por 3 minutos a los 3 viales a un baño de maría a
30 ºC. Inyecte la solución muestra como el patrón analítico, utilizando cada vial para 1 inyección. Estos
valores también serán promediados como triplicados

c. Procedimiento.

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 Inyecte 500 µ L del espacio de cabeza, solo vapor, nada de líquido, de cada uno de los patrones
de uso y construya una curva de calibración, en donde el Patrón 2 representa 0.5 mL de etanol/ L saliva.
Inyecte luego la solución muestra de la misma manera, NO INYECTAR LÍQUIDO, SOLO EL VAPOR
DEL ESPACIO DE CABEZA.

Curva de calibración
Realice una curva de calibración utilizando los triplicados de las soluciones Patrón 1, 2 y 3
Grafique la curva y determine los valores de la ecuación de la recta y = a + b x por medio de la técnica de cua-
drados mínimos. Establezca el valor del Coeficiente de correlación cuadrático r2 y de correlación lineal r

a) Cálculos
Calcule el valor de residuo de Etanol en saliva v / v, por interpolación en la curva de calibración y multi-
plíquela por el factor de dilución, si corresponde

Y=a+bx

Otra forma de calcular la concentración de etanol

Determine la concentración de Etanol en la muestra de saliva, por interpolación y /o cálculo sobre la recta
de calibración. O utilizando la siguiente fórmula:
AM
AEI x [P]
----------------------- x 1000 x δ = gramos de etanol / 1000 mL de saliva
AP x [M]
AEI

Donde:
AM: Área de la muestra (expresada en cuentas de área)
AP: Área del Patrón (expresada en cuentas de área)
AEI: Área del estándar interno para cada caso (expresada en cuentas de área)
[P]: concentración del Patrón analítico
[M]: concentración de la muestra

b) Expresión de resultados
Mililitros de Etanol absoluto en 100 mL de saliva

c) Medidas de Seguridad
 Utilice los solventes en campana o ambiente bien aireado, la mayoría de los solventes orgánicos son
muy nocivos para la salud. Utilice siempre propipeta para pipetear solventes. Evite el contacto con la
piel, ojos o cualquier otra mucosa, si esto ocurriera lave con abundante agua durante 10 minutos, utilice
 copas lavaojos que se encuentran en el laboratorio. Avise inmediatamente a algún miembro de la cá-
tedra. Si por accidente se ingiere algún solvente lave la boca rápidamente con abundante agua y de par-
te a la cátedra lo más rápidamente posible.
 Limpie adecuadamente cualquier derrame de solvente, utilizando el material de seguridad que se en-
cuentra en laboratorio. Para derrames pequeños de solventes se puede limpiar con trapo rejilla, papel
secante o cualquier otro absorbente.
 No tire a la pileta ningún tipo de solvente por más inocuo que le parezca, Cuide el ambiente.
 Limpie la pipeta por fuera con papel de filtro u otro adecuado antes de enrasar, luego enrase perfecta-
mente en el primer aforo, descargue el fluido sin agitar y lentamente; enrase en el segundo aforo de la
misma manera que lo hizo en el primero y espere unos segundos para estar seguro que descargó la me-
dida de la pipeta en su totalidad.
 No toque con las manos sin protección las partes que reciben calentamiento en un Cromatógrafo Ga-
seoso, éstas pueden estar a varios cientos de grados centígrados y producir quemaduras severas.
 No deje burbujas de aire en la jeringa, observe bien ésta antes de inyectar en el Cromatógrafo.
 Seque perfectamente la jeringa antes de inyectar.
 No abra la puerta del horno de columna sin bajar la temperatura de la misma por lo menos a 50 ºC
 Cuide en todo momento la pulcritud del Cromatógrafo y sus adyacencias.
 Recuerde que el GC es un instrumento de gran valor y costo, y que los resultados a obtener dependen
de su buen manejo analítico.

NOTA para los preparadores:

Realizar la curva de calibración en el cromatógrafo
El cromatógrafo debe estar listo para inyectar la Solución muestra el día del Trabajo
Práctico y la curva de calibración debe ser capaz de realizar los cálculos de concentración de Etanol
100 % en 100 mL de saliva, mediante el algoritmo matemático del equipo.

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 TRABAJO PRÁCTICO N° 14

HPLC

DETERMINACIÓN DE ANTIOXIDANTES EN VINO TINTO

I. Objetivo.
Este trabajo práctico tiene por objetivo evaluar la capacidad antioxidante en vino tinto, a partir de la
determinación de trans-resveratrol mediante cromatografía líquida de alta performance.

II. Desarrollo.

Las muestras se analizan mediante un cromatógrafo Knauer Wellchrom, de acuerdo con el proce-
dimiento de Grüner et Engelhart (2000). Los datos fueron recolectados y procesados a través de la versión
del software Chrom Puerta 2.55.

a. Aparatos.
bomba cuaternaria para HPLC K-1001
un organizador de solventes Wellchrom K-1500
desgasificador de 4 canales K-5004
muestreador automático
termostato Peltier
columna Cig Luna (2) (150 x 4,6 mm de diámetro, 5 um), con una columna de seguri-
dad del mismo material. (Phenomenex, EE.UU.)
fotodiodo detector (PDA) K-2700

b. Reactivos.
buffer fosfato pH 3
acetonitrilo
trans-resveratrol

c. Procedimiento.

La curva de calibración se construye con patrones cuya concentración varía de 0,1 hasta 15 µg/mL.
Todas las determinaciones se realizan a 40 °C, luego de la filtración. Se inyectan 10 µL de standard o de
muestras de vino, directamente en la columna y se eluye por 13 minutos con 80% de buffer fosfato pH 3
(solvente A) y 20% de acetonitrilo (solvente B).

La detección se realiza mediante un detector de PDA a 307 nm. Los standard se preparan en la oscuri-
dad, de acuerdo con López et al. ( 2001). Los resultados se expresan como µM según Burns et al., (2000).