Aislamiento e identificación de Bacillus spp.

Las cepas bacterianas fueron identificadas como "típicas de Bacillus" cuando

poseían bordes irregulares, aplanados, de color blanco mate, brilloso, aspecto
harinoso, ceroso, seco o cremoso. Simultáneamente eran aisladas en una nueva
caja Petri con PDA para su purificación, además fueron debidamente etiquetadas
con números y códigos PSL, se incubaron a 28°C y se observó a diario durante un
periodo de cinco días para determinar que no hubiese contaminación.
Posteriormente se realizó tinción de Gram para determinar bacterias Gram+
utilizando la metodología de Carrea (2009) y 4 pruebas bioquímicas:
1. Prueba de la catalasa, adaptado de Zapata (2012)
–– Cada cepa fue sembrada por estría cruzada en medio de cultivo Agar
Nutritivo, se incubó a 28°C por 24 horas.
–– Por cada cepa se colocó en un portaobjetos codificado tres gotas de agua
oxigenada (H2O2).
–– Con un palillo se tomó un poco de la colonia y se colocó en la primera
gota, lo mismo se realizó para las dos gotas restantes con diferentes palillos,
teniendo así tres repeticiones para comprobar la reacción.
–– La prueba fue positiva una vez que se observó la formación de burbujas
debido a la producción de O2 por la actividad enzimática.

2. Prueba en Agar Hierro Triple Azucar (Cuervo, 2010)

3. Voges Proskauer (Aquiahuatl et al., 2012)
4. Prueba de la hidrólisis del almidón (Carrera, 2009)
Patogenicidad
Para el desarrollo de esta fase, se adaptó la metodología de Falconí (2014b).

Caracterización morfológica y bioquímica de Bacillus spp. Se realizó un descripción morfológica de

cada una de las cepas de Bacillus spp. seleccionadas en agar Triptona Glucosa Extracto de levadura
(TGE) en base a la apariencia de la forma, borde, superficie, tamaño, consistencia, color y
elevación de las colonias. Esta descripción se realizó después de 48 h de crecimiento del cultivo,
incubado a 28ºC. Para la identificación bioquímica a nivel de especie se realizaron las siguientes
pruebas según Claus & Berkeley (1986), HPA (2004), Lennette (1987): reducción de nitratos,
hidrólisis de almidón, Voges-Proskauer (VP), lecitinasa, fermentación y producción de gas a partir
de glucosa, crecimiento a 50ºC, crecimiento a 7% de NaCl y crecimiento en anaerobiosis.
 Medios de cultivo comunes donde crece Staphylococcus sp.
 Agar sangre
 Agar chocolate.
 Agares nutritivos: como BHI(Brain, Heart, Infusión), AST( Agar Soya Tripticasa),
Agar nutritivo, etc.
 Agar Sales y Manitol.
 Agar Baird-Parker.
 Agar sangre con ácido nalidixico.
 Caldos nutritivos, BHI, Cassoy.
 entre otros.
Para identificar el género usamos las pruebas bioquímicas
primarias.
 Tinción de Gram: Cocos Gram positivos, agrupados en racimos.
 Catalasa: positiva.
 Oxidasa: positiva.
 O/F: F

Nota: La prueba de O/F es la que diferencia Staphylococcus sp. del

género Micrococcus sp. este ultimo tiene metabolismo oxidativo.

Staphylococcus aureus
S. aureus es la especie más virulenta del género que se conoce ya que esta
bacteria tiene un amplio espectro de factores que contribuyen para producir
infecciones y enfermedad.

Algunas cepas de S. aureus pueden producir un pigmento carotenoide que les da

un color amarillo, el color es mas evidente en agares nutritivos como agar
sangre, agar chocolate, Agar infusión cerebro corazón, agar nutritivo,entre
otros.

Las cepas de S. aureus son productoras de coagulasa y beta -hemolisinas (algunas

cepas carecen de hemolisina).
 Staphylococcus aureus en agar sangre.

Staphylococcus aureus en agar sangre a contra luz para

observar la hemolisis beta.
Pruebas bioquímicas para la identificación de Staphylococcus
aureus.
 Agar sales y manitol: positivo (color amarilllo).
 Prueba de coagulasa: positivo.
 Sensisbilidad a vancomicina: positivo.
 Única especie de Staphylococcus que puede producir pigmentación amarilla.
 DNAasa: positiva.

Medio de cultivo diferencial y selectivo para Staphylococcus aureus,

A la izquierda crecimiento abundante y característico (coloración negruzca

producida por la reducción del telurito de potasio y fermentación de manitol +
que da la coloración a marilla) de Staphylococcus aureus, del lado derecho el
medio sin inocular.
Así en la biodegradación dehidrocarburos, se utilizan bacterias con alta capacidad degradativa,
entre estas:

Brevibacterium ,

Spirillum,

Xanthomonas

Alcaligenes ,

Arthrobacter ,

Nocardia,

Flavobacterium,

Vibrio,

Achromobacter ,

Acinetobacter ,

Micrococcus,

Pseudomonasaeruginosa,

Serratia rubidae,

Bacillus sp.,

Pseudomonas mendocina

, Pseudomonasaureofasciens