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ENZIMAS
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Ingeniería en Biotecnología
BIOQUÍMICA MICROBIANA
REPORTE DE LA PRÁCTICA
01 ENZIMAS
DATOS
GENERALES
Práctica No.
Profesor: Ramón Cervantes Rivera
Objetivos de la práctica
Que el alumno adquiera competencias para identificar enzimas de diferentes muestras
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biológicas.
Que el alumno adquiera las competencias para tratar correctamente muestras de enzimas a
analizarse posteriormente.
Que el alumno analice los efectos en el funcionamiento de las enzimas, como resultado
Justificación
La aplicación de técnicas para la identificación de enzimas en diferentes compuestos y los
factores que afectan la actividad enzimática, proporcionará a los alumnos herramientas que
incrementarán su competitividad como ingenieros biotecnólogos.
Al finalizar la práctica, el alumno debe ser Utilizar técnicas de análisis para determinar las
capaz de: características de los productos biotecnológicos
Analizar muestras biológicas para la mediante parámetros físicos, químicos.
identificación de enzimas. – Realizar el informe de los resultados de los
Comprender la utilidad de la técnica para el análisis que permitan caracterizar el producto con
análisis de enzimas de interés biotecnológico base a sus propiedades físicas, químicas y
biológicas
INTRODUCCIÓN
Una enzima es una proteína que tiene función de biocatalizador; este proceso se lleva acabo
sobre una molécula denominada como sustrato, también como aclaración, las enzimas son
específicas con el sustrato con el que reacciona, dejando que solo puede realizar el proceso
de catalizacion sobre un solo sustrato o molécula, este proceso se lleva a cabo en la parte de
la enzima llamada sitio activo que tiene características especiales para que el proceso de
catalizacion se lleve a cabo. Este proceso no afecta en si el proceso natural de la reacción
que cataliza si no que su función es el de ayudar a que el proceso se realice más rápido.
La acción de la enzima se puede ver de 2 formas:
La vía alterna que se realiza gracias a la enzima, que sin la presencia de la enzima ya
que existe una barrera virtual entre los sustrato o productos para que estos se
conviertan a productos denominada energía libre de activación, es la energía que se
requiere para su conversión de sustrato a productos y que gracias a la ayuda de la
enzima se requiere menos energía, por consiguiente también la velocidad con que la
reacción se realiza en menor que de forma natural.
El sitio activo de las enzimas contiene diferentes mecanismos químicos que facilita la
conversión de sustrato a productos, este actúa como un molde tridimensional
específico que se une al sustrato. El sitio activo contiene grupos catalíticos que
facilitan la reacción como una catálisis tipo acido-base donde algunos residuos de
aminoácidos proveen o aceptan protones.
El proceso enzimático tiene diferentes factores que afectan a que el proceso se realice
con mayor o menor eficacia tales como:
Concentración del sustrato: Cuando se tiene altas cantidades de sustrato en
comparación con la concentración fija de la enzima se obtiene la velocidad máxima,
donde cuando se está en forma inversa las concentraciones decrece la velocidad.
Temperatura: Un incremento en 10ºC duplica la velocidad de la reacción, hasta ciertos
límites. Pero cuando se incrementa mucho la temperatura desnaturaliza la proteína y
pierde su actividad.
pH: el pH es óptimo es 7, y un cambio en este pH afecta su actividad haciéndola
incrementar o bajar su actividad.
Cofactores: Muchas enzimas para sus procesos requieren cofactores sean activadores
o coenzimas.
reacción, al igual la temperatura siendo su temperatura ideal de 37ºC y una variación más
alta hace que descienda bruscamente su actividad al punto de ser nula su actividad por la
desnaturalización que llega a ser a los 45ºC aproximadamente o en menor temperatura si
realiza el proceso pero con mucha menor velocidad.
La forma en que reacciona este enzima en descomponer el peróxido de
hidrógeno (agua oxigenada) en agua y oxígeno al ser una oxidorreductasa que Catalizan una
amplia variedad de reacciones de óxido-reducción, empleando coenzimas, tales como NAD + y NADP+.
H 2 O2 → H 2 O+ O2 .
Dentro de la practica en las diversas muestras se encontraba en diferentes
concentraciones la catalasa siendo más predominante en el hígado y posiblemente en menor
cantidad en la zeta donde se observó una menor reacción en la practica, siendo asi también
que las catalasas de origen animal y vegetal la reacción visual que se presento fueron muy
diferentes entre ellas, siendo las rápida y constante las del hígado y la espinaca, pero
mayormente en el hígado y de igual forma más rápida en el hígado, y con mayor lentitud en
los vegetales. Tanto el almidón, que pertenece a las células vegetales, como el glicógeno, de
5 ambas
las células animales, ambos son polímeros de glucosa en distintas estructuras, siendo
estas distintos tipos de azucares.
CRISTALERÍA
CANTIDAD MATERIAL ESPECIFICACIONES
1 Gradilla para tubos de ensayo
15 Tubos de ensayo
1 Bulbo para pipeta
4 Pipeta 5 ml
1 Mechero
2 Pipetas Pasteur con bulbo
1 Pinzas para tubo de ensayo
1 Termómetro
1 Placa de porcelana
2 Goteros
2 Morteros
2 Perilla de seguridad
3 Vaso de precipitados
1 Pizeta 50 ml
Equipos requeridos
Baño maría
REACTIVOS REQUERIDOS
NOMBRE CANTIDAD S I R O
Peróxido de hidrógeno H 2 O 2 50 ml 2 0 3
Solución 3 M de Hidróxido de sodio 20 ml 3 0 1 Corrosiv
NaOH o
Solución 3M de Ácido clorhídrico 20 ml 3 0 0 Corrosiv
HCl 6o
PARTE EXPERIMENTAL
E - Agua
3. Se marcó el nivel hasta de cada muestra.
H
4. Se colocaron 3 ml de peróxido de hidrógeno (¿ ¿ 2 O2) en cada tubo de ensayo.
¿
5. Se marcó la reacción que sucedió en cada tubo y el cambio en el nivel del líquido.
6. Los resultados se tabularon en una tabla (Tabla 1).
Efecto de la temperatura sobre el funcionamiento de las enzimas:
1. Se rotularon cinco tubos de ensayo del 1 al 5.
2. Se añadieron 5 ml de muestra de hígado a cada tubo.
3. Se mantuvieron los tubos a las siguientes condiciones:
Tubo 1: 80° C por 15 minutos
Tubo 2: 37° C por 15 minutos
Tubo 3: Temperatura ambiente
Tubo 4: Hielo por 30 minutos
Tubo 5: Refrigerador a 4° C por 30 minutos
H 7
4. Se añadieron 2 ml de peróxido de hidrógeno (¿ ¿ 2 O2) al tubo 1.
¿
H
5. Se realizó la medición del tiempo transcurrido desde que se añadió el (¿ 2 O2)
¿ hasta
¿
que se produjeron burbujas y se anotó en una tabla. (Tabla 2)
6. Se repitió el procedimiento con los demás tubos.
Efecto del pH sobre la actividad enzimática:
1. Se rotularon tres tubos de ensayo A, B y C.
2. Se añadieron 3 ml de muestra de hígado a cada tubo.
3. Se añadieron 3 ml de HCl y 3 ml de NaOH a los tubos, y se realizó agitación
suave hasta mezclarlos:
Tubo A – 3 ml de 3 M HCl
Tubo B – 3 ml de 3 M NaOH
Tubo C – Control (sin ácido ni base)
H
4. Se añadieron 3 ml de peróxido de hidrógeno (¿ ¿ 2 O2) a cada tubo.
¿
5. Se observaron y realizaron las anotaciones en una tabla (Tabla 3).
C 24 s Burbuja abundante.
Tabla 3: Efecto del pH sobre la actividad enzimática.
peróxido de organismos.
1. ¿Qué ocurrió al añadir el peróxido?
hidrógeno.
En la mayoría de las muestras se generó burbujeo en diferentes concentraciones y en
diferentes tiempos.
2. ¿Ocurrió lo mismo en todasFoto
las4:muestras?
Hígado a
Hígado de res, aguacate, cebolla, rábano, col, pepinos, nabos, apios, pues en estos
alimentos se encuentra la enzima catalasa
5. ¿Por qué no se añadió el peróxido directamente a los tejidos sin macerarlos?
Porque se obtiene mejor la enzimas si la tomamos directamente del jugo ya que se
encuentra en mayor concentración que si tomamos del tejido directamente pues aparte de la
enzima contiene otras proteínas que pudieran afectar la enzima.
6. Explique por qué la gran mayoría de las especies de plantas y de animales producen la
enzima catalasa.
La catalasa es una enzima que libera agua y oxigeno que resulta de la descomposición del
peróxido, el cual es el desecho del metabolismo de las células y necesita ser descompuesto
en agua y oxígeno, ya que el peróxido es toxico se necesita descomponer, es ahí donde
interviene la catalasa, entonces por ello las plantas y animales producen esta enzima.
7. ¿Cómo se relacionan la temperatura y la actividad enzimática?
La actividad enzimática es óptima en los rangos de temperatura de 35 a 37ºC, por arriba de
esos valores las Enzimas (Proteínas con funciones metabólicas) se Desnaturalizan, es decir,
pierden momentáneamente sus funciones metabólicas porque su estructura terciaria
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desorganiza.
Por debajo de estos valores las Enzimas son Inhibidas, es decir, se mantienen inactivas de
tal manera que no pueden intervenir en una reacción enzimática.
8. ¿Qué le sucede a las enzimas cuando se exponen a temperaturas extremas (muy frías o
muy calientes)?
La enzima se desnaturaliza ya que a altas o bajas temperaturas, ésta pierde su estructura
terciaria, que es la que en definitiva le da la función a la enzima. Sin su estructura no está
formado el sitio activo, por lo que no tiene actividad alguna.
9. ¿Cómo se relacionan el pH y la actividad enzimática?
Si se mide la actividad enzimática a diferentes pH , se puede demostrar el efecto de la
concentracion de H (protones), para la mayoria de las enzimas se encuentra entre un
pH de 6 a 8 si está por debajo o por encima de estos valores la velocidad cae mas o
menos rápidamente, los cambios de pH del medio afectan el estado de ionización de
ciertos grupos funcionales en la molécula de la enzima y también en la del sustrato.
Durante el desarrollo de esta práctica observamos que los materiales orgánicos que
utilizamos fueron un poco complicados de triturar ya que solo utilizamos su jugo y algunos
como la papa y las setas fueron los más duros y por lo tanto los más complicados en
obtener su jugo, para obtener solamente el jugo fue necesario filtrara con gasa las muestras
además de exprimir para que se obtuviera todo el jugo que necesitamos. Las diferentes
temperaturas que utilizamos afectaban en la reacción con el peróxido de Hidrogeno, por ello
fue necesario de tomar las temperaturas extremas correctamente como fueron a 4°C Y 80°C
como también cuando la muestra se refrigero ya que como eran temperaturas opuestas la
reacción que provoco fue muy notoria en ambos casos. Fue necesario tomar la cantidad
exacta de peróxido para cada muestra ya que si se colocaba más o menos cantidad pudiera
que reaccionara diferente como de misma manera la persona que colocaba el peróxido tenía
que ser la misma persona para que la fuerza con la que cayera al tubo fuera la misma. Los
tiempos tomados en cada muestra fueron de ayuda para que existiera reacción ya que influía
con ello la temperatura y como ya sabemos la temperatura es necesaria para que cierta
enzima reaccione o también como es una proteína, es necesaria la temperatura para que
esta no se desnaturalice.
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CONCLUSIONES
pudo descomponer el agua oxigenada, y por lo tanto se concluyó que la enzima catalasa fue
desnaturalizada al realizar esto la enzima manifestó una actividad efervescente puesto que
al agregar el peróxido de hidrogeno la enzima catalasa catalizo la oxidación y como resultado
nos dio la formación burbujeo.
Se afirmó que los resultados de las diferentes muestras dieron resultados distintos gracias a
las condiciones de temperatura y pH distintos que se utilizaron para cada uno de ellos.
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BIBLIOGRAFÍA
“Efecto del pH y la temperatura alta en la enzima catalasa” Elaborada por: Bióloga María del
http://www.profesorenlinea.cl/Ciencias/Hidratos_carbono_Glicogeno.html
http://mazinger.sisib.uchile.cl/repositorio/lb/ciencias_quimicas_y_farmaceuticas/schmidth02/p
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http://www.infobiologia.net/2011/09/lisosomas-peroxisomas-y-vacuolas.html
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http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/0403/funcion%20enzima.html
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