EVOLUCION E HISTORIA DEL LABORATORIO CLINICO

Historia del laboratorio Clínico.

¿Qué es un laboratorio Clínico?
El laboratorio clínico es el lugar donde los profesionales en análisis clínicos, analizan
muestras biológicas humanas que contribuyen al estudio, prevención, diagnóstico y
tratamiento de las enfermedades.

La historia del laboratorio clínico está ligada con la historia y avances de la medicina

 Edad antigua: Chamanes y curanderos.

La medicina en la edad antigua.
Los avances en la historia de la medicina datan desde Egipto:
"La envoltura corporal es un elemento necesario para alcanzar la vida eterna y su daño
o destrucción impedirán lograrlo"
 Grecia (460 a.C)
Hipócrates introduce el concepto de mantener el paciente limpio y estéril. Postuló la
teoría de los humores en el organismo: sangre, flema, bilis amarilla y bilis negra.
 Galeno (130 d.C)
Avances significativos en el estudio de la fisiología.
Describió diversas enfermedades infecciosas como la peste, y su mecanismo de
propagación.
 Anton Van Leewenhoek (1632)
Observación por microscopios elaborados por él mismo.
Precursor de la biología experimental, celular y la microbiología
Se opone a la teoría de la generación espontánea.
 Semmelweiz (1818)
Pionero de la antisepsia y prevención de infecciones nosocomiales “Cáustico, de
personalidad desagradable, incapaz de inspirar en otros el deseo de seguirlo"
 1822. Luis Pasteur
Realizó importantes contribuciones en química y en microbiología.
Preparó las primeras vacunas con bacterias desactivadas
Sugirió las primeras técnicas de esterilización

 Finales del siglo XIX

Pasteur, Koch y Joseph Lister demuestran la naturaleza bacteriana de los procesos
infecciosos
 INFORME DE LABORATORIO

Informe de laboratorio #1
Pipeta de vidrio
Tubo de vidrio graduado con medidas, con un margen de error considerable, que se emplea para
sacar de un recipiente pequeñas porciones de líquidos. Tienen un ensanchamiento en su zona
central siendo un tubo estrecho, donde se indica la temperatura de uso y la capacidad. Para cargar
la pipeta, se aspira el líquido por la parte superior con la ayuda de una pera de goma hasta el
enrase y se descarga totalmente sobre el recipiente.
Descripción de las partes de las pipetas; donde indican su capacidad, tolerancia y división.
(Imagen)

Pipeta automática
Son pipetas que se utilizan para transferir cantidades muy pequeñas (1- 500 μl) se les conoce
como pipetas de tipo landa (o microlitro) El tipo más frecuente de micropipetas utilizadas ahora son
las de tipo Eppendorf. Estas pipetas funcionan mediante un pistón y llevan puntas desechables de
plástico para evitar contaminaciones y las puede haber: de volumen fijo y volumen variable. Estas
pipetas tienen acoplado un dispositivo que permite expulsar la punta, en el caso de que trabajemos
con materiales que ataquen al plástico hay pipetas que tienen la punta de vidrio.
Uso:
1. Para su uso primero debemos indicar la cantidad a transferir, luego se pone la punta. Se debe evitar
que la punta se contamine.
2. Se presiona suavemente, sin llegar al fondo, el dispositivo de absorción ubicado el extremo
contrario de la punta.
3. Se expulsa el líquido presionando nuevamente, pero ahora se llega hasta el fondo.
4. Finalmente se desecha la punta presionando el dispositivo de expulsión situado a los lados de las
pipetas.
 Medidas
Conversión de medidas: litro, mililitro y micro litro.

INFORME LABORATORIO #2

Equipos:
1. Fotocolorímetro
2. Fotómetro
3. Espectrofotómetro

SEMEJANZAS

· Sirven para determinar sustancias del cuerpo humano.

· Se puede investigar: sangre total, plasma, suero, líquido cefalorraquídeo, orina, líquido amniótico,
y secreciones purulentas.
 Se determina mediante reactivo líquidos.

DIFERENCIAS

Fotocolorímetro

Es el más antiguo y se requiere la participación de una fuente de luz, funciona con una lámpara.
Sirve para emitir rayos de luz que atraviesan el reactivo y la sustancia. Este lee en longitudes de
onda del rango Espectro Visible. Demora entre 30 a 40 minutos.
 Fotómetro

Con los fotómetros podemos medir la luz incidente, es decir, podemos medir la Iluminación, la
densidad del flujo luminoso. También se puede hacer la de la luz reflejada, en este caso lo que
medimos es la luminancia. Utiliza filtros de longitud de ondas de rango Espectro Visible y Espectro
Ultravioleta visible.
Espectrofotómetro

Es el más pequeño y más específico. No utiliza filtro, pero se debe pedir la longitud de onda en el
panel de control.

Filtros específicos
Espectro visible (EV)
Se denomina espectro visible a la región del espectro electromagnético que el ojo humano es
capaz de percibir. A la radiación electromagnética en este rango de longitudes de onda se le llama
luz visible o simplemente luz. El rango es de 400 a 700 nm. Existen filtros de:

§ 492 nm
§ 570 nm
§ 636 nm
§ 700 nm

Espectro ultravioleta visible (UV)

La espectroscopia UV-visible se utiliza para identificar algunos grupos funcionales de moléculas, y
además, para determinar el contenido y fuerza de una sustancia. Se utiliza extensivamente en
laboratorios de química y bioquímica para determinar pequeñas cantidades de cierta sustancia,
como las trazas de metales en aleaciones o la concentración de cierto medicamento que puede
llegar a ciertas partes del cuerpo. Su rango es de 10 a 400 nm. Existe filtros de: 340 nm.
Espectro infrarrojo (IR)
Cada compuesto químico tiene asociado un espectro infrarrojo característico, donde los máximos
de absorción corresponden a determinadas energías de vibración de los enlaces químicos
presentes. Por tanto, esta técnica permite detectar la presencia, en el material analizado, de
diferentes impurezas. Su rango es de 700 a más.

Cubetas
Una cubeta de espectrofotómetro es un pequeño tubo de sección circular o cuadrada, sellado en
un extremo, fabricado en plástico, vidrio o cuarzo y diseñado para mantener las muestras durante
los experimentos de espectroscopía.
Cubeta de 2 cm

Cubeta de 1 cm
 INFORME DE LABORATORIO #3

Espectrofotómetro

Sirven para determinar sustancias del cuerpo humano mediante reactivo líquidos. Se puede
investigar: sangre total, plasma, suero, líquido cefalorraquídeo, orina, líquido amniótico, y
secreciones purulentas. Es el más pequeño y más específico que el fotocolorímetro y fotómetro. No
utiliza filtro, pero se debe pedir la longitud de onda en el panel de control.
Funcionamiento
Se enciende el aparato en la parte posterior, en el interruptor.

Panel de control
Botones y funcionamiento
% Tanto por ciento de transmitancia
Este modo se selecciona moviendo el cursor al menú %T utilizando las teclas cursoras izda/dcha.
La pantalla principal mostrará la transmitancia, con las unidades %T, que se lee en números
enteros. El haz de luz se detiene mientras mayor concentración haya. La longitud de onda puede
ajustarse utilizando las teclas cursoras arriba/abajo.
Calibración: Una rutina de calibración se inicia pulsando la tecla CAL. La rutina realiza una
calibración de transmisión % cero seguidas de una calibración de transmisión 100%. Debe
utilizarse una disolución blanca (pura) para este procedimiento de calibración. (Se activa
automáticamente un registro interno para realizar el ajuste % cero y este parte de la rutina es, por
tanto, independiente de la disolución en el recorrido de luz).
D. opt.
Densidad óptica
Este modo se selecciona moviendo el cursor al modo D. opt. utilizando las teclas cursoras
izda/dcha. Sirve para medir la concentración de la sustancia. Es diversamente proporcional a la
transmitancia. La pantalla principal mostrará la densidad óptica con unidades absorbancia que se
leen en decimales. La longitud de onda puede ajustarse utilizando las teclas cursoras arriba/abajo.

Calibración: Una rutina de calibración se inicia pulsando la tecla CAL. La rutina desarrolla una
calibración de transmisión % cero seguida de una calibración de absorbancia 0.000. Debe
utilizarse una disolución blanca (pura) para este procedimiento de calibración. (Se activa
automáticamente un registro interno para realizar el ajuste % cero y esta parte de la rutina es, por
tanto, independiente de la disolución en el recorrido de luz). El instrumento indicará absorbancia
por encima del rango (1. Dopt) durante la calibración oscura.

UNIDAD
Unidades
Las unidades de concentración pueden ajustarse seleccionando la opción de menú UNIDAD y
después pasando con las teclas cursoras arriba/abajo. Se puede seleccionar unidades de ppm
(partes por mililitro), mg/l (miligramos por litro), g/l (gramos por litro), M (moles), % (porcentaje) y
hay un espacio vacío para poner una unidad desconocida. Al pulsar las teclas ENT o CAL regresa
al modo de concentración más longitud de onda.Con.
Concentración
Este modo se selectionna moviendo el cursor a la opción de menú CONC utilizando las teclas
cursoras izda/dcha. La pantalla principal mostrará la concentración, con ppm, mg/l, g/l, M, % o
unidades en blanco. La longitud de onda puede ajustarse utilizando las teclas cursoras
arriba/abajo.

BioKit
Un Biokit de laboratorio contiene: Primer tubo o blanco reactivo contiene solamente 3cc de
reactivo; es de tapa blanca. El segundo tubo contiene el reactivo más la sustancia que va a
 reaccionar; es de tapa amarilla. El tercer tubo o tubo de investigación, también llamado tubo X,
contiene el reactivo más 20 ul de la muestra del paciente.
Valores normales de hemoglobina en la sangre:

gr/dl
Hombres ♂ 13 - 17

Mujeres ♀ 12.5 - 15

Reflectrómetro

Se utiliza para leer reactivos sólidosA diferencia del espectrofotómetro el haz de luz no traspasa,
se refleja hacia quien lo va a calcular. Se lo conoce a este aparato para detectar la α dexoglucosa
en la sangre, que sus valores normales son 65 – 110 mg%.
VIERNES, OCTUBRE 21, 2011 LOURDES SÁNCHEZ

Informe de laboratorio #4

Determinación de hemoglobina
El análisis de hemoglobina puede realizarse como parte de un examen de rutina o durante una
enfermedad, pero suele formar parte del recuento hemático completo. El análisis de hemoglobina
se utiliza principalmente para detectar varios tipos de anemia, una enfermedad común que aparece
cuando la cantidad de glóbulos rojos de una persona es demasiado baja.

Materiales
· Reactivo de ciano-hemoglobina
· Pipeta automática, de ul
· Pipeta de 5ml
· Muestra (sangre)
· Espectrofotómetro
· Tubo de ensayo al vacio (tapa lila)
· Cubeta
 Procedimiento

1. Se extrae una muestra de sangre del paciente.

En general, se extraerá sangre de una vena. Primero se limpia la superficie de la piel con alcohol y
se coloca una banda elástica (torniquete) alrededor del brazo para ejercer presión y lograr que las
venas se hinchen con sangre. A continuación, se inserta una aguja en la vena, se hace a la altura
del codo en la parte interna del brazo, se extrae sangre que se recoge en un tubo de ensayo al
vacío, tapa lila. Después del procedimiento, se retira la banda elástica. Una vez recolectada la
sangre, se retira la aguja y se cubre la zona con algodón o una venda para detener el sangrado.
2. Se coloca 5ml de ciano-hemoglobina en tubo de ensayo.
3. Al mismo tubo de ensayo se le agrega 20 ul de la muestra y se lo mezcla hasta que tenga coloración
rojiza.
4. Luego se lo coloca en el espectrofotómetro para tomar la densidad óptica a una longitud de onda de
546 nm, durante 5 minutos.

Resultado:
Se extrajo la muestra de uno de los compañeros, de acuerdo al procedimiento antes descrito, el
resultado que nos dio fue:
12.3 gr/dl
Valores normales de hemoglobina en la sangre: en hombres 13 – 17 gr/dl y en mujeres 12.5 – 15
gr/dl

Tubos de ensayo
Tubo de tapa roja .-Tiene capacidad de 10 cm3. Es un tubo al vacío, no se necesita jeringuilla. No
tiene anticoagulante, por lo que luego del centrifugado hay suero.

Tubo de tapa lila .- Tiene capacidad de 5 cm3. Tiene una cantidad mínima de anticoagulante EDTA
(ácido etil endiamino tetreacético), que sirve para mantener a las células sanguíneas sin
transformación. Sirva para hemogramas. Como tiene anticoagulante, al centrifugarse se obtiene
plasma, dentro todas las proteínas de coagulación. Es un tubo al vacio.
Tubo de tapa azul

Tiene capacidad de 4.5 cm3. Es un tubo al vacío, para pruebas de coagulación sanguínea. Tiene
un anticoagulante, citrato de sodio al 3.8%, que permite especificar proteínas de coagulación.
Tiene 500ul de reactivo, entonces se le pondría 4500 ul de sangre.

Tubo de tapa verde

Sirve para la gasometría arterial. Tiene al reactivo anticoagulante: heparina.

CURVA DE HEMOGLOBINA, ESPECTROFOTOMETRO – INFORME DE LABORATORIO #5

Espectrofotómetro
¿Por qué es espectrofotómetro?
Porque a diferencia del fotocolorímetro y fotómetro, el espectrofotómetro no utiliza filtros, tiene
rejilla. Además lee en espectro infrarrojo y su sistema es digitalizado.

Componentes básicos

Panel de control
Botones y funcionamiento
%T
Tanto porciento de transmitancia
Este modo se selecciona moviendo el cursor al menú %T utilizando las teclas cursoras izda/dcha.
La pantalla principal mostrará la transmitancia, con las unidades %T, que se lee en números
enteros. El haz de luz se detiene mientras mayor concentración haya. Por ejemplo: si es agua
destilada tendrá una transmitancia del 100%.
D. opt.
Densidad óptica
Este modo se selecciona moviendo el cursor al modo D. opt. Utilizando las teclas cursoras
izda/dcha. Sirve para medir la concentración de la sustancia. Es diversamente proporcional a la
transmitancia. La pantalla principal mostrará la densidad óptica con unidades absorbancia que se
leen en decimales. La longitud de onda puede ajustarse utilizando las teclas cursoras arriba/abajo.
 Calibración
Calibración automática: El aparato se calibra automáticamente al prenderse, esto se realiza sin
cubeta.
Calibración manual: Se realiza poniendo en una cubeta con una disolución blanca (agua destilada
o el reactivo). Luego se presiona la tecla CAL.

Curva de Hemoglobina

Procedimiento
1. Se coloca 5 ml de reactivo cianohemoglobina y 40 ul de sangre en un recipiente.
2. Se mezcla y se deja reposar por 5 minutos.
3. En distintas cubetas se colocan 0,5cm3; 1cm3; 1,5cm3; 2cm3; 2,5cm3; 3cm3.
4. Se mide la densidad óptica de cada cubeta en el espectrofotómetro.
5. Se anotan los resultados y se realiza la gráfica

Resultados
0,5cm3 --- 0,097
1cm3 --- 0,054
1,5cm3 --- 0,28
2cm3 --- 0,15
2,5cm3 --- 0,178
 PROTEÍNAS TOTALES

Informe de laboratorio #6
Proteínas totales
Es una medición aproximada de todas las proteínas encontradas en la porción líquida de la sangre.
Esta prueba examina específicamente la cantidad total de dos clases de proteínas: albúmina y
globulina.
Las proteínas son partes importantes de todas las células y tejidos. Por ejemplo, la albúmina ayuda
a impedir que se escape líquido fuera de los vasos sanguíneos. Las globulinas son una parte
importante del sistema inmunitario.

Materiales

· Reactivo Biuret
· Reactivo EDTA
· Agua destilada
· Pipeta automática, de ul
· Pipeta de 1ml
· Muestra (sangre)
· Espectrofotómetro
· Tubo de ensayo al vacio (tapa lila)
· Cubeta

Procedimiento

1. Condiciones del ensayo:

Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . 540 (530 -550) nm
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . .1 cm paso de luz
Temperatura. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37ºC / 15-25ºC
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.

3. Pipetear en una cubeta:

 4. Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC o 10 minutos a Tª ambiente.
5. Leer la Densidad óptica del Patrón y la muestra, frente al Blanco de reactivo.

Resultados
Se utilizaron tres tubos para realizar la calibración, medir la absorbancia del patrón y la muestra.
 Primer tubo: 0,000 densidad óptica (Blanco)
 Segunda tubo: 0,080 densidad óptica (Patrón)
 Tercer tubo: 0,061 densidad óptica (Muestra)

0,061/0,080 = 0,7625
0,7625 x 7
= 5,3375 g/dL
Valores de referencia
Adultos: 6,6 – 8,3 g/dL
Recién nacidos: 5,2 – 9,1 g/dL

ALBÚMINA EN SUERO -

Informe de laboratorio #7
Albúmina en suero
La albúmina es una proteína producida por el hígado. El examen de albúmina en suero mide la
cantidad de esta proteína en la parte líquida y transparente de la sangre.
Se necesita una muestra de sangre. Para obtener información sobre cómo se hace este examen.
La muestra de sangre se coloca en una máquina, llamada centrífuga, la cual gira y separa las
células de la parte líquida de la sangre (suero).
Materiales
· Reactivo Suero Albúmina
· Reactivo Patróm
· Agua destilada
· Pipeta automática, de ul
· Pipeta de 1ml
· Muestra (sangre)
· Espectrofotómetro
· Tubo de ensayo al vacio (tapa lila)
· Cubeta

Procedimiento
1. Condiciones del ensayo:

Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . 626 (600 -650) nm

Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . .1 cm paso de luz

Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15-25ºC
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.

3. Pipetear en una cubeta:

BLANCO PATRÓN MUESTRA

SUERO PATRÓN 10ul

MUESTRA 10ul

REACTIVO EDTA 2ml 2ml 2ml

4. Mezclar e incubar 10 min a temperatura ambiente (15-25ºC).

5. Leer la densidad óptica del Patrón y la muestra, frente al Blanco de reactivo.
Resultados
Primer tubo: 0,000 densidad óptica (Blanco)
Segunda tubo: 0,533 densidad óptica (Patrón)
Tercer tubo: 0,720 densidad óptica (Muestra)

0,720/0,533 = 1,3508
1,3508 x 5
= 6,7542 g/dL
Valores de referencia
3,5 – 5,5 g/dL
UNIDADES MEDICINALES Y SOLUCIÓN MOLAR - INFORME DE LABORATORIO # 8

SISTEMA DE UNIDADES MEDICINALES

Un sistema de unidades es un conjunto consistente de unidades de medida. Definen un conjunto
básico de unidades de medida a partir del cual se derivan el resto. Son los siguientes:

Medida Descripción
m metro Unidad de longitud
kg kilogramo Unidad de peso:
g. Gramo
dg. Decigramo
cg. Centigramo
mg. Miligramo
ug ó mcg. Microgramo
l litro Unidad de litro o capacidad:
dl. Decilitro
cl. Centilitro
ml. Mililitro
Ui/l Trabajo o actividad catalítico de
enzimas

¿Qué es una Ui/l?

Es una unidad de trabajo catalítico realizado por una enzima en una cantidad de sustrato en
condiciones estandarizadas.
PREFIJOS UTILIZADOS EN MEDICINA
m mili 10-3
µ micro 10-6
n nano 10-9
p pico 10-12
f fento 10-15
a atto 10-18

SOLUCIÓN MOLAR
¿Qué es un mol?
Es el peso molecular de una sustancia expresada en gramos.
10l = Ej ClNa
Cl = 35 g
Na = 23 g
Al sumar ambos valores tenemos
35 + 23 = 58 g = SOL 1M
1 M = 58 g NaCl
Equivalente químico. Corresponde al peso molecular de una sustancia dividida para su valencia

Mili equivalente (mEq). Es la milésima parte del equivalente, muy importante para medir iones de
los electrolitos

CÁLCULO DE mEq DE UN ELETROLITO

ClNa 0,9% x mEq de Cl y Na

1. Obtener el Mol
Cl = 35 g
Na = 23 g
ClNa = 58 g =Eq

1 Eq = 1000 mEq

2. El peso de ClNa en el l de una solución fisiológica 0,9% = 0,9 g en 100 ml

9 g en 1000 ml = 1 litro

3. Regla de tres
Si en 58 g de ClNa hay 1000 mEq
En 9 g cuántos mEq existe

(9 x 1000)/58 = 155 mEq/l

4. Conclusión
En un litro de ClNa 0,9% existe 155 mEq de Cl y de Na en el suero fisiológico.

¿Cuántos mEq/l hay en el ClK?

Cl = 35 g
K = 39 g
ClNa = 74 g =Eq

1 Eq = 1000 mEq

1. El peso de ClK en el l de una solución de 1,5% = 1,5 g en 100 ml

15 g en 1000 ml = 1 litro
2. Regla de tres
Si en 74 g de ClK hay 1000 mEq
En 15 g cuántos mEq existe
(15 x 1000)/74 = 202,702 mEq/l

3. Conclusión
En un litro de ClK 1,5% existe 202,702 mEq de Cl y de K.

DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE GOT Y GPT EN SUERO - INFORME DE LABORATORIO #10

DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE GOT Y GPT EN SUERO

Transaminasas
Las transaminasas GOT y GPT son enzimas ampliamente difundidas en el organismo con elevada
concentración en corazón, hígado, músculo esquelético, riñón y eritrocitos. La actividad sérica en
condiciones normales es baja o nula. Un daño o enfermedad en cualquiera de estos tejidos
conduce a un aumento en los niveles séricos. Así, luego de un infarto de miocardio se produce en
suero un marcado aumento de la actividad de GOT (abundante en músculo cardíaco).

En hepatitis virales y otras formas de enfermedad hepática que involucren necrosis tisular,
predominará la actividad sérica de GPT (abundante en tejido hepático). Una elevada actividad de
transaminasas puede detectarse también en traumas accidentales o quirúrgicos y en distrofias
musculares o miositis.

Materiales
• Baño maría a 37ºC
• Agua destilada
• Pipeta automática, de ul
• Pipeta de 1ml
• Muestra (sangre)
• Espectrofotómetro
• Tubos de ensayo
• Cubeta
• Matraz
Reactivos
• Sustrato GOT: solución con 100 mM de l-aspartato y 2 mM de α-cetoglutarato en buffer fosfatos
100 mM, pH 7,4.

• Sustrato GPT: solución con 200 mM de dl-alanina y 2 mM de α-cetoglutarato en buffer fosfatos

100 mM, pH 7,4.
• Reactivo 2,4-DNFH: solución conteniendo 1 mmol de 2,4-dinitrofenilhidracina en ácido clorhídrico
1 mol/l.
• Diluyente para Enzimas concentrado: solución de hidróxido de sodio 4 mol/l.
Procedimiento
1. Preparar el diluyente para enzimas en un litro de agua destilada.
2. Centrifugar la muestra de sangre a 3000 rpm por 5 minutos.
3. Calibrar el espectrofotómetro con agua destilada.
4. En dos tubos marcados B (Blanco) y D (Desconocido), colocar:

5. Mezclar por inversión y retirar del baño.

6. Después de 2 minutos leer la densidad óptica en espectrofotómetro a 505 nm.
Valores de referencia
Se consideran valores normales de transaminasas (GOT y GPT) hasta 12 U/l. Si bien se han
hallado individuos normales con valores hasta 18 U/l, los niveles de transaminasas que se
encuentren entre 12 y 18 U/l deben considerarse sospechosos.
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.
Resultados
• Blanco: 0,443 densidad óptica
• Desconocido: 0,514 densidad óptica

0,514 - 0,443 = 0,071

11 U/l