UNIVERSIDAD DE SANTANDER

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS NATURALES

172302- LABORATORIO DE BIOQUÍMICA (2019B)

Espectrofotometría y diluciones
Ardila Carreño, N.A., Ortiz Rivera, K.P, Sánchez Arciniegas, L.N.
Programa de Bacteriología
Universidad de Santander, Bucaramanga, Colombia, 680003
.B1, Apellido, C.C.11Programa de Bacteriología / Microbiología Industrial
Universidad de Santander, Bucaramanga, Colombia, 680003
RESUMEN diluciones. Se utilizó la formula
En esta práctica se utilizó el espectrofotómetro para C1*V1=C2*V2.
la determinación del espectro de 5 soluciones de 3. A partir de los cálculos se pasó a realizar las
sulfato de cobre (CuSO4) en 5ml con diferentes distintas diluciones de 5ml a partir de una
concentraciones, con una solución madre de 0.1 M solución madre de 0,1M.
para una absorbancia de 0,354 y un resultado de una 4. Al finalizar las diluciones se sellaron con el
solución final de 0.001 M con absorbancia de 0.008 vortex.
-3
x 10. Se cambió la longitud de onda a 670nm y la 5. Se configuró el espectrofotómetro con 670
temperatura a 25 grados. nm con una temperatura de 25° (ambiente).
PALABRAS CLAVE 6. En la cuneta se colocó una porción de
Buffer, pH, concentración, acido acético líquido para colocarla en el
espectrofotómetro.
METODOLOGIA
7. Se anotó los resultados en una hoja.

1. Se inició la práctica con una breve

introducción por parte de la docente sobre la
correcta utilización de los equipos del
laboratorio y la correcta selección de las
celdas.
2. Se realizó los distintos cálculos para
encontrar las concentraciones finales de las

1
RESULTADOS
 Resultados de labilidad térmica

Tubos Lugol / Incubación Sustrato

Feling

0 +/- 10 min a 0° Almidón

1 +/- 1 min a Almidón

mechero y
10 min a
37° Figura 2: Se tienen los tubos 0 en las pruebas
lugol y feling
2 +/- 10 min a 37° Almidón

3 +/- 10 min al Almidón

hielo

Tabla 1: Resultados de las pruebas lugol y feling

con sus diferentes medios de incubación y con su
sustrato determinado.

Figura 3: Se tienen los tubos 3 en las pruebas de

lugol y feling

Figura 1: Se puede observar los resultados de la

prueba de labilidad térmica para la prueba del
lugol. Están presentes los 4 tubos

2
 Figura 4: Se tienen los tubos 1 en las pruebas
lugol y feling

 Resultados del pH sobre la actividad

enzimática

Figura 6: El orden en el que se encuentran los

tubos son desde el lado derecho empieza el 1 y va
aumentando hasta llegar al 4

DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Figura 5: Se observó la precipitación de la encima
en un pH de 10
 Labilidad térmica
 Resultados de especificidad enzimática
La prueba de lugol permite reconocer la presencia
Tubos Sustrato Enzima Resultado de polisacáridos, el polisacárido con el que más se
trabaja esta prueba es el almidón. Si la coloración
1 Almidón Amilasa +
cambia un color marrón oscuro quiere decir que es
2 Almidón Sacarasa - positivo. En la tabla 1 se puede observar que todos
los resultados dieron positivo para lugol, mientras
3 Sacarosa Amilasa +
que en feling todos dieron negativo. En el tubo 0
4 Sacarosa Sacarasa - dio resultado positivo para la prueba lugol y
negativo para feling debido a que no se le agregó la
enzima de amilasa, en el tubo 1 se sometió a un
Tabla 2: Resultados de la especifidad de la enzima calentamiento por mechero primero y luego a baño
con un sustrato predeterminado proporcionado en serológico, la temperatura obtenida por el
el laboratorio. + es positivo es decir se produjo la calentamiento causó una desnaturalización de la
actividad enzimática y – quiere decir que no se enzima amilasa. Según Berg (2008):
produjo ninguna actividad enzimática
“La velocidad de las reacciones catalizadas por
enzimas se incrementa con la temperatura, la

3
variación de la temperatura es diferente de unas
enzimas a otras, sin embargo después de que pasan
la energía óptima las reacciones catalizadas por las
enzimas disminuyen bruscamente debido a que se
desnaturalizan las enzimas.”
Pg. 584
Por lo tanto no se observó ninguna reacción
catalizada por la enzima amilasa. En el tubo 2 en la
prueba de lugol tenía que dar negativo y en la de
feling tenía que dar positivo ya que la temperatura a
la que se sometió no es suficiente para que se
desnaturalice la enzima y tampoco se le agregó algo
para que diera negativo; sin embargo dio positivo y
negativo para la prueba de lugol y feling, lo más
seguro es que la concentración de la enzima amilasa
al estar diluida en agua destilada no fuera suficiente
para asegurar una reacción catalítica de la enzima
para poder degradar el almidón. Si la prueba de
feling dio positivo eso significa que la amilasa pudo
catalizar la hidrolisis de los enlaces 1-4 de las
glucosas del almidón. En el tubo 3, se sometió a
temperaturas bajas y después de sacarlo se le agregó
inmediatamente la amilasa, después de un tiempo
no se observó nada. La temperatura afectó la
actividad enzimática así como la temperatura sube y
acelera la reacción la temperatura baja la inhibe,
porque la energía cinética de las moléculas se
reduce haciendo que la enzima y el sustrato se
golpee muy lentamente y no se encaje el sustrato en
el sitio activo de la enzima.
 Influencia del pH sobre la actividad
enzimática
Una de los factores que afecta la actividad
enzimática es el pH, debido a que las proteínas
presentan un pH óptimo para el cual su actividad es
máxima; por debajo de ese pH la actividad
disminuye bruscamente. En la figura 5 se puede
observar la precipitación de la enzima amilasa en un
pH de diez, el cual está muy alejado de su pH
óptimo que es 6.9 por lo tanto podemos asumir que
la actividad enzimática es baja debido a la
diferencia de 3.1. Otra definición del porque se
precipita la enzima y la actividad enzimática es baja
es debido a el punto isoeléctrico. Según Guerra
(2014) el punto isoeléctrico es el pH en el cual la
proteína presenta su mínima solubilidad y por lo
tanto ocurre la precipitación de ella. La amilasa
tiene que tener un punto isoeléctrico cercano a 10
por lo tanto la enzima se precipita debido a su
mínima solubilidad
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
 Berg, J. (2008). Bioquímica. Sexta edición
Editorial Reverté. México D.C.
 Guerra, A. (2014). Determinación del punto
isoeléctrico Universidad pontificia
bolivariana. Medellín. Recuperado de:
http://www.scielo.org.co/pdf/prosp/v12n1/v12
n1a04.pdf
4
 Martin, A. (2018). Soluciones Buffer.
Universidad de Alcalá. Recuperado de:
https://www.docsity.com/es/ph-y-soluciones-
buffer-practicas-metodologia-y-