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I.-INTRODUCCION.
Los conocimientos que tenemos sobre el efecto de la concentración inicial del sustrato sobre
la actividad enzimática comenzaron a realizarse a finales del siglo XIX. Ya en 1882 se
introdujo el concepto del complejo enzima-sustrato como intermediario del proceso de
catálisis enzimática. En 1913, Leonor Michaels y Maud Menten, desarrollaron esta teoría y
propusieron una ecuación de velocidad que explica el comportamiento cinético de los
enzimas.
Michaels determinó la denominada constante de Michaels (Km) que establece la afinidad
entre una enzima y su sustrato. Predijo y explicó la velocidad de reacción, es decir la cantidad
de sustrato que reacciona con la enzima por unidad de tiempo, así como los factores que
estimulan o inhiben dicha velocidad de reacción. Demostró que las sucesivas adiciones de
sustrato al medio de la reacción provocan un abrupto incremento de la velocidad de reacción
hasta un cierto punto en el que la enzima se satura y la adición posterior de sustrato ya no
afecta a la velocidad; es el momento en el que se alcanza la velocidad máxima de reacción
(Max).
METODOS
a) Para la primera muestra a un tubo de ensayo se le agregó con una pipeta, 1 ml de Reactivo
de Trabajo para luego añadirle 10 ul de Glucosa con la ayuda de una micropipeta, se
incubó a 37°C por 10 minutos. Después del tiempo estimado se llevó al
Espectrofotómetro para observar su absorbancia.
c) Para la tercera muestra a un tubo de ensayo se le agregó con una pipeta, 1 ml de Reactivo
de Trabajo para luego añadirle 30 ul de Glucosa con la ayuda de una micropipeta, se
incubó a 37°C por 10 minutos. Después del tiempo estimado se llevó al
Espectrofotómetro para observar su absorbancia.
d) Para la cuarta muestra a un tubo de ensayo se le agregó con una pipeta, 1 ml de Reactivo
de Trabajo para luego añadirle 40 ul de Glucosa con la ayuda de una micropipeta, se
incubó a 37°C por 10 minutos. Después del tiempo estimado se llevó al
Espectrofotómetro para observar su absorbancia.
El filtro fue de 505 nm para la lectura del fotocolorímetro. Para el cálculo de la concentración
de la glucosa se realizó con la siguiente ecuación:
[𝐺] = 𝐹 ×𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎
Tubo 1 2 3 4
Reactivo de trabajo 1 1 1 1
(ml)
Glucosa (ml) 10 20 30 40
Incubar a 37° 10 10 10 10
Absorbancia 0,024 0,0033 0,036 0,082
Glucosa 9 12,375 28,5 31,875