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ESCUELA DE QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA.
SESIÓN # 2:
OBJETIVOS:
MARCO CONCEPTUAL:
Los seres vivos son sistemas termodinámicos alejados del equilibrio y para mantener esta distancia
se hace necesario invertir una gran cantidad de energía, que se usa en la generación y
sostenimiento de un sistema de estructuras capaz de exportar entropía al medio.
La energía necesaria para la vida puede obtenerse a partir de sustancias que los seres vivos
ingresan a sus células, donde sufren transformaciones degradativas y oxidativas con miras a
obtener energía (catabolismo) y transformaciones condensativas y reductivas para la síntesis de
componentes celulares (anabolismo). Estos procesos generan a su vez sustancias de “desecho”
que deben de expulsarse al medio, dando como resultado general un transporte de masa a través
de las células y una liberación de energía que es en parte utilizada por la célula y en parte hacia el
entorno en forma de calor.
MATERIALES:
REACTIVOS:
HCl 0,10 M.
Reactivo DNS.
Levadura seca y fresca (liofilizada).
Glucosa al 4%
Glicina (Sólida para la curva de calibración)
Ninhidrina 1,0%
Ninhidrina (Sólida para la curva de calibración)
NaOH 0,5 M.
Glicina 0,3%
Fenolftaleína.
Agua desionizada.
Agua destilada.
PROCEDIMIENTO:
Active 10 g de levadura seca y fresca en 200 mL de agua, llevándola al baño maría a 35°C por 20
minutos y luego a 45°C por 20 minutos. Agite la solución constantemente. ¿Qué observa?
Mezcle la suspensión resultante con 150 mL de glucosa al 4% y 150 mL de glicina al 0,3%. Airee
neumáticamente el medio haciendo burbujear los gases de salida a través de 50 mL de NaOH 0,50
M (ver esquema).
Muestree inmediatamente y cada 30 minutos por espacio de 120 minutos 2,0 mL del medio
alimenticio, centrifugue por dos minutos a 2000 r.p.m y diluya 1,0 mL de sobrenadante con 4,0 mL
de agua desionizada. Cuantifique glucosa y glicina.
Muestree inmediatamente y cada 30 minutos por espacio de 120 minutos 2,0 mL de solución de
NaOH y valórela con HCl 0,10 M.
Calibre los métodos analíticos para glucosa y glicina mientras se activa la levadura.
10 g Levadura activada 50 mL NaOH al 0,5%
+
150 mL Glucosa al 4%
+
150 mL Glicina al 0,3%
SUGERENCIAS:
Las mangueras de entrada al medio alimenticio y a la solución de NaOH deben de llegar hasta el
fondo del recipiente (Evite que sean demasiado largas y demasiado anchas, ya que esto dificulta la
difusibilidad de los gases hacia el Beaker recolector para su posterior titulación).
Se mezclan 250 µL de muestra con 50 µL de reactivo DNS; se calienta la mezcla en baño maría a
ebullición por 10 minutos y se le adicionan 2,0 mL de dHOH. Se lee Absorbancia a 540 nm.
Se mezclan 1900 µL de muestra con 10 µL de Ninhidrina al 1%, se lleva a baño maría en ebullición
por 10 minutos y se lee Absorbancia a 570 nm.
INFORME:
Grafique los datos de concentración de glucosa y glicina, así como la cantidad de CO2
liberado respecto del tiempo (elija la forma más conveniente para ello) y explique de
manera coherente los resultados, basándose en referencias bibliográficas.
Explique en términos energéticos ¿qué es lo que sucede en el proceso de activación?.
Mencione una ruta catabólica y una anabólica en la que intervenga la glicina. Explíquela.
Mencione una ruta catabólica y una anabólica en la que intervenga la glucosa. Explíquela.
¿A qué velocidad se consumen glucosa y glicina por gramo de células?
¿Qué porcentaje de la glucosa tomada por las levaduras se ha transformado en CO2?
¿En qué reacciones químicas se basan los métodos de cuantificación usados en la
práctica? Explique claramente.
Redacte al menos tres (3) conclusiones de la práctica.
REFERENCIAS BIBLIIOGRÁFICAS: