PRACTICA N° 4

PREPARACION DE MEDIOS PARA CULTIVO CELULAR

INTRODUCCION

Los medios de cultivos celulares contienen todos los aminoácidos , vitaminas ,

cofactores , coenziamas, enzimas , sales , iones , indicadores de PH . Todo lo
necesario para que la célula pueda dividirse en vitro .

Existen diferentes medios de cultivos los cuales se seleccionan dependiendo del

tipo de muestra o tipo de célula a cultivar y lograr que estos respondan
adecuadamente a un crecimiento celular .
OBJETIVOS :
 Describir el fundamento teórico de las técnicas de los cultivos celulares, las
ventajas y desventajas de esta técnica, los tipos de cultivos de células que
existen, y el entorno más adecuado para su óptimo crecimiento.

 Conocer el equipamiento y las normas de trabajo necesarias y obligatorias

en un laboratorio de cultivos celulares

¿QUE ES UN CULTIVO CELULAR ?

 Es un conjunto de técnicas que permiten el mantenimiento de las células
'in vitro', manteniendo al máximo sus propiedades fisiológicas, bioquímicas
y genéticas. Se distinguen cuatro tipos de cultivo celular .

MEDIOS DE CULTIVO:
El medio de cultivo se encuentra disponible en tres formas en los proveedores
comerciales:

- En polvo: tiene que ser preparado y esterilizado por el investigador.

- Concentrado: debe ser diluido por el investigador.
- Solución de trabajo: para ser utilizado directamente sin más manipulación.
MEDIOS DE CULTIVO CELULAR MÁS COMUNES :

Los medios de cultivo más comunes son :

 MEDIO MCCOY ´ S 5A MODIFIED

El 5A de McCoy (modificado) es un medio de uso general que apoya la

propagación de muchos tipos de células primarias, líneas celulares establecidas y
explantes de tejidos de biopsia. Este medio apoyará el crecimiento de células
primarias de mamíferos derivadas de médula ósea, piel, bazo, riñón .

Este 5A de McCoy se modifica de la siguiente manera:

Con Sin
• alta glucosa • Piruvato de sodio
• L-glutamina • HEPES
• Bacto-peptona
• Fenol rojo

 MEDIO RPMI 1640

Es un medio celular usado para cultivos celulares. Tradicionalmente, es usado

para el cultivo de células humanas o de tejidos aislados como el caso de las
arterias mamarias humanas.
Contiene una gran cantidad de fosfatos y está diseñado para ser utilizado en una
atmósfera al 5% de dióxido de carbono.

 MEDIO PB-MAX KARIOTYPING MEDIUM :

El medio de cariotipado Gibco® PB-MAX ™ es un medio completamente

suplementado desarrollado para el cultivo a corto plazo de linfocitos de sangre
periférica para estudios citogenéticos y procedimientos de diagnóstico in vitro .

Características del medio de cariotipado Gibco® PB-MAX ™:

• Formato listo para usar

• Pruebas de calidad y rendimiento
• Formulación clásica Formato
  MEDIO Tc199 :

Es una mezcla de sales enriquecida con aminoácidos, vitaminas y otros

componentes esenciales para el crecimiento celular , se destina al cultivo de
células humanas y de otros animales. Este medio es distribuido deshidratado, en
polvo o como líquido. La presentación en polvo tiene la ventaja de mantenerse
estable por más de 24 meses cuando conservado bien cerrado y refrigerado es
extremadamente higroscópico y debe ser protegido del medio ambiente. No se
recomiendan preparaciones de concentraciones mayores a las especificadas,
debido a la gran posibilidad de formación de precipitados .
 MEDIO Ham F10 o Ham F12:

Utilizado con más frecuencia para: Cultivo de piel. , Cultivo inicial de líquido
amniótico (células fetales) , Cultivo de tumores (células neoplásicas)

 MEDIO RPMI 1640 :

Utilizado para: Sangre periférica (Linfocitos) , Cultivo de tumores (células

neoplásicas)

 MEDIO DE CULTIVO CHANG B + CHANG C:

Utilizado para: Cultivo de vellosidades coriales. , Cultivo de liquido amniótico

(células fetales) Cultivo de tumores (células neoplásicas)

 MEDIO AMNIOMAX:

Utilizado para: Cultivo de vellosidades coriales

CUESTIONARIO

1. ¿Qué otros inhibidores mitóticos se pueden utilizar en el cultivo de

linfocitos? .

 Se pueden utilizar la colcemida o la colxicina .

2. ¿Qué otros estimulantes mitogénicos se pueden utilizar en el cultivo

de linfocitos? .
 Fitohemaglutinina (PHA), promueve la división celular de linfocitos T
a través de provocar reacciones antígeno –anticuerpo , esta capacidad
se aprovecha para obtener muchos linfocitos .
 Concanavalina A : estimula también preferentemente linfocitos T.
 Pokeweed mitogen (PWM) : se usa para estimular preferentemente
linfocitos B

3. provocar reacciones
antígeno – anticuerpo
(ag-ac). Esta
capacidad que
aprovechamos
4. para obtener
muchos linfocitos. Es
típica de legumbres
la PHA
5. ¿Cómo actúan específicamente los estimulantes mitogénicos? .

 Actúan estimulando la GTPasa Ras, que inicia la cascada de MAP

quinasas. Estas activan la proteína reguladora génica Myc, que aumenta.

6. ¿Qué otras soluciones hipotónicas se pueden utilizar en el cultivo de

células para el estudio cromosómico?

 También se pueden utilizar soluciones como el KCl a 37ºC o NaCl al 0,9%.

BIBLIOGRAFIA :

 https://www.studocu.com/es/document/universitat-autonoma-de-
barcelona/citogenetica/apuntes/tema-8-generalidades-protocolos/4872364/view .

 http://www.labome.es/method/Cell-Culture-Media-A-Review.html .

 https://www.formacionegs.com/archivos/1325673989.pdf