FACULTAD DE ODONTOLOGÍA SEGUNDO SEMESTRE BIOQUÍMICA

LABORATORIO 4. DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE GLUCOSA,

TRIGLICÉRIDOS Y COLESTEROL EN SANGRE

OBJETIVOS

1. Dar al estudiante un concepto claro y conciso sobre la importancia en salud de

los niveles de Glucosa, triglicéridos y colesterol en circulación.

2. Conocer las reacciones bioquímicas in vitro que permiten determinar

cuantitativamente los niveles de glucosa, triglicéridos y colesterol.

MARCO TEÓRICO

La glucosa es una molécula no ionizada de 6 átomos de carbono, por tanto es una

hexosa: es el monosacárido más abundante en la naturaleza. Como en su
metabolismo no libera iones de hidrogeno no provoca acidosis, aun con
concentraciones en sangre muy elevadas.

Es el principal combustible del cerebro que consume alrededor de 140 g de glucosa

al día. Si este nivel desciende como ocurre en casos de ayunos prolongados, se
utiliza como fuente de energía los cuerpos cetónicos procedentes de la oxidación
de los ácidos grasos en el hígado.

La glucosa es el hidrato de carbono más elemental y esencial para la vida, es el

componente inicial o el producto de las principales rutas del metabolismo de
CHOS. En los vegetales se produce a través de la fotosíntesis y se almacena como
almidón en cereales y hortalizas. La glucosa se transforma en fructosa en las frutas
y la miel. Cuando estos Carbohidratos entran en nuestro organismo se transforman
en glucosa y así son utilizados como fuente de energía. La glucosa en las células es
transformada en H2O y CO2 por una ruta catabólica que se conoce como glucólisis.
Este es el principal mecanismo que tienen los animales y algunas bacterias para la
obtención de energía (ATP). Cuando los niveles de glucosa en circulación son bajos
(hipoglicemia) se utiliza como fuente de energía alterna la oxidación de lípidos e
incluso la oxidación de aminoácidos por degradación de proteínas intracelulares.
Esto ocasiona la hidrólisis de triglicéridos almacenados en el tejido adiposo y la
liberación de ácidos grasos y glicerol a circulación (lipólisis). Cuando los niveles de
glucosa son elevados (hiperglicemia), la glucosa es almacenada como glucógeno en
los tejidos, se produce ATP y se sintetizan ácidos grasos que se almacenan como
triglicéridos en el tejido adiposos (lipogénesis).

Los niveles de glucosa son un indicador de la homeostasis metabólica de un

individuo y se asocia a enfermedades como la diabetes. En la práctica odontológica
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es indispensable conocer los valores de glucosa, triglicéridos y colesterol que se

asocian con salud y enfermedad.

Niveles de glucosa:

En una persona no diabética, los niveles de glicemia en ayunas se encuentran entre

70-110 mg/dL y dos horas después de ingerir algún alimentos es no mayor a 140
mg/dL. Los pacientes diabéticos mantienen niveles de glicemia en ayunas y dos
horas después de los alimentos más alta que los valores normales porque hay una
alteración (deficiencia relativa o absoluta de la producción y/o acción) de la
insulina. La insulina es una hormona que junta con otras como Glucagon,
Catecolaminas, Cortisol, Hormona de Crecimiento se encargan de regular los
niveles de glucosa en la sangre y si se produce algún defecto en una de ellas va a
desencadenar un aumento en la glicemia, como ocurre en las diabetes. Para
determinar si un paciente tiene diabetes latente o diabetes, los profesionales de la
salud realizan una prueba de glucosa en plasma en ayunas (GPA) o una prueba
oral de tolerancia a la glucosa (POTG). Con cualquiera de esas dos pruebas, puede
diagnosticarse la diabetes latente o la diabetes.

La American Diabetes Association recomienda la prueba de GPA porque es más

económica, rápida y fácil de realizar. Si en la prueba de GPA se detecta un nivel de
glucosa en la sangre en ayunas entre 100 y 125 mg/dl, significa que la persona
tiene una diabetes latente. Una persona con un nivel de glucosa en la sangre en
ayunas de 126 mg/dL o superior padece diabetes.

Recomendación de la Asociación Americana del Corazón; La diabetes es uno de

los principales factores de riesgo para los ataques al cerebro y la enfermedad
coronaria (incluyendo los ataques al corazón). Es muy importante controlar el
peso y el colesterol en sangre con una dieta baja en grasa saturada y en colesterol
y con ejercicio habitual.

Los triglicéridos son una forma de grasa que puede venir de los alimentos o fabricarse en
el organismo y son utilizados por el cuerpo como fuente de energía. Los triglicéridos son
un tipo de moléculas compuestas fundamentalmente de grasas. Proceden de dos sitios: la
absorción intestinal de las grasas que ingerimos (triglicéridos exógenos) o la síntesis en el
hígado a partir de ácidos grasos retirados de la circulación o procedentes de la
transformación de los hidratos de carbono. Su función es transportar y almacenar las
grasas en el organismo. Los triglicéridos son el principal tipo de grasa transportado por el
organismo. Recibe el nombre de su estructura química. Son un componente normal en el
torrente circulatorio. Luego de comer, el organismo digiere las grasas de los alimentos y
libera triglicéridos a la sangre; son transportados a todo el organismo para dar energía o
para ser almacenados como grasa. El hígado también produce triglicéridos y cambia
algunos a colesterol. El hígado puede cambiar cualquier fuente de exceso de calorías en
triglicéridos.
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El colesterol es una parte de las membranas celulares normales y cumple funciones

necesarias en el cuerpo. El colesterol se deposita en las paredes arteriales en forma de
placas arterioescleróticas. Estos depósitos, si son lo bastante grandes, pueden obstruir el
flujo sanguíneo. La hipercolesterolemia puede ser debida a una dieta alta en colesterol y
en grasas saturadas así como a hipotiroidismo, hepatopatía obstructiva, nefritis, Porfirio y
disproteinemia. También, la hipercolesterolemia es probablemente más severa en las
personas genéticamente susceptibles.

Los niveles de colesterol en sangre por encima de 200 a 230 mg/dl se asocian con un riesgo
elevado de presentar cardiopatía isquémica (CI) prematura. Por cada uno por ciento de
disminución del colesterol sanguíneo, cabe esperar un dos por ciento de disminución en
las posibilidades de CI.

Los triglicéridos son una forma de grasa producida por el cuerpo a partir de la conversión
de cualquier forma de calorías en exceso a grasa. Se cree que los hidratos de carbono
simples son el principal sustrato de los triglicéridos. El alcohol eleva también los niveles
de los mismos.

Los triglicéridos se determinan después de un período de ayuno de 12 a 14 horas.

La hipertrigliceridemia se ha asociado a obesidad, diabetes mellitus incontrolada, ingesta

excesiva de alcohol, insuficiencia renal, lupus eritematoso sistémico, lipodistrofia,
enfermedad de depósito de glucógeno, y uso de diversos medicamentos, como estrógenos,
anticonceptivos orales, beta-bloqueantes e hidroclorotiacida.

Cuando la anomalía lipídica plasmática predominante es la elevación de los triglicéridos,

se encuentran elevadas las lipoproteínas de muy baja densidad y el colesterol total sólo
ligera o moderadamente aumentado.

La asociación de triglicéridos en sangre elevados con cardiopatía isquémica no es tan

directa como en el caso del colesterol, pero los niveles elevados de triglicéridos en ayunas
(> 200 mg/dl) parecen ser un factor de riesgo de enfermedades del corazon, cerebro
vasculares y diabetes especialmente si existen otros factores de riesgo concomitantes.

En los niveles superiores a 500 mg/dl, debe realizarse un intento de reducir los
triglicéridos para evitar la aparición de pancreatitis incluso aunque no existan factores de
riesgo cardíaco. Según la American Heart Association (2004), los niveles de triglicéridos
en sangre son:

De menos de 150 mg/dL= Normal

De 150 a 199 mg/dL = Limite alto
De 200 a 499 mg/dL =Alto
De 500 mg/dL o más = muy alto

Las lipoproteínas de alta densidad (HDL) han mostrado tener una relación inversa con la
cardiopatía isquémica. Se determinan habitualmente en función de su contenido de
colesterol, es decir, HDL colesterol. Se las denomina a veces como la forma beneficiosa o
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protector del colesterol. Los factores que pueden causar un aumento de HDL colesterol
son una elevación del aclaramiento de VLDL, el ejercicio, una moderada ingesta de
alcohol, el tratamiento con insulina de la diabetes y los estrógenos.

Los factores que se asocian a una reducción del HDL colesterol son la inanición, obesidad,
tabaquismo, diabetes mellitus mal controlada, insuficiencia renal crónica, hipotiroidismo,
hepatopatía y uso de progesterona. Los niveles elevados de triglicéridos se asocian
también a niveles bajos de HDL colesterol.

La relación de colesterol total con HDL colesterol puede utilizarse para ayudar a
determinar el factor de riesgo.

Se ha demostrado que un aumento de los niveles plasmáticos de las lipoproteínas de baja

densidad (LDL) se asocia a un aumento de la aterosclerosis. Existen evidencias francas de
que el colesterol de origen dietético es transferido finalmente a otras clases de
lipoproteínas, especialmente a LDL, y contribuye de esta forma al colesterol plasmático
total. Los factores que pueden aumentar el LDL son una dieta rica en grasas saturadas y
en colesterol así como la obesidad. La predisposición genética puede jugar también un
papel principal en la elevación de LDL.

La disminución ligera de HDL colesterol por dietas altas en carbohidratos y bajas en

grasas sugieren que estas últimas no deben reducirse por debajo del 30% de las
kilocalorías totales. Según la American Heart Association (2004), los niveles de colesterol
total en sangre son:

De menos de 200 mg/dL= Deseable, menor riesgo

De 200 a 239 mg/dL = Limite alto, mayor riesgo
De 240 o más mg/dL = Colesterol alto, doble riesgo

MATERIALES Y EQUIPOS

Nota: Un estudiante de cada grupo debe ir al laboratorio de bioquímica el mismo día de

la práctica a las 7 a.m para la toma de una muestra de sangre en ayunas. El grupo que no
recolecte la muestra no puede realizar la práctica en la tarde.

Micropipetas 10 tubos de ensayo

Espectrofotómetro Pipeta de 5
celda Pipeta de 2 ml
Cronómetro Pipeta de 1 ml
Centrífuga micropipeta de 100 ul
Tubo para vacutainer sin Puntas para micropipeta
anticoagulante (tapa roja), Pipeteador
Aguja para vacutainer Kit de glucosa, trigliceridos y colesterol.
Camisa para vacutainer,
Torniquete,
Alcohol antiséptico
Algodón
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FUNDAMENTO TEÓRICO EXPERIMENTAL PARA GLUCOSA

Glucosa oxidasa
1. Glucosa ------------------ ácido gluconico + H2O2
peroxidasa
2. 2H2O2 ------------------ 2H2O + O2

3. O2 + cromógeno (4 aminoptirina/fenol) --------- cromógeno oxidado

Color rojo (quinoneimina)

Composición de reactivo en uso

Buffer fosfato. pH 7.4
Fenol
4-aminoptirina
Glucosa oxidasa
Peroxidasa
Estándar de glucosa: 100mg/dL o 5.56 mmol/L

MUESTRA
Suero de paciente en ayunas

METODOLOGÍA

Prepare las siguientes soluciones según la tabla

Tubo BLANCO ESTANDAR MUESTRA

Reactivo
Reactivo en uso 1000 µL 1000 µL 1000 µL
glucosa
Agua destilada 10 µL - -
Estándar glucosa - 10 µL -
Muestra - - 10 µL
Datos
Transmitancia
Absorbancia
concentración - -

- Agitar cada uno de los tubos

- Incubar cada tubo 10 min a 37 °C.
- Calibre el espectofotometro a 500 nm y 100% de transmitancia con el blanco
- leer transmitancia del estandar y la muestra.
- Realice los cálculos

Concentración de glucosa= (Absorbancia muestra/Absorbancia estándar) x n

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n= 100 mg/dL o 5.56 mmol/L

- Determine el nível de glucosa en el paciente

- Diagnostico

FUNDAMENTO TEÓRICO EXPERIMENTAL PARA TRIGLICERIDOS (método

ELITECH)
Lipoproteina lipasa
1. Triglicéridos + H2O ------------------ glicerol + ácidos grasos
Glicerol cinasa
2. glicerol + ATP ------------------ glicerol 3 fosfato + ADP
glicerol 3 fosfato oxidasa
3. glicerol 3 fosfato + O2 ------------------------ dihidroxiacetona P + H2O2
peroxidasa
4. 2H2O2 ------------------ 2H2O + O2

5. O2 + cromógeno --------- cromógeno oxidado de coloración roja

COMPOSICIÓN DEL REACTIVO

Reactivo:
Acido 3, 5-dicloro-2-hidroxibencensulfónico/Tensoactivo
Tampón/Enzimas/ATP/4-aminofenazona/Ferricianuro de potasio

Patrón o estandar
Glicerol (equivalente a 200 mg/dL o 2.26 mmoles/L de trioleina).

MUESTRA
Suero de paciente en ayunas

METODOLOGÍA
1. Prepare las siguientes soluciones según la tabla

Tubo BLANCO ESTANDAR MUESTRA

Reactivo
Reactivo en uso 1000 µL 1000 µL 1000 µL
triglicéridos
Agua destilada 10 µL - -
Estándar glicerol - 10 µL -
Muestra - - 10 µL
Datos
Transmitancia
Absorbancia
concentración - -

2. Mezclar y, tras una incubación de 7 minutos a 37°C

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3. Calibre el espectofotometro a 500 nm y 100% de transmitancia con el blanco

4. leer transmitancia del estándar y la muestra.
5. Realice los cálculos
6. Determine el nível de trigliceridos en el paciente
7. Diagnostico

CÁLCULO

(D.O. muestra / D.O. estándar) x n n = 200 mg/dL, 1 g/L, 2.26 mmol/L

FUNDAMENTO TEORICO EXPERIMENTAL PARA COLESTEROL (Método CHOD-

PAP colesterol liquicolor)

El colesterol se determina después de la hidrólisis enzimática y su oxidación. El indicador

es la quinoneimina formada por el peróxido de hidrogeno y 4- aminoantipirina en
presencia de fenol y peroxidasa

Reacciones
CHE
1. Ester de colesterol + H2O ------- colesterol + AGL

CHO
2. Colesterol + O2 ----- colestene-3-ona + H2O2
POD
3. 2H2O2 ------------------ 2H2O + O2

4. O2 + cromógeno --------- cromógeno oxidado de coloración roja

Reactivos

RGT: contiene los siguientes compuestos

Buffer fosfato (pH 6.5)
4- aminoantipirina
Fenol
Peroxidasa (POD)
Colesterolesterasa (CHE)
Colesteroloxidasa (CHO)
Estandar: contiene colesterol [200 mg/ml] o [5.17 mM]

MUESTRA
Suero de paciente en ayunas

Metodología
Preparar 3 tubos de ensayo según el esquema de la tabla:
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Tubo BLANCO ESTANDAR MUESTRA

Reactivo
Reactivo en uso 1000 µL 1000 µL 1000 µL
colesterol
Agua destilada 10 µL - -
Estándar colesterol - 10 µL -
Muestra - - 10 µL
Datos
Transmitancia
Absorbancia
concentración - -

- Mezclar los reactivos e incubar por 5 minutos a 37 °C

- Calibre el espectofotometro a 500 nm y 100% de transmitancia con el blanco
- leer transmitancia del estándar y la muestra
- Realice los cálculos

Cálculos

C= A muestra X 200 [mg/ml]

A estandar

C= A muestra X 5.17 [mM]

A estandar

- Determine el nivel de colesterol en el paciente

- Diagnostico

CUESTIONARIO

1. ¿Por qué es útil cuantificar glucosa, triglicéridos y colesterol?

2. Explique metabólicamente por que los pacientes con diabetes presentan altos niveles
de triglicéridos en circulación?
3. Consulta con tus profesores de clínicas odontológicas que cuidados hay que tener
con pacientes que presentan altos niveles de glucosa, triglicéridos y colesterol?
4. Consulte que enfermedad de la cavidad oral se relaciona con diabetes?
5. Consulte que enfermedad de la cavidad oral está relacionada con riesgo
cardiovascular?
6. Consulte porque enfermedades de la cavidad oral se relacionan con diabetes y riesgo
cardiovascular?

BIBLIOGRAFÍA

http://www.diabetes.org/espanol/todo-sobre-la-diabetes.jsp
http://www.americanheart.org/presenter.jhtml?identifier=3015971