VIRUS CLASE VI

VIRUS ssRNA (+) CON INTERMEDIARIO DE DNA – RETROVIRUS

Este tipo de virus presentan un genoma de RNA de cadena

sencilla que se replica en la célula huésped mediante
transcripción reversa. El DNA de doble cadena obtenido se
integra en el genoma celular.

Este grupo contiene a las familias:

- Metaviridae
- Pseudoviridae
- Retroviridae

Familia Retroviridae

Los retrovirus afectan tanto a mamíferos como a aves y otros vertebrados. Producen enfermedades de
inmunodeficiencia, así como leucemia y tumores.

Incluye especies con capacidad oncogénica, asociadas desórdenes del sistema inmune y que están relacionadas con
síndromes degenerativos y neurológicos.

Virión

 Con envoltura
 80 – 110 nm de diámetro
 Genoma: ssRNA (+) y 9-10 Kb
 Contiene la enzima transcriptasa reversa

Géneros

- Apharetrovirus (Avian leucosis virus)

- Betaretrovirus (Mouse Mammary Tumour Virus)
- Gammaretrovirus (Murine leukemia virus)
- Deltaretrovirus (Bovine Leukemia, Human T Cell Leukemia, HTLV)
- Epsilonretrovirus (Walleye Dermal Sarcoma)
- Lentivirus (HIV, Visna, EIAV)
- Spumavirus (Simian Foamy Virus)

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NDistincion morfológica

Esta se realiza según la posición del centro vírico.

Partículas tipo A: son solo intracelulares y no son infectivas.

Precursoras de retrovirus tipo B.

Partículas tipo B: virión maduro. La nucleocápside (ácido nucléico +

cápside) se forma en el citoplasma y está descentrada. Adquiere la
envoltura al madurar.

Partículas tipo C: corresponden a la morfología de la mayoría de virus

oncogénicos. Nucleocápside centrado.

Partículas tipo D: morfología similar a tipo C. Nucleocápside no

isométrica. Corresponde a la morfología del género Lentivirus.

Nota: también nos referimos a la nucelocápside como core.

Estructura de los viriones de retrovirus

-Dos copias de RNAfavorece la variabilidad ya que pueden darse fenómenos de recombinación.

- Proteínas internas estructurales
- Enzimas
-Proteínas exteriores en envoltura
Contienen alrededor de 2000 proteínas de nucleocápside que se unen a las dos hebras de ssRNA(+)
Las ribonucleoproteínas se empaquetan a partir de proteína capsídica para formar el core (estructura que engloba la
cápside y el ácido nucleico que contiene con sus proteínas asociadas), que puede tener diferentes formas.
Diámetro de 80 – 120 nm

Organización del genoma

 3 genes: Gag, pol y env

5’ Cap

3’ secuencia poliA

Secuencias repetidas (R)

Secuencias únicas (U) en ambos extremos

El genoma se retrotranscribe y se integra en el genoma. Tras la transcripción como un único mRNA, las proteínas
necesarias para el ciclo vital del virus se obtienen mediante proteólisis.

- Gag  MA (matriz), CA (cápside), NC (nucleocápside)

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 - Pol  PR (proteasa), RT (Trasncriptasa reversa Actividad DNApol y RNAsa H), IN (Integrasa)
- Env  Codifica para las proteínas de la envoltura. SU (Glicoproteína de superficie), TM (Proteína
Transmembrana)

Los retrovirus presentan regiones de apareamiento entre las dos copias de RNA.

Moléculas de tRNA actúan como cebador para el inicio de la transcripción reversa. Este
primer se une en el Primer Binding Site (PBS) en el extremo 5’ de cada molécula de
RNA.

Organización genómica del HIV

El genoma del HIV tiene un tamaño de 9.3 Kb y las características estructurales del genoma del virus son las mismas
que en el resto de retrovirus.

El genoma de HIV se diferencia del resto de Lentivirus por la presencia del gen V-onc que codifican para proteínas
auxiliares relacionadas con la oncogénesis (Tat, Rev, Nef, Vif, Vpr y Vpu).

La integración del genoma del HIV se da a través de un intermediario de

dsDNA:

ssRNAdsDNA (RT)mRNAPoliproteína

Proteínas HIV

Gag p17 (presente en matriz que rodea la cápside)

p24 (conforma la cápside del virus)

p7 (proteína de la nucleocápside. Fuertemente unida a la

cadena de RNA. Para esta unión presenta estructuras en forma
de dedos de Zinc)

Virión de VIH-1

Proteasa

Dímero de 10KDa con actividad aspartil proteasa. Se encarga de la proteólisis de la

poliproteínas Gag en sus respectivas proteínas de cápside, nucleocápside y matriz.

La mayoría de tratamientos anti-HIV tratan de inhibir la proteasa. Actualmente se están

intentando desarrollar fármacos cuya diana sea la integrasa.

En la imagen se aprecia la estructura de la proteasa con un sustrato peptídico en negro

y los residuos aspartato del sitio activo en rojo.

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Transcriptasa reversa

Actividad DNA polimerasa

o requiere de un primer con terminación 3’- OH

o RNA o DNA como diana, al retrotranscribir ssRNA (+) a ssDNA (-) como primer paso, y al replicar la hebra
complementaria del ssDNA(-).
o Requiere Mg2+ como cofactor ( o Mn2+)
o No actividad proof- Reading  Alta tasa de error (10-4)  Elevada tasa de mutación Fuente de enorme
variabilidad.

Actividad RNAsa H

 localizada en un dominio diferente

 hidroliza los enlaces 3’-O-P del dúplex RNA/DNA

Integrasa

Se encarga de la integración del dsDNA retroviral en el genoma del hospedador.

Presenta actividad endonucleasa.

Está siendo diana de nuevas drogas antiretrovirales.

Proteínas Env

Guardan importancia por ser las que interaccionan con los

receptores de membrana de la célula huésped.

> gp41 (proteína transmembrana, TM)  Involucrada en la

fusión de la membrana y la penetración del virus en la
célula.
> Gp120 (proteínas de superficie, SU)  Responsable de la
unión al receptor de la célula huésped. Presenta alta
variabilidad Dificultad de crear vacunas.

Proteínas auxiliares codificadas por Lentivirus (codificadas por V-oncogen)

Tat

 Estimuladora de la transcripción
 Permite al complejo de la traducción sintetizar un RNA completo
 Unión de Tat en la región Tar cercana a la subunidad ciclina T de Tak dirige la
estimulación de la fosforilación de la subunidad mayor de la RNA polimerasa
II  Esto le da competencia para llevar a cabo la transcripción.

Rev

 reconoce una secuencia específica dentro de un elemento estructural del gen env llamado Rev- responsive
element (RRE)
 activa la exportación de cualquier RNA que contenga secuencias RRE (transcitos que no han sufrido splicing
o transcritos que han sufrido un solo splicing ambos conteniendo la secuencia RRE)
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  Las proteínas accesorias Vif, Vpr y Vpu se expresan tardíamente en la infección a partir de mRNA que han
sufrido un único splicing y cuya exportación al nucleo es Rev dependiente.

Nef

 Necesaria para mantener la carga vírica elevada

 Es clave para la progresión de la infección a la manifestación del SIDA
 Regula la patogenicidad del virusHIV y SIV con delección de Nef son mucho menos
patogénicos in vivo.
 Nef regula negativamente la expresión de CD4 potenciando la endocitosis de este
receptor de membrana Crea población de células susceptibles de infección.
 Disminuye el umbral necesario para activar a linfocitos T CD4+ modulando rutas de señalización.

Vif (Viral infectivity factor)

 Se acumula en el citoplasma y en la membrana plasmática de células infectadas

 Virus mutantes que carecen del gen VifMenos infecciosos y más defectuosos
 Los viriones Vif-defectuosos entran en las células, inician la retrotranscripción, pero no producen full-length
dsDNA
 Vif inhibe la acción antiviral de la citidina deaminasa con el fin de impedir que origine hipermutaciones en el
cDNA y por tanto favorece la replicación viral
 Estimula el ensamblaje y la maduración del virión

CICLO DE REPLICACIÓN DE RETROVIRUS

1. Adhesión del virión a un receptor específico de la superficie celular

2. Penetración del core del virión dentro de la célula

3. Transcripción reversa dentro del core para copiar RNA en DNA

4. Tránsito del DNA al núcleo

5. Integración del DNA viral en lugares aleatorios dentro del DNA célula para formar el provirus

6. Síntesis del RNA viral por la RNA polimerasaII celular usando el provirus integrado como molde

7. Procesado de los transcritos al genoma y mRNAs

8. Síntesis de proteínas del virión

9. Ensamblado y salida de los viriones

10. Procesado proteolítico de las proteínas de la cápside

Proceso de adhesión del HIV

La proteína gp120 tiene un dominio específico que se une al receptor de membrana CD4 presente en las células
susceptibles.

Tras la unión a CD4, la gp120 lleva a cabo un cambio conformacional y permite la unión a un subgrupo de
quimiocinas co-receptores CCr5 y CXCr4. El empleo por parte del virus de uno u otro determina el tropismo viral.

El HIV afecta principalmente a linfocitos T y células macrófagas, así como sus derivadas y predecesoras. Esto es,
aquellas que presentan los receptores a los que las proteínas de la envoltura del virus pueden unirse.

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  CCr5 es el mayor co-receptor de la serie macrophage-tropic strain
 CXCr4 es el mayor co-receptor de la serie T-cell tropic strain

Es imprescindible que la proteína gp120 del virus se una simultáneamente a CD4 y alguno de los dos correceptores
para que se dé la entrada del material genético en la célula y ésta quede infectada.

Algunos individuos presentan variantes genéticamente defectuosas del correspondiente receptor CCR5 que no son
reconocidas por gp120 y hace que estos sujetos no se infecten aunque se expongan al virus. Se ha descrito el caso de
un paciente infectado por VIH que desarrolló una leucemia y recibió un trasplante alogénico de células madre en la
médula ósea de un donante con esta alteración genética del correceptor. Al no poder infectar el VIH a las nuevas
células hematológicas, las cargas virales se hicieron indetectables y el paciente se ha considerado como curado de la
infección por VIH. Este sujeto es conocido como “el paciente de Berlín”.

Transcripción reversa del HIV

1)La síntesis de la hebra negativa comienza

próxima al extremo 5’ empleando un tRNA
específico del hospedador como primer.

2) La síntesis se lleva hasta el final de 5’ a través

de la región única U5 y la región r, formándose la
hebra negativa de DNA.

3) La porción de RNA del híbrido RNA-DNA

correspondiente a U5 y r se degrada por la
RNAsa H (-)ssDNA.

4) Esto permite la hibridación del ssDNA a la

región r (regiones r son iguales) del extremo 3’
en el mismo o en la segunda copia del genoma
de RNA.

5) La hebra (-)DNA termina en el PBS (primer

binding site). Se produce una difestion parcial de
la hebra de RNA. Cuando la
elongación de la hebra (-) pasa por la porción
polpurina (PPT- polypurine tract), el RNA de esta
región no es digerido por RNAsa H y sirve como
primer para la síntesis de la hebra (+).

6) Inicio de síntesis de (+)DNA y elongación a 6

partir de sitios de (+)RNA no degradados por
RNAsa H.
 7) La síntesis de la hebra (+) continua hasta la
región U5 de la hebra (-) y concluye tras la copia de
los primeros 18 nt del iniciador tRNA, formando la
hebra positiva. Desplazamiento de las hebras en
síntesis. El primer tRNA se elimina por la RNAsa H.

8) El PBS así expuesto anilla con la secuencia pBS

del extremo 3’ de la hebra (-)

Se produce un DNA circular con solapamiento de

extremos 5’.

9) Desplazamiento de las hebras y/o reparación y

ligación. Al final de la retrotranscripción se obtiene
una molécula lineal dsDNA con terminaciones
largas repetidas (LTRs).

Recombinación durante la retrotranscripción

La recombinación se da entre las dos hebras de ssRNA (+) presentes en la misma cápside.

Dos posibles modelos de recombinación postulados:

Nota: no quebrarse la cabeza con el esquema, ni memorizar. Quedarse con la idea de cada modelo.

Este modelo postula la recombinación durante la

sítnesis de la hebra negativa. La síntesis de esta
hebra comienza a partir de un ssRNA(+) y
cambia a la otra copia de ssRNA(+) del genoma.

El modelo de desplazamiento de hebra postula

que la recombinación ocurre durante la síntesis
de la hebra positiva de DNA.

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Integración del DNA proviral

La integración del retrotranscrito (dsDNA) en el genoma del hospedador está catalizada por la enzima integrasa.

 El DNA viral se corta en 2bp a cada extremo y un fragmento (de 4-6 bp) del hospedador se duplica en los
flancos del DNA viral
 Los extremos del provirus de todos los retrovirus comprenden el mismo dinucleótido: 5’-TG----CA-3’
 La integrasa requiere proliferación celular El cDNA del VIH permanece en el citoplasma o núcleo hasta que
se active la mitosis celular.

Los dos extremos del DNA viral son reconocidos, cortados y

unidos covalentemente al DNA del hospedador en posiciones
aleatorias en cortes generados también por la integrasa

El proceso se produce mediante un corte endonucleotídico en

el genoma huésped, la eliminación de 2 nt de este y la
formación de nuevos extremos 3’ terminales.

Ensamblaje viral y salida de la célula

 La asociación de las proteínas Gag con la membrana plasmática y con los tRNA inicia el
ensamblaje en la superficie interna de la membrana plasmática Salida por gemación.
 El virus es inmaduro y no infectivo al salir de la célula.
 La proteólisis de las proteínas Gag y Pol por la proteasa viral da lugar a un virus infectivo.
 La replicación y la gemación de los retrovirus no implica necesariamente la destrucción de la
célula.
 El VIH se puede transmitir de una célula a otra mediante la producción de células gigantes
multinucleadas o sincitios.
 Los sincitios son frágiles y su formación estimula la actividad citolítica del virus.

Resumen patogenia viral

 El VIH infecta principalmente a los linfocitos T CD4 y células de la derivadas o precursoras de

macrófagos o estos en sí (Ej:Monocitos, macrófagos, macrófagos alveolares del pulmón,
células dendríticas de la piel y células de la microglia del cerebro).
 El virus provoca la infección lítica de los linfocitos T CD4 y una infección persistente que produce un bajo
nivel de células del tipo macrófagos.

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  El virus provoca la formación de sincitios en células que expresan grandes cantidades de antígeno CD4
(linfocitos T) con la subsiguiente lisis de las células.
 El virus altera la función de los linfocitos T y de los macrófagos, piezas clave del sistema inmunitario,
reduciendo su funcionalidad.

Factores de le enfermedad/víricos: Transmisión a través de fluidos corporales que poseen alta carga viral. La
enfermedad tiene un periodo de incubación largo. El virus puede transmitirse sin presentar el portador síntomas
identificables.

Transmisión: Se ha aislado el virus en saliva, lágrimas, orina, semen, liquido preseminal, fluidos vaginales, líquido
amniótico, leche materna, líquido cefalorraquídeo y sangre. Presenta una mayor carga en sangre, semen y
fluidos vaginales.

Grupos de población más expuestos a infección: Drogadictos que empleen drogas por vía parenteral, individuos
sexualmente muy activos que no empleen medidas de protección, recién nacidos con madres positivas al virus,
receptores de transplantes de órganos, transfusiones de sangre (En estos dos últimos casos se realiza una
determinación de la presencia del virus a partir de anticuerpos en sangre o antígeno viral)

La epidemia del SIDA carece de incidencia estacional y está expandida por todo el mundo.

Métodos de control del SIDA

Los fármacos antivirales actuales han permitido limitar la progresión de la infección cronificando la enfermedad.

El tratamiento recomendado es el TAAA (Tratamiento Antiretroviral de Alta Actividad) compuesto por un cóctel de
drogas antivirales, lo que permite ser más efectivo contra la variabilidad del virus.

Se están haciendo pruebas de vacunas para su prevención y tratamiento

Medidas profilácticas: Relaciones sexuales seguras y monógamas limitan su difusión.

Agujas de inyección estériles

Cribado de sangre de las transfusiones, de órganos de trasplante y factores de coagulación

utilizados por enfermos de hemofilia.