ORIENTACIONES PARA EL
ESTUDIANTE
1. Es obligatorio asistir a la actividad practica
en la fecha señalada, hora y en la mesa
designada
2. Es obligatorio ingresar al laboratorio,
puestos los implementos de protección
personal.
3. Debe leer previamente la actividad
práctica completa para traer sus
materiales de trabajo y la discusión lo
realizará con el docente.
4. Los útiles y objetos personales deberán
ser colocados en la parte inferior de la
mesa de trabajo.
5. Realizar con cuidado cada práctica, así
como el manejo de cada equipo e
instrumentación
6. Recibir su material, y después de la
actividad debe entregarlo limpio y dejar
ordenado, limpia la mesa de trabajo.
7. Seguir las indicaciones del Manual en
cada práctica, por ningún motivo alterar el
orden de la adición de los reactivos en la
práctica.
8. Utilizar la cantidad requerida de reactivos
para evitar desperdicios de los mismos.
9. Matener los frascos de reactivos tapados
para evitar contaminación y/o
evaporación de los mismos.
10. Al finalizar la actividad práctica se
realizará y presentará la discusión de los
resultados obtenidos, elaboración de las
conclusiones y el informe respectivo.
REGLAMENTO EN LAS
PRACTICAS DE BIOLOGIA
MOLECULAR Y CELULAR
Para evitar el riesgo de sufrir algunos accidentes,
durante el desarrollo de las actividades en
laboratorio, se debe cumplir las normas siguientes:
- Llegar a la hora programada.
- Leer el manual antes de iniciar la práctica.
- Traer los materiales solicitados con anterioridad
para el desarrollo de la práctica.
- El estudiante deberá utilizar bata blanca,
abotonada y de manga larga permanentemente.
- Ubicar la fuente de agua, extinguidor para
incendios, caja para material punzocortante,
tachos de basura y la bolsa roja para desechos
biológicos.
- Esta prohibido fumar, comer y fomentar indisciplina
durante la ejecución de la práctica.
- Utilizar guantes desechables para el manejo de
muestras biológicas ya que estos pueden ser
infecciosos.
- Limpiar la mesa y el material de trabajo antes y
después de la práctica, y limpiar con cuidado, si se
derrama algún reactivo o muestra biológica.
- Para evitar quemaduras se debe apagar mecheros
cuando no se utilicen, y utilizar pinzas para
sostener los tubos calientes y colocarlos en su
gradilla respectiva.
- En caso de contacto de la piel con un reactivo,
lavar el área con bastante agua. Si alguna solución
corrosiva cae a la ropa, debe quitarsela
inmediatamente.
- Sea muy cuidadoso al utilizar los reactivos, NO
OLFATEAR y/o PROBAR reactivos porque estos
son tóxicos y/o corrosivos, tampoco PIPETEAR los
reactivos, utilizar pipeta automática.
- Usar la campana extractora, cuando se utilice
reactivos que despende gases tóxicos o no tóxicos.
- NO QUITAR EL ROTULO de los reactivos, en caso
de no tener nombre, identifiquelo y coloque su
rótulo, con fecha.
- No debe llevar a cabo experimentos no autorizados
por sus profesores asesores.
- En caso de cualquier accidente, NOTIFICAR
INMEDIATAMENTE a su profesor.
 PRÁCTICA BIOSEGURIDAD EN EL embudos
LABORATORIO DE Equipos
Microscopio óptico

1
BIOLOGÍA MOLECULAR Espectrofotómetro:
Y CELULAR Centrífuga refrigerada
Centrifuga para tubos de ensayo
Microcentrifuga
I. INTRODUCCIÓN Autoclave
La BIOSEGURIDAD en el laboratorio es el conjunto Balanza granataria
de medidas preventivas, destinadas a mantener el Balanza de dos platillos
control de factores de riesgo laborales procedentes Micropipeta automática variable
de agentes biológicos, físicos o químicos, logrando Agitador magnético
la prevención de impactos nocivos, asegurando que Vórtex
el desarrollo o producto final de dichos Baño maría
procedimientos no atenten contra la salud y Termociclador Y Baño Termorregulador
seguridad de los estudiantes y todo el personal que Nevera
realice practicas en el laboratorio. Refrigeradora
cámaras de electroforesis
Las normas de bioseguridad no eliminan el riesgo de Bomba al vacío
un accidente; están elaboradas para prevenir OTROS
posibles accidentes en el laboratorio, brindar las Puntas sueltas de 10, 200, 1000 ul
indicaciones reglamentarias evitar riesgos y proteger Gradillas, Pinzas
al personal docente, administrativo y estudiantes y Bolsas de recolección de los desechos.
conocer la utilización de material biológico, equipos,
y técnicas para un buen desarrollo del trabajo 2.2. Método
Objetivo de la práctica es inculcar a los estudiantes
una mentalidad preventiva que minimice la a) Medidas Generales de Protección
probabilidad de que ocurran accidentes en el  El estudiante deberá utilizar equipo de protección
laboratorio de Biología molecular y celular. personal: bata con manga larga, guantes,
masacarilla, gorro y lentes de seguridad.
II. MATERIAL Y METODO  Deberá lavarse las manos antes y después de
2.1 Material y equipos: cada procedimiento.
Materiales de laboratorio  Realizar la desinfección y limpieza del material y
Agujas: Para colección de sangre se utilizan agujas equipos antes y después de cada actividad.
de diámetro 21G (0.8 mm) x 1”.  No aspirar o pipietear sustancias tóxicas o
Jeringas de 3, 5, 10 y 20 cc corrosivas, utilizar la pipeta automática.
Adaptador para tubos al vacío.  Manejar con sumo cuidado el material
Alcohol al 70%. punzocortante y desecharlos en los
Algodón. contenedores indicados. No recapsular agujas.
Guantes de procedimientos  Si hay derrame de sangre en el mesón de toma
Frascos para hemocultivos. de muestra, limpiar con Hipoclorito de sodio al
Tubos de exámenes. 0,1%.
Sondas.  No reutilizar material contaminado, como agujas,
Frascos tapa rosca para muestras de orina. jeringas, hojas de bisturí y/o tubos.
Cajas para baciloscopías.  Usar mascarillas para toma de muestras de alto
Frascos para exámenes parasicológicos y laminas riesgo (Ej. Virus respiratorios) o en caso de que
para test de Graham. el paciente tosa constantemente.
Tórulas con medio de transporte para muestras
microbiológicas. b) Manejo de muestras biológicas
Rotulador.
Material de vidrio  El estudiante deberá utilizar equipo de protección
Tubos de ensayo personal: bata con manga larga, guantes,
Placas Petri masacarilla, gorro y lentes.
Fiolas  Antes de tomar la muestra, deberá conocer que
Balón tipo y cantidad de muestra se requiere para el
Probetas análisis bioquímico respectivo.
Matraces erlenmeyer  Disponer de los materiales necesarios en un área
Vasos de precipitación de trabajo limpia y adecuada.
Pipetas graduadas de 0.1, 1, 5 y 10 ml  Toda muestra es potencialmente patógena.
2
 Rotular el frasco que contiene la muestra, III.RESULTADOS
colocando el nombre del paciente, edad y fecha
de recolección a) Identificación de los símbolos
Símbolo Leyenda
c) Aspectos éticos
 Informar al paciente sobre la toma de muestra, Las superficies pueden calentarse
indicando que pruebas se van a realizar, durante su uso.
resultados esperados y firmando para su
constancia el consentimiento informado.
Esta es capaz de generar
corrientes letales. Utilice las
d) Toma de muestra
mismas precauciones que con
Sangre: extracción por punción venosa, capilar, cualquier dispositivo eléctrico. No
arterial etc. opere sin la cubierta en su lugar.
No opere en humedad o
Suero sanguíneo es el componente de la sangre
ambientes húmedos en los cuales
resultante tras permitir la coagulación de ésta y esta pueda causar daño en los
eliminar el coágulo resultante. componentes eléctricos internos,
Plasma: es un líquido transparente y ligeramente no opere con cables conectores
amarillento que representa el 55 % del volumen con alambres sueltos
total de sangre. En el plasma se encuentran Radiación ultravioleta que puede
suspendidas las células sanguíneas: glóbulos ser perjudicial para la piel y los
rojos, glóbulos blancos y plaquetas. Es el suero ojos, no se exponga a esta
más las proteínas de la coagulación (fibrinógeno). radiación sin protección de ocular
o de piel
Anticoagulantes: dificultan o impiden la
coagulación de la sangre, ejemplo: Edta, citrato
sódico, heparina, warfarina etc. Este aviso alerta de situaciones
Los tubos con anticoagulante deben invertirse potencialmente peligrosas.
suavemente y colocarlos en posición vertical,
para evitar el contacto prolongado con la tapa del
tubo. 2) identificar la ETIQUETA de un producto
químico.
 Orina:
La muestra idónea es la primera micción de la Descripción de los
Símbolo Significado
mañana, ya que es la más concentrada. No riegos
obstante, en determinaciones urgentes, se
recogerá la primera orina que realice el paciente.
F+
Es suficiente un volumen de orina de 5-10 mL, se
utiliza un frasco de boca ancha ésteril.
 Heces:
Asegurarse de que la persona defeque en un
recipiente aparte (bacinilla) cuidando que la O–
muestra no se mezcle con orina.
Tomar una parte de la muestra en un recipiente
estéril de boca ancha y tapa rosca.
Introducir la(s) muestra(s) en una funda plástica E–
y cerrarla evitando que se derrame
y se mezcle con otras muestras
 Liquídos biológicos
La recolección de este tipo de muestra lo realiza 3) Riesgos de alteración de la salud
personal especializado en salud. Corresponde al
líquido cefalorraquídeo (LCR), Sinovial, Descripción de
Símbolo Significado
amniótico, pleural, pericárdico, ascítico, los riegos
secreciones genito urinarias etc.
R

3
  ACTIVIDADES EXTRA-AULA:
T 1) Medidas preventivas cuando se usa
productos químicos inflamables

Xn

XI

IV.DISCUSIÓN

2) Medidas preventivas cuando se usa

productos de riesgo para la salud

V.CONCLUSIONES
3) Instrucciones en caso de accidente en el
laboratorio, avisar inmediatamente:
Institución Teléfono
Profesor
Compañía Bomberos:
Cuz Roja:
BIBLIOGRAFÍA
 Sánchez Enríquez, Sergio y col. Manual de
prácticas de laboratorio de bioquímica, 3e.
Mcgraw-Hill Interamericana Editores, S.A. de C.V.
2014. ISBN: 978-1-4562-2012-9
 OMS. Manual de bioseguridad en el laboratorio.
3e.2005.
 Aznar Javier y colab. Manual de obtención y
manejo de muestras para el laboratorio clínico.
Plan de Laboratorios Clínicos y Bancos Biológicos.
Agosto, 2009. Servicio Andaluz de Salud.
Consejería de Salud. Junta de Andalucía-España.
4
Práctica 1: Porta embudos
- Equipos
RECONOCIMIENTO DEL Microscopio óptico
Centrífuga para tubos grandes
MATERIAL DE LABORATORIO. Centrífuga para microhematocrito
I. INTRODUCCIÓN Centrífuga refrigerada
Potenciometro
El laboratorio de biología es el recinto en donde Homogenizador
se trabaja con material relativo a los seres vivos, Espectrofotómetro
en el se realizan prácticas a nivel celular o Agitador eléctrico
microscópico como a nivel macrocelular, Vortex
órganos, tejidos o sistemas, con dichas Micrótomo
actividades se trata de diferenciar la estructura de Estufa
los organismos vivos e inclusive identificar Baño María
algunos de los elementos que los integran. Así Balanza
mismo se pueden realizar mediciones y Autoclave
observaciones con lo cual se formulan hipótesis y Cocina eléctrica
conclusiones con los experimentos. Mechero bunsen
El objetivo de la práctica es: Equipo para electroforesis
-Identificar los materiales y equipos más usados Bomba al vacío
en el laboratorio y sus funciones. Refrigeradora 0-5 ºC
-Manipular materiales y equipos de uso y Nevera – 20 ºC
cuidados específicos. Equipo de disección
Campana extractora
II. MATERIAL Y MÉTODO Cámara de flujo laminar
Termociclador
2.1 Material y equipos:
Pipetas automáticas variables
- Material de vidrio
Tubos de ensayo
Embudos 2.2 Método:
Probetas a) Identificar y describir el material de vidrio
Kitasatos
El vidrio empleado para uso de laboratorio
Fiolas
tiene propiedades especiales de acuerdo a
Pipetas
su composición y calidad de los mismos.
Bureta
Matraz Las marcas kimax y pyrex utilizan vidrios de
Balones borosilicato, los mismos que toleran
Vasos de precipitación temperaturas de hasta 510ºC sin deformarse.
Placas Petri
Láminas porta y cubre objetos Corex fabrica vidrios de silicato de alúmina
Lunas de reloj que posee gran resistencia al impacto.
Cubetas Vicor fabrica material de vidrio para uso
Morteros donde existen altas temperaturas, cambios
Campanas de vidrio térmicos bruscos y tratamiento químico
Desecador extremos con ácidos y álcalis diluidos, puede
Hipodérmicas resistir un choque térmico desde 900ºC a la
Frascos goteros temperatura del agua de hielo.
Tubos de centrífuga
Goteros El vidrio de cristal estándar se usa a
hematímetro temperatura ambiente o cercanas a ellas, es
Mecheros de alcohol relativamente fácil de fundir y moldear,
Frascos de coloración también se emplea para frascos y otros
Pipetas pasteur depósitos que van a desecharse.
Varillas de agitación b) Identificar y describir los equipos
Frascos de protección solar
- Material de madera El material de metal empleado para la
Tabla de disección fabricación de equipos e instrumentos de
Gradillas laboratorio son alta calidad, preferentemente
Caja porta láminas acero y aleaciones que toleran la actividad
química de ácidos y álcalis, asim mismo, son
5
 resistentes a la manipulación y 7
funcionamiento continuo.
La mayoría del material y equipo metálico es 8
costoso y mucho de ellos de difícil
adquisición, por ello se recomienda a los 9
usuarios tomar la debida precaución a fin de
evitar su deterioro. 10

III. RESULTADOS 11
-Identificar el material de vidrio usado en el
laboratorio 12

13

14

15

16

17

18

19

20

21

22

23

24

V. CONCLUSIONES
El alumno deberá informar al docente, de
cualquier rotura o desperfecto del material
asignado.
IV. DISCUSIÓN
Describa el uso del material de vidrio usado en el
laboratorio
1

3
VI. BIBLIOGRAFÍA
4 - https://www.monografias.com/trabajos93/material
es-e-instrumentos-laboratorio/materiales-e-
5 instrumentos-laboratorio.shtml#equiposyoa
- https://es.123rf.com/photo_37102119_ilustración-
6 detallada-de-un-isométrico-sketch-biología-
molecular-laboratorio-conjunto.html

6
 ACTIVIDADES EXTRA-AULA:

1) Identificar algunos equipos comunes que se

usan en el laboratorio.

2) Descibir el uso de algunos equipos comunes

que se usan en el laboratorio.

BIBLIOGRAFÍA

7
 Práctica 1:
La parte mecánica del microscopio consta
DESCRIPCIÓN Y MANEJO DEL de:
- Columna, parte que sostiene el tubo óptico.
MICROSCOPIO COMPUESTO. - Tubo óptico, donde se encuentra ubicado el
I. INTRODUCCIÓN ocular.
- Revólver, parte móvil que sostiene los
Entre los seres vivos que existen sobre el planeta objetivos.
hay muchos cuya estructura es tan pequeña que no - Platina, que soporta el portaobjetos.
se ven sin ayuda de instrumentos; el ojo humano es - Pié, sostiene todo el microscopio.
incapaz de percibir un objeto cuyo diámetro sea - Tornillo macro métrico, que permite
menor de 0.1 mm, para el estudio de dichos desplazamientos rápidos de las lentes.
organismos se requiere usar el microscopio, - Tornillo micro métrico, que permite
instrumento que aumenta ciento de veces la desplazamientos suaves de las lentes.
imagen del objeto que se observa
d) Manejo del microscopio óptico
El uso del microscopio es un instrumento de
precisión que permite al estudiante identificar y 1. Colocar el objetivo de menor aumento en
describir a través de uso de las partes que posición de empleo y bajar la platina
componen el sistema mecánico, óptico y de completamente. Si el microscopio se recogió
iluminación observar y describir la estructura de correctamente en el uso anterior, ya debería
microorganismos. estar en esas condiciones.
2. Colocar la preparación (corte histológico) sobre
La práctica tiene por objetivos: la platina sujetándola con las pinzas metálicas.
- Reconocer las dferentes partes del microscopio 3. Comenzar la observación con el objetivo de 4x
compuesto, así como sus funciones de cada o colocar el de 10 aumentos (10x) si la
una de ellas. preparación es de bacterias.
- Aprender a usar y manejar adecuadamente el 4. Para realizar el enfoque:
microscopio. a)Acercar al máximo la lente del objetivo a la
- Evitar el deterioro del equipo por un incorrecto preparación, empleando el tornillo
traslado y su manejo. macrométrico. Esto debe hacerse mirando
directamente y no a través del ocular, ya que
II. MATERIAL Y MÉTODO se corre el riesgo de incrustar el objetivo en
la preparación pudiéndose dañar alguno de
2.3 Material Reactivos: ellos o ambos.
- Muestras vegetales (tomate, cebolla, hoja) y b)Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir
muestra animal (sangre y epiteliales) separando lentamente el objetivo de la
- Equipo: preparación con el macrométrico y, cuando
Microscopio óptico se observe algo nítido la muestra, girar el
Estuche de disección micrométrico hasta obtener un enfoque fino.
Portaobjetos 5. Pasar al siguiente objetivo.
Cubreobjetos La imagen debería estar ya casi enfocada y
Palillos de madera suele ser suficiente con mover un poco el
Asa de platino o bacteriologica micrométrico para lograr el enfoque fino.
Papel para microscopio Si al cambiar de objetivo se perdió por completo
Aceite de inmersión la imagen, es preferible volver a enfocar con el
2.4 Método: objetivo anterior y repetir la operación desde el
paso 3.
c) Identificar las partes de un microscopio El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia
óptico de la preparación y por ello es fácil que ocurran
La parte óptica consta de : dos tipos de percances: incrustarlo en la
- Ocular, lente situada cerca del ojo del preparación si se descuidan las precauciones
observador. anteriores y mancharlo con aceite de inmersión
- Objetivo, lente situada cerca del objeto que si se observa una preparación que ya se enfocó
se quiere observar. con el objetivo de inmersión.
- Diafragma, dispositivo para graduar la
entrada de luz. e) Empleo del objetivo de inmersión:
- Condensador, dispositivo para concentrar la 1. Una vez enfocada la preparación con el objetivo
luz sobre el objeto. de 40x girar el revolver para seleccionar el
- Foco de luz o espejo, para iluminar el objeto. objetivo de inmersión.
8
2. Subir totalmente el condensador para ver que abusar de este tipo de limpieza, porque si se
claramente el círculo de luz que nos indica la aplican estos disolventes en exceso se pueden
zona que se va a visualizar y donde habrá que dañar las lentes y su ejecución.
echar el aceite. 7. No forzar nunca los tornillos giratorios del
3. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión microscopio (macrométrico, micrométrico,
dejándolo a medio camino entre éste y el de x40. platina, revólver y condensador).
4. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión 8. El cambio de objetivo se hace girando el revólver
sobre la preparación (la zona iluminada). y dirigiendo siempre la mirada a la preparación
5. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la para prevenir el roce de la lente con la muestra.
posición del objetivo de inmersión. 9. Mantener seca y limpia la platina del microscopio.
6. Mirando directamente al objetivo, subir la platina Si se derrama sobre ella algún líquido, secarlo
lentamente hasta que la lente toca la gota de con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla
aceite. En ese momento se nota como si la gota con un paño humedecido en xilol.
ascendiera y se adosara a la lente. 10. Es conveniente limpiar y revisar siempre los
7. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La microscopios al finalizar la sesión práctica.
distancia de trabajo entre el objetivo de
g) Corte histológico y observación de la célula
inmersión y la preparación es mínima, aun menor
que con el de 40x por lo que el riesgo de 1. Muestra vegetal: realizar cortes de 0-20 um de
accidente es muy grande. una muestra vegetal (cebolla, tomate, hoja,
8. Una vez se haya puesto aceite de inmersión corcho) y observar al microscopio óptico.
sobre la preparación, ya no se puede volver a
2. Muestra de mucosa: tomar con un hisopo un
usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se
raspado bucal y observar las células epiteliales.
mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar
otro campo, hay que bajar la platina y repetir la
operación desde el paso 3. III.RESULTADOS
9. Una vez finalizada la observación de la - Identifique las células en muestra vegetal :
preparación se baja la platina y se coloca el
corcho
objetivo de menor aumento girando el revólver.
En este momento ya se puede retirar la
preparación de la platina. Nunca se debe retirar
con el objetivo de inmersión en posición de
observación.
10. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado
empleando un papel especial para óptica.
11. Comprobar también que el objetivo 40x está
perfectamente limpio.
f) Mantenimiento y precauciones - Identifique las células en muestra vegetal :
cebolla
1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el
objetivo de menor aumento en posición de
observación, asegurarse de que la parte
mecánica de la platina no sobresale del borde de
la misma y dejarlo cubierto con su funda.
2. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay
que mantenerlo cubierto con su funda para evitar
que se ensucien y dañen las lentes.
3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si
se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un
papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica. - Identifique las células en muestra : bucal
4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si
no se está utilizando el microscopio.
5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay
que limpiar el aceite que queda en el objetivo con
pañuelos especiales para óptica o con papel de
filtro (menos recomendable).
6. Limpiar con papel la lente en un solo sentido y
con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y
pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una
mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay
9
 - PARTES DE UN MICROSCOPIO ÓPTICO

V. CONCLUSIONES
IV. DISCUSIÓN

VI. BIBLIOGRAFÍA
- https://www.mundomicroscopio.com/partes-
del-microscopio/
- https://es.wikipedia.org›wiki › Microscopio_
compuesto
- Alberts, B. 2016. Biología molecular de la
célula, 6ª ed. Ediciones Omega. Barcelona,
España.
- Becker W. Lewis J., Hardin J. 2007. El mundo
de la célula. Ed. Pearson Addison Wesley.
España.
- De Robertis, E.D. & Hib J. 2015. Fundamentos
de Biología Celular y Molecular. 15 Edición.
Editorial El Ateneo. Barcelona, España.

10
ACTIVIDADES EXTRA-AULA:
Identificar y describir las partes de un
microscopio compuesto

¿Cuál es la diferencia entre un microscopio

simple y un microscopio compuesto?

Indique los tipos de microscopios ópticos

compuestos

3
Describa el microscopio electrónico y su
4 importancia.

7 ¿Qué es un microscopio invertido?

9
¿Qué son los objetivos de inmersión?
10

11
BIBLIOGRAFÍA DE LA ACTIVIDAD
12

13

14

11
 PRÁCTICA PREPARADOS EN
FRESCO Y EN SECO.
2 COLORACIONES
I. INTRODUCCIÓN
El tamaño de los microorganismos impide
detectarlos a simple vista, por lo que es esencial el
uso del microscopio. Para que un objeto pueda ser
percibido a través del microscopio, este debe
poseer cierto grado de contraste con el medio
circundante. Para aumentar el contraste de los
microorganismos y lograr una mejor observación de
los mismos, se emplean diferentes preparaciones y
técnicas de tinción.
Los preparados pueden ser de dos clases:
a) En fresco: cuando la muestra está sumergida
en líquido y no existe ninguna sustrancia entre
la lente frontal del objetivo y el preparado,
excepto el aire.
b) En seco: cuando entre la lente frontal del
objetivo y el preparado existe una sustancia, que
generalmente es el aceite de cedro, cuyo índice
de refracción IR, es casi la misma que la del
idrio. (IR del vidrio=1,50; IR del aceite de
cedro=1,52).
Los preprados en seco requieren que la
sustancia a observar se encuentre fija a la
lámina portaobjetos.
Fijación.- Es un proceso que consta:
Extensión: consiste en extender la sustancia
examen en un portaobjeto del modo más uniforme
y fino posible. La extensión se puede hacer con otra
lámina portaobjetos, con una torunda o con una asa
bacteriológica (de Koll), dependiendo del tipo de
análisis y de muestra. La lámina que va a contener
la muestra debe estar completamente limpia y libre
de grasa.
Frotis: es una forma particular de extensión,
cuando la muestra es sangre. Consiste en colocar
una gota de sangre en la lámina portaobjetos y
luego con otra lámina realizar un movimiento de
desplazamiento en un solo sentido una sola vez, de
forma tal que se consiga una distribución
homogénea de la muestra, uniforme y sin grumos.
Fijación propiamente dicha: Luego que la
muestra es extendida, se procede a su
deshidratación, de la humedad, lo cual se consigue
por simple aireación al medio ambiente, por 2-3
minutos, o por flameo al calor de la llama de un
mechero, o químicamente mediante deshidratantes
comunes como el alchol etílico.
Quedando la muestra adherida a la lámina
12
portaobjetos; en este caso se utiliza el objetivo de
inmersión, llamado así porque su lente frontal
queda sumergido en la gota del aceirte de cedro.
TINCIÓN O COLORACIÓN
Coloración: Luego de la fijación se continúa con el
proceso de coloración, que consite en la toma de
color de un cuerpo por acción de un colorante. La
coloración supone que el cuerpo coloreado no va a
perder la coloración adquirida, por laados con agua
o cualquier otro disolvente.
Los colorantes y tinturas son sustancias que
usualmente se utilizan en biología para resaltar
estructuras en tejidos biológicos que van a ser
observados con la ayuda de diferentes tipos de
microscopios.
Los diferentes colorantes pueden ser utilizados
para aumentar la definición y examinar grandes
cortes de tejido (resaltando por ejemplo fibras
musculares o tejido conectivo), poblaciones
celulares (por ejemplo clasificando diferentes
células sanguíneas) o incluso para resaltar
orgánulos dentro de células individuales.y en
ambos casos la adición de colorantes, al aumentar
el contraste, permite una mejor observación.
Por ejemplo en el estudio microscópico de los
protozoos se utilizan colorantes vitales y
supravitales que tiñen ciertas estructuras.
Existen coloraciones de interés para la
investigación y la ciencia básica y aplicada, por
ejemplo las coloraciones Gram, Wright, Giemsa,
Ziehl Neelsen, Hematoxilina/Eosina etc.
Colorantes:
La mayoría de los colorantes son compuestos
orgánicos que tienen alguna afinidad específica
por los materiales celulares.
Colorantes básicos: si la porción coloreada tiene
comportamiento ácido.
Muchos colorantes utilizados con frecuencia son
moléculas cargadas positivamente (cationes) y se
combinan con intensidad con los constituyentes
celulares cargados negativamente, tales como
los ácidos nucleicos y los polisacáridos ácidos.
Ejemplos de colorantes catiónicos son el azul de
metileno, el cristal violeta y la safranina.
Colorantes ácidos reaccionan con estructuras
de composición química básicas.
Otros colorantes son moléculas cargadas
negativamente (aniones) y se combinan con los
constituyentes celulares cargados
positivamente, tales como muchas proteínas.
Esos colorantes incluyen la eosina, la fucsina
ácida y el rojo Congo.
Otro grupo de colorantes son sustancias II. MATERIAL Y MÉTODO
liposolubles; los colorantes de este grupo se
combinan con los materiales lipídicos de la célula, 2.1 Material Reactivos:
usándose a menudo para revelar la localización Preparados en fresco y seco:
de las gotículas o depósitos de grasa. Un ejemplo Mucosa labial
de colorante liposoluble es el negro Sudán. Sangre periférica
Sarro dentario
Si se desea simplemente incrementar el contraste Lámina porta y cubre objetos
de las células para la microscopía, son suficientes Mondadientes
los procedimientos simples de tinción. El azul de Pipetas pasteur
metileno es un buen colorante simple que actúa Agua destilada
sobre todas las células bacterianas rápidamente Agua estancada
y que no produce un color tan intenso que Lancetas hemolet
oscurezca los detalles celulares. Es Frascos de boca ancha
especialmente útil para detectar la presencia de Aceite de cedro
bacterias en muestras naturales, puesto que la Alcohol etílico
mayor parte del material no celular no se tiñe. Hisopos
Los colorantes presentan dos tipos de radicales: Microscopio compuesto
Coloración simple:
cromóforo que produce color (propiedad
cromógena) y auxocromo que forma sales y que Sangre periférica, Sarro dentario
Colorantes: básicos (azul de metileno, violeta de
permite que el colorante reaccione químicamente
con la fibra, tejido o estructura a colorear. Se genciana, safranina) y ácidos (eosina fucsina
ácida). Lámina porta y cubrte objetos.
tiene, colorantes:
Microscopio compuesto
Por su origen: Coloración doble:
a) naturales: son aquellos que se obtienen a Los mismos que el anterior
partir de organismos animales o vegetales, como Colorantes: básico (hemateína) y ácido (eosina).
por ejemplo: de la “cochinilla”, del fruto del “moral” Coloración neutra:
etc.Ejempo: el carmín, azafrán, hemateína, Los mismos que el anterior
orceína etc. y Alcohol etílico medicado, agua destilada, agua
b) artificiales: son los sintéticos que se obtienen corriente, colorante Wright, Giemsa, mechero,
de productos derivados de la destilación gotero y gradilla.
fraccionada de la hulla, anilinas etc. Coloración Gram:
Los mismos que el anterior: esputo,
Por actividad tintórea:
colorante: violeta de genciana, safranina, lugol,
a) ácidos: son aquellos que tienen afinidad
xilol y aceite de cedro.
especial por colorear el citoplasma celular:
Coloración Ácido – Alcohol - Resistente
eosina, fucsina ácida, ácido pícrico, naranja G,
(método de Zeihl Neelsen)
azul de anilina etc.
Los mismos que el anterior: esputo,
b) básicos: aquellos que tienen afinidad por
colorante: fucsina fenicada de Zeihl, azul de
colorear la cromatina nuclear, se les llama
metileno de Loefler, alcohol clorhídrico, etílico,
colorantes nucleares, ejemplo: azul de metileno,
agua destilada, laminas porta y cubre objetos,
violeta de genciana, safranina, hematoxilina, azul
varillas etc.
de toluidina, Azur A y B etc.
c) neutros: aquellos que pueden teñir el 2.2 Método:
citoplasma y el núcleo celular a la vez, dado que 1) Preparados en fresco y seco:
al entrar en contacto con las células a colorear se a) Preparados en fresco
disocian en sus radiclaes ácidos y básicos, Tomar una muestra: sangre, agua estancada
ejemplo: Giemsa, Wright, Leishman etc. - Sujete una lámina portaobjetos por los bordes, en
Al terminar la práctica el alumno estará en posición horizontal.
condiciones de: - Con un gotero o pipeta Pasteur, coloque sobre la
lámina una gota de agua estancada, previamente
- Realizar correctamente preparados en fresco
agitada
y en seco.
- Conocer y ejecutar los protocolos de ls - Cubrir con la laminilla, evitando derramar la
técnicas de coloración más importantes muestra
- Identificar y dibujar las observaciones - Colocar la lámina en el centro de la platina
microscópicas. sujetándola con la pinza
- Abrir completamente el diafragma
13
- Colocar el objetivo de 10 X en posición de
observación
- Accione el tornillo macrométrico hasta lograr la
imagen en el campo microscópico
- Luego accionar el micrómetro para una imagen
nítida
- Observar, dibujar y describir lo que visualiza en el
microscopio
- b) Preparados en seco:
- Extensión de la muestra: Con un hisopo hacer
un raspado orobucal o sarro dentario
- Colocar la muestra en el centro de la lámina
portaobjetos y extender la muestra lo más
uniforme y homogénea posible, usando
mondadientes o una asa de Koll.
- Frotis de la muestra de sangre: Desengrasar la
lámina portaobjetos, utilizando detergente y
alcohol etílico. Colocar una gota de sangre en el
tercio externo de una lámina y tocando el borde
con otra lámina, formando un ángulo de ± 45° se
extiende, deslizando esta hacia el otro extremo
mediante un movimiento rápido, tratando de
obtener una capa fina y uniforme. Observar al
microscopio y esquematizar.
2) Coloración simple:
- Con un hisopo hacer una extensión de la mucosa
bucal.
- Fijar la muestra al calor moderado o por aireación
al medio ambiente
- Cubrir la muestra con colorante ácido o básico
por espacio de 1-3 minutos.
- Deshechar el colorante sobrante y lavar con agua
corriente a chorro moderado
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- Secar al medio ambiente o al calor moderado del
mechero (flameo). Observar, utilizando primero
los objetivos de pequeño y mediano aumento y
luego con el objetivo de inmersión.
- Dibujar y colorear la muestra observada.
3) Coloración doble:
- Extensión de la muestra examen: mucosa bucal.
Fijación de la muestra.
- Colorear con hemateína cubriendo la muestra por
un tiempo de 3-6 minutos.
- Lavar con agua destilada, dos veces por 1 minuto
cada vez
- Colorear con eosina por un tiempo de 5-10
minutos
- Lavar con agua corriente
- Secar y observar con el objetivo de inmersión
- Esquematizar la muestra examen.
4) Coloración neutra:
- Frotis de la sustancia examen –sangre, tomada
del pulpejo del dedo anular, previamente
esterilizado con alcohol medicinal. Utilizar para el
pinchazo lanceta o aguja hemolet.
- Fijar al medio ambiente por espacio de 5 minutos
o por ligeros flameos al calor del mechero.
- Cubrir todo el frotis utilizando cualquiera de los
colorantes neutros señalados. Cuente las gotas
del colorante utilizado.
- Agregar agua tamponada pH 7, o agua destilada,
se agrega el doble del número de gotas del
colorante utilizado en el paso anterior.
- Dejar actuar el colorante por espacio de 3-5
minutos
- Eliminar el exceso de colorante y lavar con agua
tamponada o destilada (la lámina adquiere un
color rosado débil)
- Secar al medio ambiente y observar c inmersión
- Dibujar y describir lo observado.
-
5) Coloración Gram:
Esta es una coloración diferencial, mediante la
cual algunas bacterias como los estafilococos,
diplococos, el bacilo del ántrax y del tétao etc,
captan y retienen el colorante de GRAM (violeta
de genciana o cristal violeta) y no se decoloran
con el simple lavado con agua, ni con un
decolorante tan enérgico como es el acohol-
acetona.
A las bacterias de este grupo se les llama Gram
positivas (G+) y son de color azul.
- Otro gupo de bacterias como los cocos del
género Neisseria, como los gonococos,
meningococos etc y la mayoría de bacilos como
la Salmonella, Shigella, Escherichia, Pasteurella
 etc, captan pero no retienen el colorante e Gram, - Luego deje enfriar y repetir por 3 veces esta
se pueden teñir pero se decoloran con el simple operación; este paso debe durar 5 minutos.
lavado o bajo la acción del alcohol-acetona, y se
les llama Gram negativos (G-) son incoloras para
- Eliminar el exceos de colorante y lavar con agua
corriente
evidenciarlsas se utiliza un colorante de contraste
como la safranina y las baceteria se ven de color - Decolorar con alchol clorhídrico al 3%
rojo. - Agregar azul de metileno de Loefler y dejar actura
- Procedimiento: por 1 minuto
- Recolectar la sustancia examen (esputo, pus, - Lavar, secar y observar a inmersión
mucosa bucal, sarro denario) en frasco de vidrio - Dibujar y colorear la muestra observada
de boca ancha o en placa petri, previamente
esterilizado.
7) Coloración de una muestra de sangre
- Con una asa de Koll (pus o esputo) o con
- Colocar una gota de sangre en la lámina
mondadientes (sarro) previamente esterilizada a
portaobjetos y realizar la extensión homogénea
la llama del mechero, se toma una porción de
de la muestra, uniforme y sin grumos
muestra y se realiza una extensión sobre la
lámina portaobjetos. - Fijar a calor moderado o medio ambiente
- Fijar la muestra al calor moderado en el mechero - Agregar Giemsa hasta cubrir totalmente la
muestra por espaci de 30 minutos
- Cubrir la muestra con colorante violeta de
gencianar por espacio de 1-3 minutos. - Lavar con agua tamponada pH 7,0
- Eliminar el exceso de colorante y sin lavar la - Secar al medio ambiente y observar con objetivo
lámina, agregar lugol hasta cubrir la muestra por de inmersión
espacio de 1-2 minutos y luego elimiar el
sobrante. III. RESULTADOS
- Decolorar con alchol-acetona (1/5 acetona y 4/5
alcohol etílico) hasta que la lámina deje de
chorrear colorante en el proceso de decoloación.
- Agregar el colorante de contraste – safranina –
hasta cubrir totalmente la muestra y dejar actuar
por espacio de 1 minuto.
- Lavar con agua corriente
- Secar al calor moderado del mechero (flameo).
- Observar a inmersión, identificado las bacterias
G+ (color azul ) y G- (color rojo).
- Dibujar y colorear la muestra observada
6) Coloración Ácido – Alcohol - Resistente
(método de Zeihl Neelsen)
Ciertos gérmenes como las bacterias del género
Mycbacterium, tienen la propiedad de captar el
colorante inicial, la fucsina fenicad de Zeihl, y
resistir la decoloración por reactivos como la
acetona, alchol y diluciones ácidas. Se utiliza IV. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
para identifica el bacilo de la tuberculosis (Bacilo 1. Clark, G. (1981) Staining Procedures, 4th ed.
de Koch). p. 412. Baltimore: Williams & Wilkins.
- Procedimiento: 2. Wells, J. (1988). «A Technique for Staining the
- Con una asa de Koll (esputo de una persona con Superficial Cells of Plucked Hair Follicles and
TBC) previamente esterilizada, se toma una Other Solid Tissues.» Stain Technology, 63(3).
porción de muestra y se realiza una extensión 3. «Copia archivada». Archivado desde el
sobre la lámina portaobjetos. original el 5 de noviembre de 2011.
- Fijar la muestra al calor del mechero Consultado el 13 de marzo de 2014.
- Cubrir la muestra con colorante fucsina fenicada 4. https://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n
de Ziehl, y someter al calor de la llamd de un 5. Kiernan, J. A. (2008). Histological and
hisopo de algodón impegando de alcohol Histochemical Methods. Theory and Practice.
coriente, sin que hierv el colorante. Bloxham, UK: Scion. ISBN 9781904842422.

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 ACTIVIDADES EXTRA-AULA: Identifica en la figura, los microorganismos
Preparados en fresco presentes en microbiota de la cavidad bucal
1) Agua estancada:
El agua estancada es un medio ideal para el
desarrollo de numerosos microorganismos. Se
pueden observar algunos de ellos al microscopio.

Nombre los tipos de colorantes

Cuáles son los colorantes:

vitales

supravitales

Identifica en la figura, los microorganismos

presentes en el agua estancia
- Esquematize los pasos para coloración
gram

Preparados en seco
2) Microbiota de la cavidad bucal
La cavidad bucal está compuesta de muchas
superficies, cada una de ellas recubierta por una
gran cantidad de bacterias, formando la biopelícula
bacteriana. Algunas de estas bacterias han sido
implicadas en enfermedades bucales como la caries
y la periodontitis, que están entre las infecciones
bacterianas más comunes en los seres humanos
- Represente mediante una figura la
coloración con Hematoxilina-Eosina

BIBLIOGRAFÍA DE LA ACTIVIDAD

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