Green tea, oolong tea and black tea were selected as the testing samples to determine TPC.

During
the preparation of tea extracts, all samples were crushed into powders with a mixer (JYL-350, Jiuyang
Co., Ltd., China) and passed through a 60-mesh screen (sieve size, 0.25 mm). Then, tea powders
(100 g) were suspended in ethanol (1000 mL, 75%, v/v) with stirring at room temperature for 24 h.
Thereafter, the mixture was filtered and the extraction procedure was repeated twice. All supernatants
were condensed at 45 °C by rotary evaporator. Then, the dried tea extracts were obtained by freeze–
drying with a yield (g extracts /100 g dried tea powders) of 8.36% (green tea), 6.21% (black tea) and
7.67% (oolong tea), respectively. All the tea extracts were stored at 4 °C for the determination of TPC
using the F–C assay [20].

The F–C assay was carried out according to Singleton and co authors method [21] with some
modifications. Briefly, 1 mL of testing solution (tea extracts: 4 mg/mL, standards: the concentration
was shown in Table 1) was mixed with 10 mL of F–C reagent (10%, v/v), and 8 mL of sodium
carbonate solution (7.5%, w/v) was added later. The mixture was mixed well and incubated at 45 °C
for 30 min. Then, a Lambda 25 UV–Vis spectrophotometer (PerkinElmer Co., Ltd., MA., USA) was
used to scan and record the maximum wavelength of the reaction mixture between 600 and 900 nm,
and its absorbance was measured at the maximum wavelength. Nine phenolic compounds were used
as standards, and the calibration curves correlating the concentration of standard solution to
absorbance were obtained, respectively. Then, all calibration curves were used to calculate TPC
(mg/g) in tea extracts, and TPC was expressed as mg standard equivalent/g extract, respectively

El té verde, el té oolong y el té negro se seleccionaron como muestras de prueba para determinar TPC.
Durante la preparación de los extractos de té, todas las muestras se trituraron en polvo con un
mezclador (JYL-350, Jiuyang Co., Ltd., China) y se pasaron a través de una pantalla de malla 60
(tamaño de tamiz, 0,25 mm). Luego, los polvos de té (100 g) se suspendieron en etanol (1000 ml,
75%, v / v) con agitación a temperatura ambiente durante 24 h. Posteriormente, la mezcla se filtró y
el procedimiento de extracción se repitió dos veces. Todos los sobrenadantes se condensaron a 45 °
C por evaporador rotativo. Luego, los extractos de té seco se obtuvieron por liofilización con un
rendimiento (g extractos / 100 g de polvo de té seco) de 8.36% (té verde), 6.21% (té negro) y 7.67%
(té oolong), respectivamente. Todos los extractos de té se almacenaron a 4 ° C para la determinación
de TPC utilizando el ensayo F-C [20].

Briefly,
El ensayo F – C se realizó de acuerdo con el método Singleton y coautores [21] con algunas
modificaciones. Brevemente, 1 ml de solución de prueba (extractos de té: 4 mg / ml, estándares: la
concentración se mostró en la Tabla 1) se mezcló con 10 ml de reactivo F – C (10%, v / v) y 8 ml de
sodio La solución de carbonato (7,5%, p / v) se añadió más tarde. La mezcla se mezcló bien y se
incubó a 45 ° C durante 30 min. Luego, se utilizó un espectrofotómetro Lambda 25 UV-Vis
(PerkinElmer Co., Ltd., MA., EE. UU.) Para escanear y registrar la longitud de onda máxima de la
mezcla de reacción entre 600 y 900 nm, y su absorbancia se midió a la longitud de onda máxima . Se
usaron nueve compuestos fenólicos como patrones, y se obtuvieron las curvas de calibración que
correlacionaban la concentración de la solución estándar con la absorbancia, respectivamente. Luego,
todas las curvas de calibración se usaron para calcular TPC (mg / g) en extractos de té, y TPC se
expresó como mg de equivalente estándar / g de extracto, respectivamente