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INTRODUCCIÓN
Antiguamente las determinaciones se hacían por métodos químicos, pero ninguno era
específico para la glucosa; por lo que se desarrollaron nuevas tecnologías en donde el
empleo de enzimas es un procedimiento alternativo para conseguir una mayor especificidad.
Se utilizan dos enzimas específicas para la determinación de glucosa, la glucosa oxidasa y la
glucosa hexoquinasa.
Obviamente, estos métodos son comerciales, pues es necesario que la enzima esté purificada
para que se pueda efectuar la reacción, además de que son metodologías que incluyen una
cadena de reacciones acopladas para obtener, finalmente, un producto que sea fácilmente
leíble en el espectrofotómetro.
MUESTRA CLÍNICA:
La muestra debe recolectarse en ayuno excepto por el agua, durante ocho horas cuando
menos antes de la prueba, debe recolectarse en tubo colector de tapón rojo para suero el
cual no contiene anticoagulante, o de color lila el cual contiene EDTA anticoagulante para
obtener plasma., centrifugar a 3500 rpm durante 5 min para separar el suero y plasma., la
glucosa en suero o plasma es estable al menos 3 días a 2-8ºC
MÉTODO DE GLUCOSA OXIDASA-PEROXIDASA (GOD-PAP Ó TRINDER)
Fundamento y reacción:
Punto final de una reacción: Las reacciones catalizadas por enzimas son únicas en el
sentido de que presentan aumentos muy grandes de la velocidad en relación a las
reacciones no catalizadas y muestran una cinética de saturación, es decir la velocidad
de la reacción alcanza un valor máximo a una concentración determinada de sustrato, no
dan por resultado aumento de la velocidad de la reacción. La medida se realiza siempre
en las condiciones óptimas de pH, T° temperatura, presencia de
cofactores, etc. En estas condiciones, la velocidad de reacción observada es la velocidad
máxima (Vmax). La velocidad puede determinarse bien midiendo la aparición de los
productos o la desaparición de los reactivos.
En el caso de la reacción de la glucosa catalizada por la enzima glucosa oxidasa y
la peroxidasa llega a su punto final cuando todo el sustrato (glucosa) se ha oxidado, y
después se mide el cambio de color.
TÉCNICA:
Debido a que el procedimiento es dependiente del estuche comercial que se tenga para la
práctica, la metodología no será incluida. Debe seguirse al pie de la letra el procedimiento
especificado y tomar en cuenta si existen notas aclaratorias.
MATERIALES Y REACTIVOS:
Materiales Reactivos
Espectrofotómetro Reactivo para glucosa
Tubos de ensayo Estándar de glucosa (100 mg/dl)
Gradilla Muestras de suero sanguíneo o
plasma)
Pipetas automática
Puntas de plástico para pipetas
automát..
Reloj
Cubetas de plástico para espectrofot.
Valores de referencia
Muestra Tradicional SI
Sangre total, suero o plasma 70 – 110 mg/dL 2.8 – 5.6 mmol/L
FUNDAMENTO
CUESTIONARIO
BIBLIOGRAFÍA