Análisis III

Espectrometría de masas

CANNABIS SATIVA UNA ALTERNATIVA MEDICINAL, USANDO HPLC-DAD-MS /

MS

INTRODUCCION
El término marihuana medicinal se refiere al uso de toda la planta de marihuana
sin procesar, o de sus extractos básicos, para tratar ciertos síntomas de
enfermedades y otros trastornos.[1]. Los cannabinoides son el principal
componente psicoactivo y medicinal que tiene la mariguana, La planta de
marihuana contiene más de 100 cannabinoides[2] de estos destacan el THC y el
CBD componentes que han sido objeto de estudio por investigadores y
académicos. En el presente documento se hablará de la caracterización de las
muestras recreativas del cannabis y se cuantificara los principios activos de
esta planta, usando tres tipos de muestras, hachís, cannabis medicinal y
cannabis de uso recreativo, empleando el método HPLC-DAD-MS/MS, usando
ESI como técnica de ionización.
Cannabis sativa L. representa, con mucho, el más ampliamente Drogas de abuso
producidas y consumidas en todo el mundo[3] . La clase más representativa de
compuestos bioactivos de cannabis está compuesta de cannabinoides que son
terpenofenólicos. Los cannabinoides se biosintetizan en forma ácida en los
vegetales generando equivalente carboxilados por medio de carboxilación
espontánea. el THC produce los efectos psicoactivos del cannabis,( euforia,
alucinaciones, ralentizaciones), y el CBD posee la actividad medicinal de la
cannabis (antinflamatoria, antioxidante, antimicrobianas, neuroprotectoras, entre
otras). La mayoría de los efectos psicoactivos del THC están mediados por
receptores CB mientras que los cannabinoides no pscioactivos como el CBD
tienen baja afinidad por los receptores CB, los cuales se consideran implicados
en la neuroinflamación, la aterosclerosis y la remodelación osea. Se ha
observado que el cannabis empleado como recreativo presenta un alto nivel de
THC y un bajo nivel de CBD, los graves efectos del consumo de cannabis
relacionados con la presencia de THC, inlcuyen alteraciones perceptivasm
euforia, alucinaciones, ralentización, reflejos, relajación y coordinación reducida.
por otra parte el medicinal posee un nivel, alto/medio de THC y un nivel
bajo/medio de CBD, este tipo de cannabis se ha propuesto para el tratamiento
de la esclerosis múltiple, el dolor neuropático, el dolor crónico asociado con la
artritis reunatoide y la migraña, también en pacientes oncológicos, trastornos de
estados de ánimo y enfermedades inflamatorias. En particular, el THC tiene que
estar bajo un nivel muy bajo para obtener un producto sin efectos psicoactivos.
El análisis de los cannabinoides mediante técnicas analíticas avanzadas es de
gran importancia para el uso racional de cannabis con fines medicinales. El
anñalisis de cannabinoides se ha llevado a cabo generalmente por métodos
HPLC Y GC5 pero estos sólo se centrar en una clase de cannabinoides ya sean
psicoactivos o no psicoactivos.
¿Cómo podemos identificar y cuantificar los cannabinoides en productos de
cannabis?
Históricamente se emplea la técnica HPLC y GC para caracterizar los
cannabinoides psicoactivos y no psicoactivos, sin embrago, la técnica de HPLC-
DAD-MS/MS permite identificar una gran variedad de cannabinoides y demostró
ser un método efectivo ya que los analitos de interés, fueron cuantificados e
identificados adecuadamente, como se observa en la tabla 1.

Tabla1. Niveles de cannabinoides en diferentes muestras de Cannabis

De la tabla 1 se pudo demostrar que la mayor cantidad de cannabinoides

psicoactivos están presentes en la muestra de hachís, y que la cantidad de THC
es alta comparada con las otras muestras estudiadas. Por otra parte en cuanto
el cannabis medicinal, los valores de CBDA y CBD, fueron altos (tabla 3)
Como parte de los resultados, para poder elegir las condiciones más
adecuadas de cada analitoe IS todos los espectros se adquirieron utilizando
ESI+ y ESI-. Después de una optimización de las condiciones MS/MS, la
transición más abundante para cada analito se utilizó para hacer el análisis
cuantitativo, mientras que el segundo fue usado para fines cualitativos.
Se realizó una optimización apropiada de las condiciones cromatográficas para
lograr un análisis simultáneo de todos los analitos considerados en el estudio.
Se utilizó la elución de un gradiente que comenzó con el 50% del solvente A
que aumentaba gradualmente hasta el 95% del mismo solvente por 5 minutos y
con un flujo de velocidad constante de 0.3ml/min con el fin de obtener un
tiempo de análisis total aceptable y poder evitar la coelución de los
componentes de la matriz residual. Las muestras de cannabis fueron sometidas
a un procedimiento de extracción previas al análisis. Las muestras en forma de
hierbas se cortaron finamente por un molinillo comercial, mientras que el hachís
se cortó con un cuchillo. Para la extracción se consideraron variedad de
solventes obteniendo con el MeOH al 100% los mejores resultados
Se analizaron dos tipos de productos recreativos que se relacionaban con el
cannabis incautado para poder determinar sus niveles de cannabinoides
además de dos productos herbales que son inflorescencias femeninas secas y
dos muestras de hachís. En el estudio también se analizaron siete muestras de
inflorescencias femeninas de cáñamos de tipo fibra incluidas: Antal, Carma,
Carmagnola, China, Codimono, Fibrante y Futura las cuales fueron separadas
manualmente de ramitas y semillas. A dos extractos líquidos de hierbas
hidroalcohólicas obtenidas del cannabis tipo fibra se le realizaron los mismos
procedimientos anteriores para evaluar su contenido de cannabinoides y su
cumplimiento del límite legar para compuestos Psicoactivos.
Se realizaron ensayos de precisión en 3 niveles diferentes para evaluar
precision intradiaria e interdiaria. La precisión se evaluó mediante ensayos de
recuperación agregando soluciones estándar de todos los analitos a 3
concentraciones diferentes e IS a una concentración constante a los extractos
de cannabis con niveles de analitos conocidos. Los valores de recuperación del
cannabinoides y los IS ayudaron a demostrar que este era un método preciso.
Todos los analitso de interés fueron efectivamente identificados y cuantificados.
La mayor concentración de cannabinoides pscioactivos fue encontrada en las
muestras de hachís ya que sus productos no herbales representan un
concentrado de cannabis crudo producido de una manera ilegal obteniendo
derivados de gran potencia. Los niveles de THC se encontraron en una
concentración por encima del límite legal permitido para comercialización y
consumo en muestra de hachís y productos herbales de tipo recreativo. En
cuanto a la muestra de cannabis tipo droga, los contenidos encontrados están
de acuerdo a lo esperado de una cepa de cannabis medicinal de THC Y CBD.
Tenemos el conocimiento de que el cannabinoide más abundante en este tipo
de cannabis es CBDA seguido de CBD descubriendose que CBDA es el más
abundante en 5 de las 7 muestras que se analizaron en este estudio. También
en los extractos líquidos comerciales derivados del cannabis se encontraron
cantidades significativas de CBD Y CBDA.
BIBIOGRAFIA
[1] NIDA.(2019, julio 31). La marihuana como medicina. Retrieved from
https://www.drugabuse.gov/es/publicaciones/drugfacts/la-marihuana-como-
medicina en 2019, August 26
[2]Rocio Cos Garduño. (septiembre 2017). EL uso medicinal de la marihuana .
oficina de información científica y tecnológica para el congreso de la unión ,
005, 2-3.

[3] Protti, Michele, et al. “Cannabinoids from Cannabis Sativa L.: A New Tool
Based on HPLC–DAD–MS/MS for a Rational Use in Medicinal Chemistry.”
ACS Medicinal Chemistry Letters, vol. 10, no. 4, 2019, pp. 539–544.,
doi:10.1021/acsmedchemlett.8b00571.