INFORME DE “IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE VITAMINA C POR

CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN”

LABORATORIO DE INSTRUMENTAL I Commented [fl1]: 88/2 = 4,4

Gabriela Lopez Arboleda 1, Mateo Pava2

Galoarb@hotmail.com1, pava.mateo@gmail.com 2
Universidad ICESI, Facultad de Ciencias Naturales, 1,2 Programa Química Farmacéutica,
Laboratorio de Análisis Instrumental
Santiago de Cali, Colombia
Fecha de realización: 27 de abril, 2019
Fecha de entrega: 16 de mayo, 2019

RESUMEN
La práctica de laboratorio tuvo como objetivo aplicar la técnica de cromatografía líquida de alto desempeño
(HPLC) para la cuantificación de vitamina C en un preparado farmacéutico. Para lo anterior, se prepararon 6
soluciones estándar las cuales se pasaron a un vial con la ayuda de una jeringa y un trompo, posteriormente se
llevaron al cromatógrafo para cuantificar la cantidad de vitamina C presente en la muestra donde finalmente se
obtuvo una cantidad de ácido ascórbico de 400,65 mg.

Palabras clave: cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), vitamina C, cuantificación.

cuantificación de vitamina C (ácido ascórbico)
en un preparado farmacéutico. (Department of
INTRODUCCIÓN Health & Human Services, 2016) Commented [fl2]: 4/5

La Cromatografía Líquida de Alta presión METODOLOGÍA Commented [fl3]: 8/10

(HPLC) o Resolución es una técnica de permite
separar, aislar e identificar los analitos de una
mezcla de compuestos químicos (basada en la
transferencia de masa entre la fase estacionaria
y la fase móvil) (Facultad de Biología en
Química, 2015). Algunas ventajas de esta
técnica es su fácil adaptación a las
determinaciones cuantitativas exactas, su
idoneidad para la separación de especies no
volátiles o termolábiles y, sobre todo, su gran
aplicabilidad a sustancias que son de primordial
interés en la industria, en muchos campos de la
ciencia y para la sociedad en general.
(Repositorio Institucional de la Universidad de
Alicante).
Preparación de la fase móvil:
Primero se midió 1000 mL de H2O tipo I.
Luego, se añadió 700 mL del agua medida en
un beaker de 1000 mL y se llevó a agitación.
posteriormente se agregaron 20001,9 mg
fosfato monobásico de sodio al agua en
agitación. Al observar que el NaH2PO4 se
disolvió se agregaron los 300 mL restantes de
agua tipo I y se ajustó pH con ácido fosfórico
hasta lograr un pH entre 2,70 y 0,05. Commented [fl4]: 2,7 +/- 0,05
Posteriormente, se filtró la solución buffer en el
equipo de filtración de fase móvil y se llevó al
ultrasonido durante 10 min.

Teniendo clara la técnica mencionada con

anterioridad, se tiene como objetivo general de
la práctica el aplicar la cromatografía líquida de
alto desempeño (HPLC) para la
Preparación de la solución stock:
Para la preparación de una solución patrón de
100 mg/L se preparó en un balón aforado de 50
ml. Luego, se disolvió en fase móvil y se aforó
con la misma. Commented [fl5]: Cual patrón , qué cantidad?
Preparación de la curva de calibración:
1398483 20
Se calculó los microlitros requeridos de
solución stock para concentraciones de ácido 2097041 30
ascórbico de 5, 10, 20 y 30 uL/ml, los
volúmenes fueron 500,1000,2000 y 3000 uL 818084 Muestra con marca
comercial
respectivamente. Después, se adicionaron
dichos volúmenes en balones de 10 mL y se
aforaron con fase móvil. Posteriormente, se De acuerdo con los datos obtenidos en la
inyectaron de manera individual en viales con cromatografía se realizó la Gráfica 1,
el uso de jeringas y se llevó a él cromatógrafo. utilizando los datos de la Tabla 2, con el fin de
obtener la curva de calibración.
Preparación de la muestra:
Se pesaron 4 comprimidos de vitamina C y se
determinó el peso promedio de las tabletas.
Luego, se maceraron con ayuda de un mortero
y se pesó 0,0999 g de la muestra. Los 0,0999 g
pesados se llevaron a un vaso de precipitado y
se disolvió con 25 mL de fase móvil. Después,
se llevó a un matraz de 100 mL y se aforo con
fase móvil. Por último, se realizó una dilución
a partir de la solución anterior en un balón de
10 mL, se inyectó en un vial con ayuda de una
jeringa y se llevó al cromatógrafo. Gráfica 1. Curva de calibración para la
cuantificación de ácido ascórbico.
CÁLCULOS Y RESULTADOS Commented [fl6]: 36/40. No se especificó el valor de
Ahora bien, los respectivos cálculos para patrón tomado para construir curva de calibración.
hallar en la curva de calibración la
Tabla 1. Masas pesadas de las diferentes concentración de ácido ascórbico se realizó
preparaciones a partir de la ecuación 1 y 2.
Componente Masa
𝑦 = 𝑦𝑦 + 𝑦 (1)
Vitamina C 1583,1 mg
(promedio) 𝑦−𝑦
𝑦= 𝑦
(2)
Fosfato de Sodio 20001,9 mg

Muestra Vit. C 0,0999 g 818084 + 57214

𝑦=
72126
= 12,135 𝑦𝑦𝑦

Tabla 2. Valores obtenidos de los Este valor el cual viene tomado de una alícuota,
cromatogramas por HPLC. se debe multiplicar por el debido factor de
dilución como se ve a continuación:
Área bajo la curva Concentración en
ppm
12,135 𝑦𝑦𝑦 ∗ 0,1 𝑦 = 1,213 𝑦𝑦 (3)
291706 5
10𝑦𝑦
1,213 𝑦𝑦 ∗ = 25,282 𝑦𝑦 (4)
672089 10 0,48𝑦𝑦
Este valor en miligramos, representa la cantidad
de ácido ascórbico en la muestra pesada de
0,0999 g de la tableta de vitamina C. Con estos
valores se procede a calcular el valor
experimental para el ácido ascórbico presente
en una tableta con peso promedio de 1583,1 mg
con el siguiente cálculo:
25,282 𝑦𝑦 1583,1 𝑦𝑦
∗ = 400,65
99,9 𝑦𝑦 1 𝑦𝑦𝑦𝑦𝑦𝑦𝑦 1 𝑦𝑦𝑦𝑦𝑦𝑦𝑦
(5)
Finalmente, se realizo el porcentaje de error con
un valor de 500 mg de ácido ascórbico como el
valor teórico según lo reportado en el empaque
de las tabletas de vitamina C.
𝑦𝑦ó𝑦𝑦𝑦𝑦−𝑦𝑦𝑦𝑦
% 𝑦𝑦 𝑦𝑦𝑦𝑦𝑦 = 𝑦𝑦ó𝑦𝑦𝑦𝑦
∗ 100 (6)
500−400,65
∗ 100 = 19,87% (7)
500
DISCUSIÓN:
Durante la práctica se realizó la técnica de
cromatografía en fase reversa la cual es similar
a la cromatografía en capa fina. Sin embargo,
difiere en que la fase estacionaria es de
partículas de sílica químicamente modificadas
en este se caso se usó sílica C18, Esto convierte
a la fase estacionaria en una matriz apolar, Por
otra parte la fase móvil está compuesta de un
solvente polar en este caso fue un buffer con
fosfato/ácido fosfórico. Esta técnica también
recibe el nombre de cromatografía de
interacción hidrofóbica (HIC) el término HIC
es común cuando se habla de purificación de
proteínas y carbohidratos (Gartner & Restrepo,
1997).
Ahora bien durante la práctica se tuvo como
objetivo la cuantificación de vitamina C de un
comprimido farmacéutico por lo cual es de
importancia conocer su estructura molecular
como se observa en la figura 1 .
Figura 1 . Estructura molecular de la vitamina
C.
En la estructura de la Figura 1 se pueden
observar la cantidad de sustituyentes
hidroxilos, hidrógenos y oxígenos los cuales le
confieren a la molécula características de
origen polar, estas características van a ser de
vital importancia a la hora de realizar un
análisis cromatográfico. En este caso la elución
de la vitamina C será “rápida” en comparación
con compuestos apolares y esto es debido a su
alta afinidad con la fase móvil debido a los Commented [fl7]: 28/30
sustituyentes presentes en el analito, cabe
resaltar que al ser la fase estacionaria de origen
apolar no tendrá una interacción significativa
con el analito.
Por otra parte con los gráficos obtenidos del
HPLC se puede inferir que se usaron partículas
con diámetros pequeños por tanto se obtendrá
una menor altura equivalente de plato teórico
y por consecuencia una mayor eficacia en el
sistema, la anterior afirmación también se
puede observar en la ecuación de Van Deemter.
La fase móvil mantuvo una larga vida de
columna. Los resultados demostraron un
rendimiento satisfactorio y consistente del
método de HPLC. El análisis de regresión por
mínimos cuadrados utilizado para evaluar los
datos del rango de concentración indica una
excelente linealidad en el intervalo estudiado.
El R2 obtenido para este rango de concentración
de ácido ascórbico fue de 0.99% valor cercano
al uno, lo cual indica una relación con la ley de
Beer-Lambert.
La presencia de los otros ingredientes en las
formulaciones, no causó ninguna interferencia
con el pico de ácido ascórbico. El ácido
ascórbico se resolvió bien a partir de los otros
componentes de las formulaciones y el
producto potencial de degradación de la
vitamina C. Por lo tanto, el método es selectivo
para la vitamina C (Gartner & Restrepo, 1997).
analítica muy adecuada para la determinación
del ácido ascórbico.
Lo anterior se puede demostrar basado en el
valor de ácido ascórbico obtenido a partir de los
resultados, el cual fue 400,65 mg, siendo 500mg
los que se muestran en la etiqueta. A partir de
los datos anteriores se obtuvo un porcentaje de
error del 19,87% la fuente de error más común
en cromatografía es la irreproducibilidad en la
inyección de un volumen muy pequeño en la
cabeza de una columna.

CONCLUSIONES Commented [fl8]: 8/10

● Esta es una técnica efectiva para la
determinación de vitamina C en
preparados farmacéuticos.
● Los datos obtenidos se ajustan
correctamente a un modelo lineal
(r=0,99), por lo tanto, cumple con lo
predicho en la ley de Beer-Lambert.

BIBLIOGRAFÍA Commented [fl9]: 4/5

Facultad de Biología en Química. (2015).

Cromatografía Líquida de Alta Resolución
(HPLC). Pamplona: Universidad de Pamplona. Commented [fl10]: Esto es un libro? Revista?Autor?

Department of Health & Human Services -

USA. (2016). Datos Sobre Vitamina C.
National Institutes of Health, 1.

Gartner, D. M., & Restrepo, P. (3 de Marzo de

1997). DETERMINACIÓN DE VITAMINA A
POR CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE
ALTA EFICIENCIA (CLAE) EN
BIENESTARINA CRUDA. Revista
Colombiana de Química, 26(1), 40.