Universidad del Valle de México

Práctica 1.- Demostración de la actividad de la catalasa

Mosqueda Quintanar Andrea, Peláez Anguiano José Milton, Ornelas Godina Karen
Elizabeth, Méndez Mendoza Maricruz
Asignatura: Tecnología Enzimática
Licenciatura QFBT
Periodo 2019-2
Fecha de entrega: 12 de agosto 2019
Docente: Araceli Álvarez Cruz

Resumen: Se demostró la actividad catalasa de modelos vegetales y animales a través de la

corroboración de la reaccion de descomposicion del peroxido de hidrogeno realizada por dicha
enzima. De igual forma se observó su actividad enzimática sometiendo a la catalasa de cada
modelo de estudio a temperaturas de bajas y altas y a pH ácidos y alcalinos para evaluar su
actividad midiendo el tiempo de reacción.

Palabras clave: enzimas,catalasa, actividad enzimática.

Introducción
La catalasa es una enzima común, que se
encuentra en casi todos los organismos
vivos. Cataliza el peróxido de hidrógeno en
agua y oxígeno y protege a los organismos
de los radicales libres. También tiene usos
industriales para prevenir ciertos
contaminantes en los alimentos y como
desinfectante para lentes de contacto y un
agente de limpieza en algunos otros
productos.
La catalasa está constantemente en batalla
contra el efecto de los radicales libres en el
cuerpo. Transforma radicales nocivos de
peróxido en peróxido de hidrógeno que
luego se descompone en agua y oxígeno
Asimismo, la catalasa tiene uno de los
números más altos de rotación de todas las
enzimas; una molécula de catalasa puede
convertir millones de moléculas de peróxido
de hidrógeno en agua y oxígeno cada
segundo. (Chelikani, 2004)
La catalasa es un tetrámero de cuatro
cadenas de polipéptidos, cada una de más
de 500 aminoácidos de largo. Tiene cuatro
grupos hemo que contienen hierro que
permiten a la enzima reaccionar con el
peróxido de hidrógeno. (Boon, 2007).
El pH óptimo para la catalasa humana es
aproximadamente 7, y tiene un máximo
bastante amplio: la velocidad de reacción no
cambia apreciablemente entre pH 6,8 y 7,5.
El pH óptimo para otras catalasas varía entre
4 y 11 según la especie. La temperatura
óptima también varía según la especie.
La presencia de catalasa en una muestra
microbiana o de tejido puede demostrarse
agregando peróxido de hidrógeno y
observando la reacción. La producción de
oxígeno se puede ver por la formación de
burbujas. Esta prueba fácil, que se puede
ver a simple vista, sin la ayuda de
instrumentos, es posible porque la catalasa
tiene una actividad específica muy alta, que
produce una respuesta detectable, así como
el hecho de que uno de los productos es un
gas.
Planteamiento del problema
Estudiar la actividad de la catalasa a
diferentes temperaturas y pH, tomando el
tiempo de reacción de descomposición del
peróxido de hidrógeno.
Justificación
Las enzimas son catalizadores naturales de
importancia para la degradacion y sintesis
de sustancias, es por ello que el estudio de
las condiciones que pueden alterar su
funcionamiento son de importancia.
Objetivos
General:
1.-Reconocer las reacciones enzimáticas
Específicos:
1.-Identificar presencia de la enzima
catalasa en los tejidos animales y vegetales
2.-Observar cómo la enzima catalasa
degrada el agua oxigenada (peróxido de
hidrógeno) en oxígeno y agua.
3.-Identificar el efecto desnaturalizante del
calor y pH sobre la enzima.
Hipótesis
A temperaturas altas y a pH ácido la catalasa
se desnaturalizará, por consiguiente al
agregar peróxido de hidrógeno no habrá
reacción.
Metodología
1.-Acción de la catalasa
Se preparó el homogenado de cada uno de
los modelos vegetales y animales (cebolla,
rábano, espinaca, papa, seta, hígado y riñón
de res y de pollo) moliendo cada modelo en
una licuadora con agua, los pedazos
sobrantes fueron filtrados con una gasa.
Con un gotero en tubos de ensaye se colocó
de 4 a 5 gotas del homogenado de cada
modelo y se añadieron 3 gotas de peróxido
de hidrógeno, se midió el tiempo en el que
empezó a descomponer el peróxido de
hidrógeno hasta que se detuvo la reacción.
2.-Efecto de la temperatura sobre el
funcionamiento de las enzimas
Cinco tubos de ensaye numerados se
añadió 5 mL de muestra a cada uno; el tubo
uno se calentó a una temperatura de 80 °C
por 15 minutos, el tubo dos a 37°C por 15
min, el tubo tres se mantuvo a temperatura
ambiente, el tubo cuatro estuvo en hielo por
30 minutos y el tubo cinco estuvo en el
congelador por 30 minutos. Una vez
cumplidas las condiciones se añadió dos mL
de peroxido de hidrogeno y se tomo el
tiempo desde que empezó a descomponer el
peróxido de hidrógeno, hasta que terminó la
reacción.
3.-El efecto del pH sobre el funcionamiento
de las enzimas
Se rotularon tres tubos (A,B,C) y se
añadieron 3 mL de homogenado a cada
tubo, al tubo A se le añadieron 3 mL de HCl
3M, al tubo B se le añadieron 3 mL de NaOH
3M y el tubo C fue el tubo control, a cada
tubo se le añadió 3 mL de peróxido de
hidrógeno y se tomó el tiempo desde que
empezó la reaccion de descomposicion
hasta que terminó dicha reacción.
Después de la práctica:
a) ¿Que organismos podrían usarse
para esta prueba? La catalasa es
una enzima que poseen la mayoría
de las bacterias aerobias como
Staphylococcus Aureus, Escherichia
coli y Pseudomonas.
b) ¿Por que se preparó un homogenado
o se picaron las muestras? Para que
no hubieran residuos sólidos o
pedazos muy pequeños
c) ¿Por que no se añadió el peróxido de
hidrógeno directamente a los tejidos?
El agua oxigenada es producto
resultante de las reacciones
metabólicas y puede dañar a la
célula con una aparición de
efervescencia
d) ¿Que indican los resultados sobre la
fisiología de estos organismos?
e) ¿Cómo se relacionan la temperatura
y la actividad enzimática? La
velocidad de una reacción
enzimática incrementa al aumentar la
temperatura dentro de un rango
determinado, cuando esta alcanza su
valor máximo se denomina
temperatura óptima.
f) ¿Que le sucede a las enzimas
cuando se exponen a temperaturas
extremas (muy frías o calientes)? A
altas temperaturas las enzimas
comienzan a desnaturalizarse y la
actividad enzimática decrece hasta
anularse.
g) ¿Cómo afecta el pH en la actividad
enzimática? La mayoría de las
enzimas son sensibles a los cambios
de pH, para cada enzima habrá un
pH en el cual la conformación será la
correcta para la actividad catalítica al
cual se le llama pH óptimo.
h) Las enzimas del estomago funcionan
óptimamente a un pH de 2. ¿Cómo
afecta la digestión si el pH aumenta
a 4? La mayoría de las enzimas que
participan en la digestión son
sensibles al pH, el pH del estómago
en específico es ácido y ayuda a
inhibir la degradación de los
carbohidratos que se consumen y
ayuda por otra parte a la degradación
de las proteínas por lo que el pH del
estómago provoca la acción de la
enzima digestiva.
i) ¿De qué otras maneras se podría
explorar el funcionamiento de las
enzimas estudiadas en laboratorio?
j) ¿Puede mencionar otras enzimas
que actúan en nuestro cuerpo? Otra
de las enzimas que participan en
nuestro cuerpo son la lactasa, que
convierte la lactosa en glucosa, la
ureasa que cataliza la hidrólisis de la
urea, y las proteasas que digieren las
proteínas.
k) ¿Que efecto podria tener una fiebre
alta prolongada sobre el
funcionamiento de las enzimas?
l) Busque un ejemplo de una condición
médica que se deba al mal
funcionamiento de una enzima
Resultados

1.-Purwar N, McGarry JM, Kostera J,

Pacheco AA, Schmidt M. (2005) Interaction
of Nitric Oxide with Catalase: Structural and
Kinetic Analysis. Biochemistry.

2.- Boon EM, Downs A, Marcey D.(2007)

"Catalase: H2O2: H2O2 Oxidoreductase".
Catalase Structural Tutorial

Análisis de Resultados
3.- Chelikani P, Fita I, Loewen PC (2004).
Conclusiones
"Diversity of structures and properties among
catalases". Cellular and Molecular Life
Sciences.
Referencias
Anexos

Modelo t0 (s) tf (s) t descomposición (s)

Animal Higado de pollo 0.7 92.5 91.8

Riñón de pollo 0.7 160.79 160.09

Higado de res 1 22.74 21.74

Riñón de res 1 38.02 37.02

Vegetal Espinacas 0.1 56 55.9

Setas 0.1 52 51.9

Rábanos 0.1 40 39.9

Cebolla 10 68 58

Papa 8 58 50

Tabla 1. Acción de la catalasa

Modelo Temperatura t0 (s) t1 (s) t descomposición (s)

Animal Hígado de pollo -20 1.4 88.94 87.54

4 1.4 97.33 95.93

18 1.79 156.39 154.6

 36 1.79 128.79 127

80

Riñón de pollo -20 1.53 107.15 105.62

4 1.54 115.42 113.88

18 1.84 174.57 172.73

36 1.84 147.63 145.79

80

Hígado de res -20 0.3 79 78.7

4 2 42 40

18 0.15 41 40.85

36 1.5 75 73.5

80 20 117 97

Riñón de res -20 0.3 57 56.7

4 0.3 74 73.7

18 0.15 66 65.85

36 1 76 75

80

Vegetal Espinacas -20 0.01 168 167.99

 4 0.01 98 97.99

18 0.01 277 276.99

36 0.01 152 151.99

80 0.01

Setas -20 0.01 19 18.99

4 0.01 30 29.99

18 0.01 237 236.99

36 0.01 264 263.99

80 0.01

Rábano -20 0.01 344 343.99

4 0.01 439 438.99

18 0.01 298 297.99

36 0.01 284 283.99

80 0.01

Papá -20 15 1995 1980

4 5 2701 2696

18 2

36 5
 80 20

Cebolla -20 151 390 239

4 5 305 300

18 4

36 6

80 4

Tabla 2. Efecto de la temperatura sobre el funcionamiento de las enzimas

Modelo pH t0 (s) t1 (s) t descomposición

(s)

Animal Hígado de pollo Ácido 0

Alcalino 0.5 -0.5

Control 0.7 92.5 91.8

Riñón de pollo Ácido 0

Alcalino 2 25 23

Control 0.7 158.79 158.09

Hígado de res Ácido 1 40 39

Alcalino 0.1 46 45.9

Control 0.1 41 40.9

 Riñón de res Ácido 0

Alcalino 3 18 15

Control 0.1 66 65.9

Vegetal Espinacas Ácido 0

Alcalino 0

Control 0

Setas Ácido 0

Alcalino 0

Control 0

Rábano Ácido 0

Alcalino 20 160 140

Control 17 50 33

Papá Ácido 54 253 199

Alcalino 10 1690 1680

Control 8 209 201

Cebolla Ácido 0

Alcalino 0
 Control 0

Tabla 3. Efecto del pH sobre el funcionamiento de las enzimas