Journal of Photochemistry and Fotobiología B: Biología 102 (2011) 156-160

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Journal of Photochemistry and Fotobiología B: Biología

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Aumento de la tasa de movilidad y de células madre en la proliferación tigrina

Dugesia inducida por el diodo emisor de luz 880 nm
Hsia-Pai Patrick Wu una , Michael A. Persinger segundo , ⇑

información del artículo resumen

Historia del artículo:
Recibido el 2 de de junio de 2010
Recibido en revisado el Formulario 8
de noviembre de 2010 Aceptado el 9
de noviembre de 2010 Disponible en
Internet el 24 de noviembre de 2010
palabras clave:
Regeneración
fotobioestimulación Planaria
neoblast
Diodo emisor de luz Infrarrojo
cercano
Los efectos terapéuticos provocados por fotobioestimulación en el rango infrarrojo
cercano pueden estar asociados con un aumento de la tasa de proliferación de
determinados tipos de células. El presente estudio utilizó la luz comercial diodos
emisores de investigar los efectos de bajo nivel de radiación en el infrarrojo cercano
en la tasa de proliferación de las células madre en planaria amputado. Conjunto y
animales amputados fueron expuestas a iluminación ambiente diurna, la oscuridad, la
luz blanca, luz roja, o luz del infrarrojo cercano (880 nm). La irradiación fue
consistente para la duración de los experimentos y se proporciona usando 5 mm
comercial diodos emisores de luz ( 1,0 mW / m 2 en densidad de potencia y 0,01 J /
cm 2 en exposición radiante). En comparación con otros grupos planaria amputada
expuesta hasta el infrarrojo muestran una mayor movilidad por el 3er día de la
exposición ( F( 4,26) = 4.31,
p < 0,04, sol 2 = 41%). Mayores densidades de células madre se midieron en estos
gusanos 84 h después de la lesión ( F( 4,72) = 4,78, p < 0.01, sol 2 = 21%). Estos hallazgos
sugieren que las fuentes de luz no coherentes con powerdensities aproximadamente 1000
veces más bajos que los ajustes del láser de baja potencia contemporáneos siguen siendo
eficaces en la generación de efectos fotobioestimulación y de nuevas investigaciones
sobre la proliferación de células madre inducida por diodos emisores de luz del infrarrojo
cercano.

2010 Elsevier Todos los derechos reservados

estimulación correlativa de la producción mitocondrial de
ATP [9,10]
1. INTRODUCCION
Los efectos de la baja potencia de la radiación del
infrarrojo cercano (NIR) sobre los sistemas biológicos se
permite que el tejido irradiado o célula tipo para acelerar
han estudiado durante al menos 40 años [1] . radiación
funciones específicas [11] . las heridas producen colágeno
NIR en el intervalo de 650-900 nm puede iniciar una
más rápido muestran características locomotoras de
variedad de efectos terapéuticos, tales como aceleración
fibroblastos maduros
de la cicatrización de la herida [2,3] fibroblastos, la
[2,12] Y líneas de células cancerosas proliferan irradiados a
proliferación [3,4] Y la síntesis de colágeno [2,5] .
tasas más altas cuando se expone a la NIR [12,13]
Estudios recientes siguientes el desarrollo de diodos
emisores de luz (LEDs) mostraron efectos comparables
Sin embargo, en vivo estudios con sujetos porcinos y de rata
pueden ser provocados por las fuentes de LED no
han sido inconsistentes [14,15].
coherentes. Las respuestas más fiables han sido la
prevención de la mucositis oral y la atenuación de la
Para examinar los efectos de la radiación NIR sobre los
degeneración del nervio óptico inducida
sistemas biológicos en vivo, seleccionamos la planaria
experimentalmente [6-8].
turbellarian agua dulce. Las planarias son conocidos por su
notable capacidad para regenerar partes del cuerpo perdidas.
Este proceso de regeneración está dominada, en su etapa
NIR de irradiación da como resultado un aumento
inicial, por la proliferación de la célula planaria solamente
general de piscinas de energía disponibles. La
mitótico activamente, la neoblast pluripotentes [8,16,17] .
muestran cambios planaria en el comportamiento y la
actividad regenerativa en respuesta a NIR [18] . El
presente estudio fue diseñado para discernir los efectos
de baja potencia, no coherente, 880 nm de radiación NIR
en la regeneración comportamiento planaria y la
proliferación de células madre en vivo. planaria
Regenerating actuarán como un modelo de proliferación-
sesgada de la cicatrización de heridas, así como
proporcionar un ed simplifica en vivo plataforma para la
irradiación NIR.
2. Métodos
planaria tigrina Dugesia se obtuvieron de Suministros Carolina
Biología (Burlington, Carolina del Norte) y se mantuvo durante
2 meses antes del inicio de la experimentación para garantizar
la adaptación y la habituación al laboratorio. Las planarias
fueron alojados en envases de vidrio de 500 ml rellenos con
agua de manantial aireado (del presidente Choice, Brampton,
Ontario) después semanalmente, 1-H alimentaciones de
aproximadamente 2g de hígado bovino congelado. ambiente
diurno.
Iluminación fluorescente fue de aproximadamente 12:12. La
temperatura del agua se mantuvo entre 19 C y 21 C para la
extensión del experimento. Antes de la experimentación,
planarias se mueren de inanición para 4- 6 días para evitar la
contaminación debido a la digestión de los alimentos.
Se seleccionaron Los gusanos adultos de entre 1 y 2 cm
de longitud para la experimentación. Los animales se
colocaron en un bloque de hielo durante 30 s para la
inmovilización y la anestesia antes de cortar con una
cuchilla quirúrgica. Se realizaron cortes en el plano
transversal justo posterior a las aurículas. El fragmento
posterior lesionado se sometió al estudio. Los
especímenes bajo experimentación se mantuvieron en
recipientes de vidrio de 20 ml llenada con agua de
manantial aireado y sujeto a uno de cinco condiciones
experimentales.
Las condiciones consistieron en exposiciones a ya sea: (1)
de iluminación ambiente diurna, (2) la luz blanca, (3) la luz
roja, (4) de luz NIR, o en la oscuridad durante toda la
duración del experimento. A excepción de la condición
ambiental fluorescente (vivienda normal), planarias fueron
alojados en una caja oscura compartimentada con matrices
de 3 LEDs por condición de iluminación (100 mA, 1,5 V
bulbos, Perkin Elmer optoelectrónica, Salem, Massachusetts).
Cada uno de los tres diodos funcionar a 65 mW para una
potencia total de 195 mW por condición de iluminación. La
luz blanca se produjo usando indio-galio / itrio-aluminio-
granate (InGa / YAG) diodos, luz roja se produjo usando
arseniuro de galio-fósforo / galio-fósforo
(GaAs/GaP) 630 diodos nm, y NIR fue producida
usando galio-aluminio-arseniuro (GaAlAs) 880 diodos
nm. Las matrices de LED se colocaron 1 cm por encima
de los recipientes de vidrio experimentales. Los
diámetros de los recipientes experimentales fueron 5 cm.
Las densidades de potencia totales para las condiciones
LED fueron aproximadamente 1,2 mW/m2 según lo
medido por tanto un luxómetro y un tubo
fotomultiplicador. Sobre la base de los resultados de un
estudio piloto y la baja densidad de potencia relativa de
luces LED (en comparación con el típico 900W/m2 de
salida de los láseres no térmicos empleados en estudios
de bioestimulación NIR [5] ), Que razonó que un
paradigma de exposición 24 h/dia constante no sería excesivo
para la vitalidad de los gusanos.
2.1. la movilidad planaria
Treinta gusanos amputadas se midieron para la
movilidad, una vez cada post lesión 24 h. movilidad
Planarian fue probado en un 22 cm por 22 cm plato de
vidrio llenada con agua de manantial aireado hasta una
profundidad de 1,5 cm. Un único blanco InGa / YAG LED se
colocó en una esquina del plato con el haz de luz apuntado
a la parte inferior del plato de motivar a la planaria
fotofóbico a ocupar un área oscura. Las muestras para
ensayar se colocan en el plato 5 cm de ambos de los
bordes más cercanos a la luz blanca y observados durante 1
min. El desplazamiento, la distancia recorrida, y la ubicación
final de cada muestra después del período de 1-min se
registraron en cm. Los datos de ubicación de
desplazamiento y posición final permitieron que el
experimentador inferir la restauración de la fototaxis
negativa planaria clásica, mientras que la distancia recorrida
se utilizó para inferir la movilidad y la actividad general en
un nuevo entorno de campo abierto.
2.2. recuento de neoblastos
fi setenta y cinco gusanos amputadas se examinaron
histológicamente mediante microscopía óptica. Las muestras se
recogieron después de 84 h de tratamiento, entre los días 3 y 4
lesión poste. Los especímenes fueron fijados en etanol-
formaldehído-acético frío solución de ácido (72 parte de alcohol
etílico anhidro, 18 Parte destilada H20, cinco parte formaldehído
al 37%, cinco ácido acético glacial parte), procesados y
embebidos en parafina cera fin. Whole planaria se seccionaron a
lo largo del plano frontal en 2 l metro. Las rodajas se tiñeron
entonces con Harris' hematoxilina y eosina y se visualizaron bajo
un microscopio de luz [18] . Cuatro separada 10000 l metro 2
campos dentro del blastema de regeneración para cada muestra
fueron identificados y los neoblastos dentro de estos
campos cuantificada. Se utilizó el valor medio de estos
cuatro cargos para inferir la densidad de neoblastos por
10.000 metro 2 por espécimen.
2.3 Estadística
Unidireccional entre análisis sujeto de la varianza
(ANOVA) se utilizó para analizar los datos recogidos. El
nivel de significación se fijó en 0,05. Se utilizó el test post
hoc de Tukey para analizar fi cativos de una vía ANOVA
resultados significantes.
3. RESULTADOS
La movilidad de la regeneración planaria varió de
aproximadamente 4 cm en el día 1 a aproximadamente 8
cm en el día 7 después de la lesión. Para el día 4, la
distancia media recorrida por planarias regeneración fue
significativamente mayor (al 6 cm) que en días anteriores (
F( 6,N = 210) = 31,78, p < 0.01, sol 2 = 48%). El aumento de
la movilidad había logrado asíntota para el día 5 ( Figura 1
). También había un cambio significativo en el
desplazamiento y fi nal localización de las planarias
regeneración en el tiempo (Chi-cuadrado ( 6, N = 210) =
99.84, p < 0,01, Pearson R = 0,57). Antes de día 4,
planarias regeneración no fueron sensibles a la luz y se
mantuvo en torno al punto de entrega. Por día 5, la
regeneración de planarias localizada consistentemente
lejos de la fuente de luz ( Figura 2 ). El desplazamiento y la
localización no fue significativamente diferente a través de
condiciones de tratamiento.
 La única diferencia encontrada entre las condiciones era
la movilidad en el día 3. NIR irradiadas especímenes
recorrida ( Fig. 3 ) Significativamente más dentro de un
período de prueba 1-min que aquellos expuestos a luz
blanca o completa oscuridad ( F( 4,26) = 4.31

p < 0.01 sol 2 = 41%). Sin embargo, no hubo diferencias

estadísticamente significativas entre los grupos NIR y de

luz roja. Aunque los estudios experimentales sugieren que

las planarias enteros muestran una mayor movilidad bajo
irradiación NIR en comparación con todos los demás
grupos, este efecto no se observó en la regeneración de
las muestras después de 3 días.

El notable en fl punto de reflexión en la movilidad

medido y el desplazamiento en el día 4 de proceso de
regeneración de la planaria determinó el tiempo de
nuestro examen histológico de las muestras 84 h después
de la lesión. Un análisis de varianza indica que los
especímenes NIR expuestos contenían números
significativamente más altos de neoblast por unidad de
área en el blastema de regeneración ( Fig. 4 ) En
comparación con los que habían estado expuestos a otros
tratamientos ( F( 4,72) = 4,78,

p < 0.01, sol 2 = 21%). El aumento de aproximadamente

35% en neoblast proliferación 84 h después

de la lesión para los planaria expuestas-NIR fueron

cualitativamente evidentes bajo luz-microscopía ( Fig.

).
Figura 1. Gráfico de barra gráfica de la distancia recorrida por la
regeneración de planarias a través de los 7 días después de una
amputación. Se observó un aumento significativo en la movilidad
en el día 4 ( F( 6,
N = 210) = 31,78, p < 0.01, sol 2 = 48%) y estabilizado por día 5. Las
barras de error representan los errores estándar de la media.
 H.-PP Wu, MA Persinger / Journal of Photochemistry and Fotobiología B: Biología 102 (2011) 156-160

Figura 2. desplazamiento Planarian en los días 3, 4 y 5 después de la lesión. Las coordenadas están en centímetros. La fuente de luz se
encuentra en coordenadas ( 5, 5) y punto de entrega en (0, 0). El área sombreada representa el área de la localización planaria
considera que es insensible a la luz. Hubo un cambio significativo en la sensibilidad a la luz a través del tiempo (Chi-cuadrado ( 6, N =
210) =
99.84, p < 0,01, Pearson R = 0,57).

estudios que muestran LEDs tienen efectos

fotobioestimulación comparables a los láseres [19-21] .
estudios fotobioestimulación contemporáneas utilizando
láseres de baja potencia o LED han demostrado
numerosos efectos asociados con el aumento celular
proliferación, maduración, y la actividad [2,4,10] . Estos
efectos se han observado más consistentemente para
cultivos de osteoblastos fi broblastos y [4,22] y se han
atribuido a un aumento en la actividad mitocondrial
después de la estimulación luz en el rango infrarrojo
cercano [9,10,23] . A pesar de que in vitro

experimentos han demostrado ser fructífero para ambos

Fig. 3. planaria la movilidad en el día 3 después de la lesión. Cerca
de las muestras irradiadas infrarrojos viajaban de forma
significativa más allá de especímenes de luz irradiado blancos ( F(
4,26) = 4.31,
p < 0,04, sol 2 = 41%).
demostrando efectos photobiostimulatory y elucidar sus
mecanismos celulares,
en vivo Los estudios de mamíferos se han mantenido
relativamente escasa y contradictoria.
Resultados negativos de en vivo estudios pueden ser
atribuidas a diferencias en '' tuning '' (juego de resonancia)
de la radiación, la atenuación relativa de externamente
aplicado fotones NIR dentro de las estructuras profundas de
organismos grandes de volumen, o la mayor complejidad
de los sistemas animales enteros. Planaria puede ser un
modelo animal óptimo para estudiar los efectos de NIR
fotobioestimulación en animales intactos

[18] debido a su relativa '' transparencia '' y la tasa de

división celular rápida que en la mayoría de los sistemas de
células aumenta la sensibilidad a niveles sutiles de energías
incidentes [24,25] y da como resultado cualitativamente
diferentes consecuencias biológicas. El presente estudio
reveló que la radiación NIR de baja potencia induce
aumentos en la movilidad planaria y proliferación neoblast
en la tercera día de la regeneración. La no distinción entre
los efectos de la luz roja y la radiación NIR en la movilidad
planaria ilustra aún más la complejidad relacionada con la
medición de los efectos fotobioestimulación en todo el nivel
animal. Sin embargo, con el comportamiento simple,
medible y un solo tipo de células activamente mitótico y
pluripotente que es sensible a la radiación NIR, la planaria
proporciona un simple plataforma de todo el organismo a fi
ne sintonizar fotobioestimulación específico cs y aislar los
potenciales mecanismos biofísicos del proceso.

Fig. 4. Neoblast contar en el blastema 84 h después de la
lesión de regeneración. Cerca de muestras irradiadas
infrarrojos mostrado un aumento en la densidad neoblast
dentro 10000 l metro 2
campos muestreados ( F( 4,72) = 4,78, p < 0.01, sol 2 = 21%). 158
4. Discusión
El presente estudio indica que la proliferación neoblast
[18] también se puede reproducir mediante el uso de
fuentes no coherentes NIR de luz (880 nm) con
potenciadores densidades de alrededor de un 1,000 veces
menos que los láseres de baja potencia convencionales.
Esto apoya el creciente número de
Los mecanismos biofísicos para explicar el efecto fi
específica por las energías NIR sobre la proliferación de
células podría implicar la convergencia de las magnitudes a
nivel de la membrana. Con la potencia de alrededor de 10
NIR 3 W / m 2 empleada en nuestro estudio la energía
contenida dentro de una sección transversal simétrica de
membrana (10 nm de ancho) estaría en el orden de 10 19 J.
La energía asociada con la longitud de onda 880 nm (3,4 10
14 Hz) cuando se multiplica por la constante de Planck es 2.2
10 19 J. Este valor convergente sugiere un fenómeno de
resonancia potencial y está dentro de un factor de 10 de la
quantumof 2 10 20 J asociado withmaintaining el potencial
de membrana y las interacciones de adhesivo y procesos
cohesivos
[26] necesaria para la vitalidad celular y la división. Las
variaciones de intrínseco
 H.-PP Wu, MA Persinger / Journal of Photochemistry and Fotobiología B:
Biología 102 (2011) 156-160 159

tabla 1
Área de regeneración de blastema planaria a través del tiempo.
Área de regeneración después de la lesión
condición de blastema (mm 2)
tratamiento
Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6 Día 7

Ambiente 0,077 0,204 0,420 0,046 0,693 0,713 0,806

Blanco 0,052 0,190 0,360 0,052 0,587 0,703 0,793
rojo 0,060 0,159 0,415 0,037 0,638 0,661 0,728
NIR 0,078 0,165 0,409 0,032 0,629 0,652 0,703
Oscuro 0,070 0,168 0,441 0,037 0,575 0,588 0,721
+ 0,027 0,120 0,232 0,215
Promedio 0,039 0,087
cambiar
respecto al
día
anterior
se encontró ninguna significación a través de condiciones de
tratamiento. NORTE( condición) = 6.
requerida para que coincida con los dos coe fi cientes y el
orden de magnitud de este cuántica.

También hay Cosic de [27] modelo clásico y seminal que

ha estado bajo aplicado en los fenómenos biofísicos. Ella
predijo que la actividad de la proteína macromolecular y la
absorbancia de proteína de radiación electromagnética se
pueden predecir de novo a través de características de
resonancia inherentes de una proteína. Su modelo de
reconocimiento de resonancia de la caracterización de
proteínas consiste en la representación de secuencias de
aminoácidos como una serie numérica de de eléctrica cada
aminoácido

Fig. 5. sección histológica de la muestra de la herida blastema 84 h post

lesión planaria para la luz blanca irradiadas
(a), la oscuridad (b), y cerca grupos irradiados infrarrojos (c). Cerca de
las secciones irradiadas infrarrojos mostrado
un aumento en el número de neoblastos (flecha). Secciones se
redujeron a 2 l m y se tiñeron con hematoxilina y eosina
(Bar = 20 l metro).

vibraciones mecánicas o de frecuencia extremadamente

baja campos electromagnético fi alrededor de 10 Hz a partir
del organismo en sí podría producir la congruencia

potencial de pseudo. Se deriva de la energía de los
electrones deslocalizados dentro de cada aminoácido. La
serie numérica de seudo potenciales eléctricos se puede
visualizar en el dominio de la frecuencia mediante la
transformada de Fourier. Frecuencias características
reveladas a través del modelo de resonancia representarían
entonces recurrentes orientaciones espaciales de especí fi
cos potenciales eléctricos dentro de la estructura de la
proteína.
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prevención de la mucositis oral inducida en pacientes con
trasplante de médula ósea: un ensayo aleatorio, Blood 109
(2007) 2250 -2255.

La aplicación de procedimiento de comparaciones

espectrales transversales de Cosic al citocromo C, un
importante contribuyente a la función mitocondrial, y las
proteínas II citocromo C oxidasa, reveló una signi pico fi no
puede de interacción. Para la activación de las proteínas del
citocromo C por la estimulación láser, frecuencias
espectrales pico son 0,47 y 0,36 (utilizando su fórmula) que
corresponden a 498 y 650 nm, respectivamente. Sin
embargo la frecuencia espectral de pico para la interacción
entre el citocromo C y la citocromo oxidasa II muestra un
gran pico de amplitud alrededor de 0,27, que corresponde a
867 nm y está dentro del intervalo (teniendo en cuenta la
variabilidad intrínseca de medición y formas moleculares) a
880 nm.

Este estudio piloto y estudios antes también se mide el

área de la regeneración de blastema planaria ( tabla 1 ), Los
resultados de la que dan fe de la velocidad de regeneración
planaria bien establecida. Aunque la velocidad notable de la
regeneración planaria probable enmascarado NIR efectos a
nivel de organismo de comportamiento y todo, el presente
estudio y otros tratados [18] han demostrado que
fotobioestimulación de baja potencia puede aumentar la
proliferación de células madre planaria aproximadamente 4
días después de la lesión inicial. radiación NIR puede afectar
a la etapa de formación blastema proliferativa de
regeneración planaria y apuntar a la actividad de las células
typeundergoinghighmitotic. proceso Sucha sería análoga a
la proliferación de fi broblastos visto en la fase proliferativa
de la cicatrización de heridas. Otros estudios se centraron en
la biología molecular de neoblastos están garantizados para
la generalización de la proliferación de células madre
inducida por la radiación NIR en cultivos de células humanas.
Los efectos beneficiosos de la irradiación NIR sobre los
sistemas biológicos pueden ser dependientes de las
propiedades de las células en lugar de una propiedad
intrínseca que produce la salud ubicua o salubridad.

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