Determinación de la concentración por colorimetría.

Determination of the concentration by colorimetry.

Leidy Daniela Garzón Puentes¹, Juan Camilo Barreiro Prada¹
Universidad nacional de Colombia. Facultad de Ingeniería. Departamento de Ingeniería Química. Bogotá.
legarzonp@unal.edu.co; jbarreiro@unal.edu.co

Resumen

Teniendo en cuenta fundamentos teóricos como la capacidad de las moléculas para absorber luz y
almacenarla en forma de energía interna, el presente informe evidencia como se puede determinar la
concentración de una disolución con un color característico por medio de la colorimetría, un método
que cuantifica la percepción del color emitido por un cromóforo de una molécula, en este caso, azul
de metileno, haciendo uso del espectrofotómetro, instrumento que permitió calcular la cantidad de luz
que refleja una muestra en una serie de intervalos de longitud de onda, datos necesarios para la
construcción de gráficas que relacionan cada una de las medidas de forma precisa basadas en la ley
Beer-Lambert.

Palabras clave: Espectrofotómetro; Absorbancia; Color; Cuantificación.

Abstract

In consideration of theoretical fundaments as the capacity of molecules for light absorption and save
it as internal energy, the next report shows how it can be determine the concentration of a dissolution
with a characteristic color within a colorimetric analysis, a method that quantify the perception of color
emitted by a chromophore of a molecule, in this case, methylene blue, using an spectrophotometer, a
tool which let us calculate the quantity of reflected light in a sample in an interval of wavelength,
necessary data for the construction of graphics that relate each one of the measurements in a precise
way based on Beer-Lambert Law.

Keywords: Spectrophotometer; Absorbance; Color; Quantification.

Introducción

En la vida cotidiana interactuamos con muchos materiales, los cuales, en su mayoría, son mezclas
homogéneas, es decir, sus componentes están entremezclados de manera uniforme a nivel molecular.
A estas mezclas se les denomina disoluciones. En una disolución hay un componente en mayor
proporción, calificado como disolvente y a los demás como solutos. Estas se pueden encontrar en los
diferentes estados físicos de la materia, por ejemplo, una aleación (en estado sólido), el plasma
sanguíneo (en estado líquido) y el aire (en estado gaseoso). En este caso nos enfocaremos en estudiar
una disolución acuosa en la que el soluto es un sólido y el disolvente es agua [1].

La proporción de los componentes de una mezcla puede variar, por consiguiente, cuando la cantidad
de soluto disuelto es relativamente alta, se dice que es una disolución concentrada, mientras que, una
dilución es una disolución que parte de una solución patrón y que su concentración ha sido disminuida
agregándole más disolvente.

Una característica importante de las sustancias es la solubilidad, que es la cantidad de las mismas que
puede ser disuelta en un determinado volumen de disolvente y esta puede verse afectada por factores
como la temperatura, entre otros. En este orden de ideas, existen diferentes tipos de disoluciones, según
la capacidad del disolvente para disolver el soluto, se habla de una disolución saturada, cuando se ha
diluido la cantidad máxima de soluto posible a ciertas condiciones, a diferencia, una disolución
insaturada, contiene la mínima cantidad de soluto a disolver. Por último, la disolución sobresaturada,
contiene más soluto del que el disolvente es capaz de disolver. Estas últimas no son estables, debido a
los fuertes choques intermoleculares que hacen que el soluto vuelva a ser sólido, de esta manera,
después de un determinado tiempo, el soluto se separa de la disolución y forma cristales. Dependiendo
de la concentración del soluto se determinan la mayor parte de las propiedades de las disoluciones [2].

La colorimetría es un método que permite determinar la concentración de una disolución en la que el

soluto posee un color característico. Este se basa la capacidad de las moléculas para absorber
radiaciones del espectro visible, dada por los cromóforos, una parte de la molécula responsable de la
absorción de las longitudes de onda dentro del espectro visible que determina las longitudes de onda
reflejadas y así el color del objeto. Este método considera la ley Beer-Lambert que expresa como la
materia absorbe la luz y que la absorbancia es directamente proporcional a la concentración de la
especie absorbente. Es importante destacar que esta ley aplica únicamente para las disoluciones
diluidas, mientras que, en disoluciones concentradas la absortividad molar varia con la concentración
debido a fenómenos de dispersión de la luz. [3] Esta ley está definida por Ec 1.

𝐴 = 𝑎∗𝑏∗𝑐 (1)

Donde A es la absorbancia de la muestra, a es la constante de absortividad molar, b es la distancia en

cm que atraviesa la luz por la solución (medida de la celda), y c es la concentración de la muestra [4].

La curva espectral y la curva de calibración se usan frecuentemente en colorimetría, puesto que el

primero es una gráfica que relaciona la absorbancia de una disolución en función de la longitud de
onda medida por el espectrofotómetro, y la segunda es una grafica que permite determinar la
concentración de una muestra, ya que, relaciona la absorbancia en función de la concentración de una
disolución.

La finalidad de este informe es evidenciar la aplicación del método por colorimetría para determinar
la concentración de una disolución de azul de metileno llevando a la práctica los fundamentos
aprendidos.

Materiales y métodos

A partir de una disolución patrón de concentración 26 ± 2 ppm cuyo soluto fue azul de metileno
(MATHESON COLEMAN & BELL, USA) se prepararon diferentes diluciones y aplicando el método
por colorimetría se midieron sus respectivas absorbancias usando un espectrofotómetro (Mapada
Instruments, China) con el fin de construir una curva de calibración para así determinar la
concentración de una disolución problema.

Se prepararon cinco diluciones cuyas alícuotas oscilan entre 1,000 y 5,000 mL de la disolución patrón,
estas fueron medidas con una bureta 25,000 ± 0,075 mL (Brand, Alemania), para posteriormente
aforarlas en un balón 10,000 ± 0,025 mL (LMS, Alemania) completando el afore con agua destilada.

Se tomó una muestra de cada dilución para almacenarla en una celda y medir la absorbancia con el
espectrofotómetro, teniendo en cuenta su calibración con el blanco de reactivo, el cual es una
disolución que no contiene el soluto que se va a evaluar, en este caso es agua destilada.

Con los datos recolectados se construyó la curva espectral para una dilución de azul de metileno. De
la cual se extrajo la longitud de onda donde la absorbancia es mayor y con esta longitud se mide la
absorbancia para las diluciones restantes y a partir de estos datos se construye la curva de calibración.
Resultados y discusión

Teniendo en cuenta que la concentración es la relación entre el número de moles del soluto y el
volumen en litros de la disolución, cuando diluimos una disolución agregándole más disolvente, la
cantidad de soluto presente no cambia; no obstante, el volumen y la concentración de dicha disolución
si cambian, la concentración disminuye porque las mismas moles de soluto se dividen entre más litros
de solución [5]. Definido en Ec 2.

𝑉𝑖 ∗ 𝐶𝑖 = 𝑉𝑓 ∗ 𝐶𝑓 (2)

En función de lo anterior, en la Tabla 1. se muestran los valores de las alícuotas tomadas a partir de la
disolución patrón y sus respectivas concentraciones, donde se tuvo en cuenta la propagación de la
incertidumbre y las cifras significativas para cada medida.

Tabla 1. Concentración de cada alícuota.

Alícuota (mL) Concentración (ppm)

1,000 ± 0,075 2,6 ± 0,3
2,000 ± 0,075 5,2 ± 0,4
3,000 ± 0,075 7,8 ± 0,6
4,000 ± 0,075 10 ± 1
5,000 ± 0,075 13 ±1

Se midió la absorbancia del azul de metileno en diferentes longitudes de onda para realizar la curva
espectral. (Ver Figura 1.)

1,500
1,400
1,300
1,200
1,100
1,000
Absorbancia

0,900
0,800
0,700
0,600
0,500
0,400
0,300
0,200
0,100
0,000
320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720
Longitud de onda (nm)

Figura 1. Curva espectral disolución azul de metileno 7,8 ± 0,6 ppm.

En Figura 1. Se puede observar que 660 nm es la longitud de onda en la cual la absorbancia es mayor,
y en esta longitud se midió la absorbancia de las disoluciones restantes. A partir de estos datos, se
construyó la curva de calibración. (Ver Figura 2.)

2,400
2,200
2,000
1,800
Absorbancia

1,600
1,400
1,200
1,000
0,800 y = 0,16x + 0,114
R² = 0,9979
0,600
0,400
0,200
0,000
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Concentración (ppm)

Figura 2. Curva de calibración disoluciones azul de metileno.

Analizando la anterior figura se puede evidenciar que lo postulado por la Ley Beer-Lambert es
correcto, puesto que en principio la pendiente de la gráfica es positiva, a medida que la concentración
aumenta, la absorbancia también aumenta de forma lineal.

Al estudiar los datos obtenidos teniendo en cuenta las limitaciones de la ley, la concentración mas alta
entre las disoluciones es 13 ± 1 ppm. Si rechazáramos este dado por ser el mas alto, el coeficiente de
correlación tendría que subir, pero para este caso no fue así, bajó (Ver Figura 3.), con lo que se puede
afirmar que el dato es necesario para la regresión y que a pesar de tener la concentración mas alta, la
ley lo acoge.

2,000
1,800
Absorbancia

1,600
1,400
1,200
1,000
0,800
0,600
0,400 y = 0,1654x + 0,1014
0,200
0,000 R² = 0,996
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Concentración (ppm)

Figura 3. Curva de calibración descartando la concentración más alta.

El valor de la absorbancia de la muestra problema fue 1.319 ± 0.002, se puede despejar la
concentración (x) al reemplazar este valor en la ecuación de la gráfica, cuyo resultado es 7.5 ppm. Al
comparar este valor hallado experimentalmente con el valor teórico dado (7.00 ppm), el porcentaje de
error es 7.1%, este es un porcentaje elevado con lo cual podemos afirmar, en primer lugar, que la falta
de experiencia por parte de las personas que prepararon las disoluciones juega un papel fundamental,
puesto que, no tenían los conocimientos básicos del manejo de los instrumentos, como la bureta y esto
complicó y altero los resultados anteriormente expuestos. En segundo lugar, la mala calibración del
espectrofotómetro también influye, puesto que es importante ajustar el instrumento e iniciar la
absorbancia en cero, para así no tener en cuenta los datos medidos de las anteriores muestras.

Conclusiones

De la practica realizada, se puede concluir que:

A partir de los resultados obtenidos, se comprobó que la relación entre la absorbancia y la

concentración es directamente proporcional, ya que, con la ecuación de la curva de calibración se pudo
observar que la pendiente (0,16) es positiva, porque a medida que aumenta la concentración, la
absorbancia también aumenta.

Las curvas de calibración son una buena forma de recolectar datos para determinar de forma más
precisa la concentración de una disolución problema.

Referencias

[1] Brown, T. L.; LeMay H. E.;Bursten B. E.; Burdge J. R. (2004). Química la ciencia central. Pearson
Prentice Hall. 9na Edición. Estados Unidos. Pp 484

[2] Chang, R (2010) Química. Mc Graw Hill. 10ma Edición. China. pp 514.

[3] Díaz, N. A.; Bárcena R, J.A.; Fernández R, E.; Galván C, A.; Novo, J.J.; Peinado P, J.; Meléndez
V, F.T.; Túnez F, I. (2010). 8. Espectrofotometría: Espectros de absorción y cuantificación
colorimétrica de biomoléculas. Universidad de Córdoba. Departamento de Bioquímica y
Biología molecular. Córdoba, España. pp 4. Recuperado de:
https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETRIA.pdf

[4] Trujillo, C. A.; Sánchez R, J.E. (2007) Técnicas y medidas básicas en el laboratorio de química.
Universidad Nacional de Colombia. Unibiblos, Bogotá, Colombia. pp. 186.
[5] Whitten K.; Davis, R.E.; Peck, M.L.; Stanley, G.G. (2015). Química. Cengage Learning Editores.
10ma Edición. Estados Unidos. Pp 102