SANCHEZ NICOLAS – VILLAMIZAR TATIANA-CASTRO DANIEL-MORA KAROL

ELECTROFORESIS DE PROTEINAS

ELECTROFORESIS DE PROTEINAS
SANCHEZ NICOLAS – VILLAMIZAR TATIANA-CASTRO DANIEL-MORA KAROL

RESUMEN
La electroforesis es una técnica que permite la separación de las proteínas de acuerdo a sus
características físicas. En el frijol se han reportado () proteínas y se han clasificado del 14 al 33%
aminoácidos como la lisina, la fenilalanina y la tirosina; en cambio para el haba se han reportado ()
proteínas. Según el método utilizado en la práctica se obtienen 5 bandas de frijol que están en un peso
molecular () y en el haba se obtienen 12 bandas….
PALABRAS CLAVE
ABSTRACT
KEYWORDS

INTRODUCCION Luego de realizado la preparación del gel de

MATERIALES Y MÉTODOS
Preparación de los geles de acrilamida
El inicio de la práctica consta de la preparación
de la mezcla de los geles de electroforesis,
iniciando con la parte de preparación del gel
de separación, para esto se prepara una
concentración de 10% acrilamida en un vaso
de precipitado y con ayuda de la micropipeta
agregamos los reactivos en los volúmenes
respectivos, 1,90 mL de agua destilada, 1,70
mL de acrilamida / bis acrilamida al 30%, 1,30
mL de Buffer Tris 1.5 M pH 8.8 M, 50,0 μL de
SDS al 10%, 50,0 μL de Persulfato de Amonio
al 10%, 2,00 μL de TEMED, la solución debe
estar bien mezclada para luego verterlas entre
los vidrios, por último se añade 50,0 μL de
isopropanol al 10% realizando un barrido por
todo el gel con el fin de retirar todas las
burbujas, dejar polimerizar por 30 min
separación se procede con el gel de
concentración, para el cual se utilizó un gel de
poliacrilamida al 5% agregando con la
micropipeta los reactivos en los volúmenes
respectivos, 2,10 mL de agua destilada, 0.5 mL
de acrilamida / bis acrilamida al 30%, 0,380
mL de Buffer Tris 0.5 M pH 6,8 M, 30,0 μL de
SDS al 10%, 30,0 μL de Persulfato de Amonio
al 10%, 3,00 μL de TEMED, una vez realizado
se agrega sobre el gel de separación para llenar
el pozo entre ambos vidrios, posteriormente se
debe colocar el peine que formara los pozos
donde se ubicaran las muestras
Preparación de las muestras
Previamente se realizaron los cálculos
correspondientes para cada una de las
muestras de harina, para la y se agregaron las
cantidades calculadas a los 7 tubos Eppendorf
a cada una de las muestras se les agrego la
solución buffer carga 4X correspondiente en
cada una de las muestras y se llevaron los
tubos Eppendorf a baño maría a 92°C durante
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aproximadamente 3 minutos, pasado el tiempo
las muestras fueron puestas en hielo, hecho
esto las muestras ya están listas para la
electroforesis
Electroforesis
Teniendo las muestras listas para la
electroforesis, estas fueron llevadas a la
cámara de electroforesis ubicando cada una de
las muestras en los pozos respectivos, también
se utilizó una muestra de solución patrón de
peso molecular, luego se colocó la tapa de la
cámara de electroforesis y se conectó a la
fuente de poder a 110 V y se dejó por 24 horas,
esto con el fin de dejar caer hasta el fondo el
RESULTADOS
Cálculos respectivos para hallar los micro-
litros de muestra de harina de frijol y la
cantidad de buffer a emplear para la muestra
que se dispondrá en los geles de acrilamida:
Inicialmente se hace uso de la concentración
hallada en el laboratorio previamente y se
realiza la conversión a unidades de micro-
gramo sobre micro-litro
𝑚𝑔 1000𝜇𝑔 1,00𝑚𝐿 𝜇𝑔
13,3 ⋅( )⋅( ) = 13,3
𝑚𝐿 1,00𝑚𝑔 1000𝜇𝐿 𝜇𝐿
Posteriormente se divide la cantidad que
especifica el procedimiento de migro-gramos
a sembrar en los geles por el resultado previo
de la concentración en micro-gramo sobre
micro-litro para hallar de esa manera la
cantidad de muestra de harina de frijol
60,0𝜇𝑔
𝜇𝑔 = 4,51𝜇𝐿 ≈ 5,00𝜇𝐿 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
13,3 𝜇𝐿
Al resultado obtenido debe realizarse el
producto con 4/3 para hallar el resultado
aproximado de buffer carga a emplear, ya que
se utiliza buffer carga x4 este resultado debe
ser multiplicado por cuatro para ser el
resultado final a emplear
4
4,51𝜇𝐿 ⋅ = 6,01𝜇𝐿
3
ELECTROFORESIS DE PROTEINAS
azul de bromofenol, finalmente se tomó el gel
y se llevó a un recipiente con una solución de
tinción de azul de Coomassie, al estar
desteñido se procedió a tomar el registro
fotográfico en el cual se evidencia las bandas
de proteínas para su respectivo análisis.
6,01𝜇𝐿
= 1,50𝜇𝐿 ≈ 2,00𝜇𝐿 ⋅ 4 = 8,00𝜇𝐿
4
Finalmente se obtiene 5,00µL de muestra de
harina de frijol y 8,00 µL de buffer carga para
la muestra que se utilizó en los geles de
acrilamida
Cálculos respectivos para hallar los micro-
litros de muestra de harina de haba y la
cantidad de buffer a emplear para la muestra
que se dispondrá en los geles de acrilamida:
De igual forma se hace uso de la concentración
hallada en el laboratorio previamente y se
realiza la conversión a unidades de micro-
gramo sobre micro-litro
𝑚𝑔 1000𝜇𝑔 1,00𝑚𝐿 𝜇𝑔
10,1 ⋅( )⋅( ) = 10,1
𝑚𝐿 1,00𝑚𝑔 1000𝜇𝐿 𝜇𝐿
A continuación se divide la cantidad que
especifica el procedimiento de migro-gramos
a sembrar en los geles por el resultado previo
de la concentración en micro-gramo sobre
micro-litro para hallar de esa manera la
cantidad de muestra de harina de haba
60,0𝜇𝑔
𝜇𝑔 = 5,94𝜇𝐿 ≈ 6,00𝜇𝐿 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
10,1 𝜇𝐿
Con este resultado hallado se procede a
realizar el producto con 4/3 para encontrar el
resultado aproximado de buffer carga a
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ELECTROFORESIS DE PROTEINAS

emplear, ya que se utiliza buffer carga x4 este Los resultados entonces demuestran que se
resultado debe ser multiplicado por cuatro para obtiene 6,00µL de muestra de harina de frijol
ser el resultado final a emplear y 8,00 µL de buffer carga para la muestra que
se empleó en los geles de acrilamida
4
5,94𝜇𝐿 ⋅ = 7,92𝜇𝐿
3
7,92𝜇𝐿
= 1,98𝜇𝐿 ≈ 2,00𝜇𝐿 ⋅ 4 = 8,00𝜇𝐿
4

Muestra Frijol Lenteja Haba Garbanzo MPM Haba Girasol Frijol

N° de Columna 1 2 3 4 5 6 7 8
𝑅𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 (𝑐𝑚) 8,80 8,80 8,70 8,70 8,70 8,80 8,80 8,80
𝑅1 (𝑐𝑚) 2,50 2,70 2,70 2,60 2,0 2,60 2,60 2,60
𝑹𝒇 = 𝑹𝟏 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 0,280 0,310 0,310 0,300 0,230 0,300 0,300 0,300
𝑅2 (𝑐𝑚) 3,20 2,90 3,10 3,60 2,50 3,50 4,40 3,20
𝑹𝒇 = 𝑹𝟐 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 0,360 0,330 0,360 0,410 0,290 0,400 0,500 0,360
𝑅3 (𝑐𝑚) 4,75 5,00 3,60 4,50 4,50 4,40 4,70 5,35
𝑹𝒇 = 𝑹𝟑 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 0,540 0,570 0,410 0,520 0,520 0,500 0,530 0,610
𝑅4 (𝑐𝑚) 7,30 5,20 4,50 5,00 6,10 5,00 5,20 7,30
𝑹𝒇 = 𝑹𝟒 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 0,820 0,590 0,520 0,570 0,700 0,570 0,590 0,830
𝑅5 (𝑐𝑚) 8,00 6,80 4,70 5,70 7,60 7,90 6,80 8,10
𝑹𝒇 = 𝑹𝟓 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 0,910 0,770 0,540 0,650 0,870 0,900 0,770 0,920
𝑅6 (𝑐𝑚) - 7,30 5,00 6,90 - 8,30 7,10 -
𝑹𝒇 = 𝑹𝟔 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 - 0,820 0,570 0,790 - 0,940 0,810 -
𝑅7 (𝑐𝑚) - 8,10 5,70 7,10 - 8,50 8,20 -
𝑹𝒇 = 𝑹𝟕 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 - 0,920 0,650 0,820 - 0,970 0,930 -
𝑅8 (𝑐𝑚) - - 6,80 7,90 - - - -
𝑹𝒇 = 𝑹𝟖 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 - - 0,780 0,910 - - - -
𝑅9 (𝑐𝑚) - - 7,10 8,20 - - - -
𝑹𝒇 = 𝑹𝟗 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 - - 0,820 0,940 - - - -
𝑅10 (𝑐𝑚) - - 7,90 - - - - -
𝑹𝒇 = 𝑹𝟏𝟎 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 - - 0,910 - - - - -
𝑅11 (𝑐𝑚) - - 8,20 - - - - -
𝑹𝒇 = 𝑹𝟏𝟏 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 - - 0,940 - - - - -
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ELECTROFORESIS DE PROTEINAS

Muestra Arveja Arveja Lenteja Haba Girasol MPM Frijol Haba Arveja Garbanzo
N° de Columna 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
𝑅𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 (𝑐𝑚) 8,80 8,80 8,70 8,70 8,70 8,70 8,70 8,60 8,60 8,50
𝑅1 (𝑐𝑚) 2,60 2,60 2,60 2,60 4,40 2,40 2,50 2,50 2,60 2,50
𝑹𝒇 = 𝑹𝟏 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 0,300 0,300 0,300 0,300 0,510 0,280 0,290 0,290 0,300 0,290
𝑅2 (𝑐𝑚) 2,80 2,80 2,90 3,50 4,70 4,40 3,20 4,20 3,40 3,30
𝑹𝒇 = 𝑹𝟐 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 0,320 0,320 0,330 0,400 0,540 0,500 0,370 0,490 0,400 0,390
𝑅3 (𝑐𝑚) 3,50 3,50 3,60 4,50 5,20 6,10 5,30 4,30 3,60 4,70
𝑹𝒇 = 𝑹𝟑 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 0,400 0,400 0,410 0,520 0,600 0,700 0,610 0,500 0,420 0,550
𝑅4 (𝑐𝑚) 5,20 5,20 4,50 5,00 6,80 7,70 7,40 4,70 5,00 6,50
𝑹𝒇 = 𝑹𝟒 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 0,590 0,590 0,520 0,570 0,780 0,890 0,850 0,550 0,580 0,760
𝑅5 (𝑐𝑚) 6,20 6,20 4,90 5,60 - - 8,00 5,00 6,80 6,80
𝑹𝒇 = 𝑹𝟓 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 0,700 0,700 0,560 0,640 - - 0,920 0,580 0,790 0,800
𝑅6 (𝑐𝑚) 6,90 6,90 5,20 6,80 - - - 6,70 7,00 7,60
𝑹𝒇 = 𝑹𝟔 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 0,780 0,780 0,600 0,780 - - - 0,780 0,810 0,890
𝑅7 (𝑐𝑚) 7,10 7,10 6,80 7,10 - - - 7,00 7,40 8,00
𝑹𝒇 = 𝑹𝟕 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 0,810 0,810 0,780 0,820 - - - 0,810 0,860 0,940
𝑅8 (𝑐𝑚) 7,50 7,50 7,20 7,90 - - - 7,80 7,90
𝑹𝒇 = 𝑹𝟖 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 0,850 0,850 0,830 0,910 - - - 0,910 0,920
𝑅9 (𝑐𝑚) 8,10 8,10 7,60 8,20 - - - 8,10 -
𝑹𝒇 = 𝑹𝟗 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 0,920 0,920 0,870 0,940 - - - 0,940 -
𝑅10 (𝑐𝑚) - - 8,00 - - - - - -
𝑹𝒇 = 𝑹𝟏𝟎 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 - - 0,920 - - - - - -

[3]http://iris.paho.org/xmlui/bitstream/
DISCUSION handle/123456789/14825/s3n3p185.p
df?sequence=1

CONCLUSIONES [4]https://revistas.unal.edu.co/index.p
hp/acta_agronomica/article/download/
REFERENCIAS: 15381/16165
[1]
[5]
http://fuente.uan.edu.mx/publicacione
https://www.edimeco.com/component/
s/03-08/1.pdf
phocadownload/category/1-
[2] publico?download=231:la-
http://www.fcb.uanl.mx/IDCyTA/files/v electroforesis-de-proteinas-mas-que-
olume2/3/1/12.pdf una-prueba-de-laboratorio
[6]
https://es.scribd.com/document/34660
 SANCHEZ NICOLAS – VILLAMIZAR TATIANA-CASTRO DANIEL-MORA KAROL
ELECTROFORESIS DE PROTEINAS

4468/Tabla-Del-Valor-Nutricional-Del-
Frijol
[7]
https://www.composicionnutricional.co
m/alimentos/HARINA-DE-HABA-5
[8]
http://repository.ut.edu.co/bitstream/0
01/1251/1/RIUT-FBA-spa-2012-
Caracterizaci%C3%B3n%20fisicoqu
%C3%ADmica%20y%20nutricional%
20de%20la%20harina%20de%20frijol
%20caup%C3%AD%20%28Vigna%2
0Unguiculata%20l.%29%20cultivado
%20en%20el%20departamento%20d
el%20Tolima.pdf