PRÁCTICA N° 3 SEMANA N° 3

INSTRUMENTACIÓN: COLORIMTRÍA
La Colorimetría: es el análisis de la concentración de una muestra por el color que presenta.
Todos hemos tenido la experiencia de valorar la concentración de sustancias coloreadas en
solución, por observación directa, una taza de café o té, un vaso de refresco, son apreciados de
esa manera.
El examen se fundamenta en la mayor o menor absorción de luz de acuerdo al mayor número de
moléculas y tonalidad, dependerá de la capacidad de absorber una u otra longitud de onda de
luz, específicamente. La foto colorimetría manipula las variables de este fenómeno controlando
la luz incidente proveniente de un foco luminoso y su pureza, de modo tal que solo incida aquella
luz que es específicamente absorbida por la partícula que medimos.

Gráfico: Espectro de luz

Los cuerpos luminosos como el sol o las lámparas eléctricas emiten un gran espectro
electromagnético que comprende amplias longitudes de onda, de las cuales muy pocas
corresponden al espectro visible. En el gráfico anterior se aprecian todas las radiaciones
electromagnéticas conocidas.
Los cuerpos coloreados, absorben luz de determinada longitud de onda y reflejan el resto del
espectro luminoso visible e invisible (colores complementarios). Esta luz reflejada es la que
observamos como color propio del cuerpo coloreado. No interesa particularmente los colores que
absorbe la solución que queremos medir. La selectividad de absorción que queremos medir. La
selectividad de absorción de una partícula por una longitud de onda se basa en el hecho de que
cada longitud de onda de luz corresponde a un distinto nivel de energía, y para excitar los
electrones de cada partícula necesitamos un particular nivel de energía.
Si consideramos que cada molécula absorbe luz de acuerdo a la concentración en que se
encuentre dentro de la solución, a mayor absorción de luz y menor luz trasmitida. Estos factores
están considerados en la ley de Lambert y Beer:

Log Io/It = e.l.c

Donde: Io = Luz incidente, It = Luz transmitida, C = concentración, L = longitud de paso, e =
constante.
FOTOCOLORIMETRIA – ESPECTROFOTOMETRIA
La fotocolorimetría es la medida de la luz absorbida por una solución mediante un aparato que
es un fotocolorímetro. El equipo consta de una fuente de luz artificial, un monocromador que
separa exclusivamente luz de una sola longitud de onda (la que sea preferente para la medida),
un recipiente o tubo de vidrio (que alberga la solución a medir), una célula fotoeléctrica que
transforma la luz trasmitida en corriente eléctrica y una unidad de medida de la corriente eléctrica
o galvanómetro. La calificación de colorímetro o espectrofotómetro depende del monocromador,
sí éste es un filtro tendremos un fotocolorímetro, pero si es un prisma, o cualquier aditamento
que proporcione luz de diversas longitudes de onda tendremos un espectrofotómetro.

Los fotocolorímetros y los espectrofotómetros reportan sus resultados bajo dos formas:
absorbancia o luz absorbida por las partícula de la solución y transmitancia a o luz transmitida
luego de atravesar el tubo con la solución. La transmitancia se expresa en valores numéricos
entre 0 y 100%, es decir que una solución que no tiene particular trasmitirá el 100% y una
perfectamente opaca el 0%. La absorbancia, también llamada densidad óptica DO, se expresa
en valores semilogarítmicos entre 0 y 2 correspondiendo el 0 a la solución que no tiene
partículas y por lo tanto no absorbe la luz.
Para encontrar la concentración de una solución problema, debemos comparar su lectura frente
a un blanco – agua destilada o reactivos sin modificarse – con la lectura encontrada. Una
solución estándar es generalmente una que contiene el problema con una concentración
perfectamente medida en el laboratorio.
CÁLCULO DE LA CONCENTRACIÓN DE UN PROBLEMA
Para hallar la concentración de una muestra problema tenemos dos procedimientos:
1. Factor de Calibración
2. Curvas de calibración
Factor de calibración: es la concentración de sustancia que corresponde a una unidad de
medida, generalmente 0,001 de absorbancia.
Se obtiene Factor de calibración: concentración del patrón
Lectura del patrón (en absorbancia)

Esta fórmula deriva de la densidad óptica o absorbancia del problema:

DOp= eP lP cP
Si el coeficiente de extinción (e) es el mismo en ambos casos y el diámetro del tubo de lectura(l)
es el mismo, la única diferencia está en la concentración. Luego:
DOst CS =
DOp CP
Despejando la concentración del problema cp, se obtiene:
cs
cp= Dp x cs
Dost
Concentración del problema = Densidad Óptica del Problema X Factor de calibración
La curva de calibración consiste en la obtención de las lecturas de absorción 0 de % de
trasmitancia que corresponde a una secuencia creciente de concentraciones, estas son
graficadas en un papel milimétrico si se trata de absorbancia o densidad óptica y de papel
semilogarítmico si se trata de % de transmitancia.
PARTE EXPERIMENTAL
PREPARACIÓN DE UNA CURVA DE CALIBRACIÓN
El experimento consiste en preparar tubos de concentración creciente de un colorante y leerlos
con el espectrofotómetro, llevando a cero (0) el aparato con agua destilada.
Se obtiene Factor de calibración: concentración del patrón / Lectura del patrón (en absorbancia)
Para el efecto, preparar cinco tubos de acuerdo al esquema y leer las soluciones al
espectrofotómetro a 540 nm de longitud de onda. Practicar esta lectura tanto en DO como en %
de transmitancia.