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Facultad de Ingeniería.
Departamento Ingeniería Química
APUNTES DE CLASES:
DISEÑO DE B IOREACTORES
Version 1
El siguiente apunte tiene por objetivo presentar de manera sencilla y aplicada los principios
fundamentales que rigen el diseño de bioreactores microbianos, y se basa principalmente en
tres textos: “Archivos de Ingeniería Bioquímica: Fundamentos de Ingeniería Bioquímica”,
de los autores Fernando Acevedo, Juan Carlos Gentina y Andrés Illanes; “Bioprocess
Engineering Principles” de Pauline Doran y “Bioprocess Engineering” de Michael L.
Shuler y Fikret Kargi.
La estructura de este apunte está enfocado principalmente en mostrar las bases y
posteriormente desarrollar varios ejemplos de aplicación. A juicio del autor hay una serie
de excelentes textos que muestran los principios básicos (como los arriba citados), pero
muchos de éstos no contienen material didáctico que permita a los alumnos que por primera
vez estudian esta materia a ejercitar los principios aprendidos. Así, estos apuntes buscan
mejorar esa falencia y presentar no sólo las bases teóricas, sino también presentar ejercicios
resueltos y propuestos que permitan una mejor comprensión de los principios en que se
basa el diseño de un bioreactor microbiano. Cabe señalar que en este primer intento, sólo se
muestra el diseño de reactores microbianos con biomasa suspendida, sin tomar en cuenta
reactores heterogéneos (con biomasa adherida), reactores con plantas o reactores de células
animales.
Este apunto será de utilidad para todos los alumnos de Ingeniería en Biotecnología,
Ingeniería Civil Química e Ingeniería en Ejecución Química del departamento de Ingeniería
Química de la Universidad de Santiago de Chile.
2
Capítulo 1: Crecimiento Microbiano
3
d
c
e
Ln X
X (g SS/ml)
b
t
Figura 2.1: Curva de crecimiento típico de una población bacteriana.
b.- fase de crecimiento exponencial o logarítmica: En esta etapa, las células se reproducen a
la máxima velocidad posible de acuerdo a las condiciones ambientales existentes. Este es
un período de crecimiento balanceado, es decir, todos los componentes de una célula crecen
a una misma velocidad, suponiendo que la composición promedio de una célula se
mantiene constante.
Durante la fase de crecimiento exponencial, la velocidad de crecimiento celular esta
descrita por la pendiente de la recta entre los puntos inicial y final de la zona b de la Fig. 1:
ln X
m (1.2)
t
4
La ecuación (1.2) se transforma en una derivada cuando Δt tiende a cero:
d ln X 1 dX
m (1.3)
dt X dt
La pendiente de esta recta se define como la velocidad específica neta de crecimiento,
cuyo símbolo es µ:
1 dX
(1.4)
X dt
donde X es la concentración de masa celular (g/l), t es el tiempo y es la velocidad de
crecimiento específico (h-1 ).
X t f
ln tf ó X X0 e (1.6)
X0
Frecuentemente se expresa la velocidad de crecimiento en términos del tiempo de
duplicación, t d , definido como el tiempo que media entre 2 duplicaciones sucesivas, es
decir, X = 2X 0 . Así, la ecuación (1.6) se expresa como:
ln 2
td (1.7)
c.- Fase de crecimiento des-acelerado: El crecimiento desacelerado se debe al
decrecimiento de 1 o más nutrientes escenciales o a la acumulación de componentes
tóxicos. El rápido cambio ambiental resulta en un crecimiento desbalanceado, es decir, la
biomasa activa no necesariamente está relacionada con el crecimiento en la masa de la
misma.
5
d.- Fase estacionaria: En esta etapa se agota algún nutriente, razón por la cual se detiene el
crecimiento, es decir, 0 . En esta etapa se producen los metabolitos secundarios debido
a la desregulación metabólica. Durante la fase estacionaria, la célula cataboliza las reservas
celulares para crecimiento y energía. A este proceso se le llama metabolismo endógeno. El
gasto energético para mantener la membrana energizada, para el transporte de nutrientes y
para funciones metabólicas esenciales (movilidad, reparación de daños estructurales) se le
llama energía de mantención.
e.- Fase de muerte o decaimiento: Se presentan en aquellos cultivos en los que se inducen
enzimas autolítica (enzimas localizadas en las paredes celulares que provocan la
desintegración de la célula) en condiciones de inanición.
6
Figura 2.2: Esquema del proceso de formación de producto asociado a crecimiento.
7
c.- Formación de producto no asociado a la formación de producto: Toma lugar durante la
fase estacionaria, cuando = 0. La figura 2.4 muestra un esquema de los perfiles en el
tiempo.
8
Así
rP YP/ X X (1.10)
b.- Formación de producto indirectamente asociado a metabolismo energético: Incluye la
cantidad de producto asociado a mantención a través del parámetro mP (velocidad
específica de formación de producto debido a mantención, s-1 ). Idealmente, la relación es la
siguiente:
dX
rP qP X YP/ X mP X (1.11)
dt
Si
dX
X (1.12)
dt
Reemplazando ecuación (1.12) en ec. (1.11), se tiene:
rP YP/ X mP X (1.13)
Donde
mP = velocidad específica de formación de producto debido a mantención, s-1 .
9
mantención (Sm) y sustrato para producto (Sp ). El sustrato destinado a mantención varía
considerablemente, dependiendo del organismo o cultivo del que se trate.
dX
dS dt
X mS X (1.17)
dt YX / S
Si
dX
X (1.18)
dt
Finalmente
dS
X ms X (1.19)
dt YX /S
donde ms es el coeficiente de mantención y está en g sustrato g-1 biomasa s-1 . Este
coeficiente hace referencia a la cantidad de sustrato requerida para mantener las funciones
básicas del microorganismo.
Se puede hacer notar que el consumo de sustrato varía de la velocidad de crecimiento como
de la concentración celular.
11
dS
X ms X (1.26)
dt YX /S
Producto:
dP
YP / X X (1.27)
dt
o Indirectamente asociada a crecimiento:
Biomasa
dX
X (1.28)
dt
Sustrato:
dS q
X P X ms X (1.29)
dt YX /S YP / S
Producto:
dP
qP X (1.30)
dt
En la ecuación (1.30), y se deben determinar experimentalmente.
12
1.4.1.- Coeficiente de rendimiento celular observado
13
1 1 ms qP
'
(1.38)
Y X/S YX/S YP / S
La ecuación (1.38) es válida para todo sistema. Cabe hacer notar que YX' / S YX / S .
dX
Dividiendo la ecuación por el término :
dt asoc. crec.
1 1
dX dP dX
YP / X m P X (1.40)
dt dt dt
Dado que:
1 dX
g (1.41)
X dt crec
1
dP dX '
YP / X (1.42)
dt dt
Así, reemplazando ec. (1.41) y (1.42) en ec. (1.40), se tiene:
mP
YP' / X YP / X (1.43)
g
14
dominante en μ. Este componente es el sustrato limitante. Frecuentemente es el carbono,
nitrógeno, oxígeno (si es un cultivo aeróbico) o NO 3 - (si es un cultivo anóxico).
La relación entre μ y la concentración de sustrato, S, frecuentemente supone una cinética de
saturación, llamada ecuación de Monod (equivalente a la ec. de Langmuir-Hinshelwood en
cinética química o Michaelis-Menten en cinética enzimática). Así:
S
max (1.44)
KS S
La ecuación de Monod es una ecuación semi-empírica, que se basa en la suposición de que
una enzima (descrita por la cinética de Michaelis-Menten) es responsable del consumo de
sustrato. En la ecuación (1.44), KS es la constante de saturación, cuyo valor representa la
concentración donde la velocidad específica de crecimiento (µ) es la mitad de la velocidad
máxima específica de crecimiento (µmax ). El comportamiento típico de la velocidad
específica de crecimiento se muestra en la Figura 2.5.
¿Existen otras ecuaciones que describan la fase de crecimiento bajo limitación por sustrato?
Sí, existen varias:
- Ecuación de Blackman:
g max Si S 2 K S (1.45)
15
max
g Si S < 2 K S (1.46)
2 KS
- Ecuación de Tessier:
g max 1 e K S
(1.47)
- Ecuación de Moser:
Sn
g max n
(1.48)
KS S
Como se aprecia en la ecuación (1.48), si el valor de n = 1, entonces tenemos la ecuación de
Monod. Así, la ecuación de Moser es una generalización de la ecuación de Monod.
- Ecuación de Contois:
S
g max (1.49)
KSX X S
La ecuación de Contois tiene una constante de saturación proporcional a la concentración
de biomasa. Así, a medida que aumenta la concentración de biomasa, disminuye la
velocidad específica de crecimiento. Esta ecuación es muy útil para altas concentraciones
de biomasa.
Dado que en la naturaleza existen un sinnúmero de compuestos que pueden ser inhibidores,
es necesario tener formas de expresar estas inhibiciones para incluirlas en los análisis de los
bioreactores. ¿En qué situaciones hay inhibición? Cuando hay altas concentraciones de
sustrato o por la existencia de inhibidores. Las formas matemáticas de la inhibición son
análogas a la inhibición enzimática. Frecuentemente, el mecanismo de inhibición es
complicado y las constantes cinéticas no tienen significado biológico. Así, las constantes se
calculan ajustándose a los datos experimentales.
a.- Inhibición por sustrato:
- Cinética no competitiva
max
g (1.50)
KS S
1 1
S KI
16
Cuando KI >> KS, entonces
S
g max (1.51)
S2
KS S
KI
La ecuación (1.51) es la ecuación de Andrew o Haldane, la cual es muy usada en procesos
biológicos.
¿Cómo se evita este tipo de inhbición? A través de la adición de S lenta e
intermitentemente.
b.- Inhibición por compuestos tóxicos: Cinéticas similares a ecuaciones anteriores. La más
usada es la cinética no-competitiva. También en este caso aparece la inhibición a-
competitiva:
max S
g (1.52)
S KS 1 I
I K I
1
KI
c.- Inhibición por producto: Altas concentraciones de producto pueden inhibir el
crecimiento microbiano. La inhibición por producto puede ser competitiva como no
competitiva.
- Competitiva:
max S
g (1.53)
P
KS 1 S
KP
- No-competitiva: ecuación más usada. Por ejemplo, la producción de etanol por
fermentación de glucosa por levaduras.
max
g (1.54)
KS P
1 1
S KP
17
En general, la temperatura tiene 2 efectos: un efecto de activación y el otro de inactivación.
La división entre cada zona la entrega la temperatura óptima. Si la temperatura aumenta, la
velocidad se dobla por cada 10 ºC. Sin embargo, al aumentar la temperatura por sobre la
temperatura óptima, se produce una muerte celular. El efecto de activación de la reacción
puede ser modelada por una expresión de tipo Arrhenius:
Ea
A e RT
(1.55)
donde
Ea = energía de activación para crecimiento, que cae entre 10 a 20 kcal/mol
El oxígeno disuelto no es un sustrato común, puesto que éste debe ser ingresado desde una
fase gaseosa. De esta manera, siempre que incluyamos el oxígeno como un sustrato
importante en nuestro sistema, debemos incluir un término de entrada del O2 debido a
transferencia de masa desde la fase gas a la fase líquida. Así, para un sistema discontinuo se
tiene que:
18
Velocidad de
Velocidad de
transferencia
Acc consumo (1.56)
de oxígeno
de oxígeno
gas-líquido
La velocidad de transferencia de O2 (oxygen transfer rate) desde la fase gas a la fase líquida
está dada por:
OTR k L a S O*2 S O2 , L (1.57)
Donde:
SO*2 = concentración de O2 saturado.
Donde
qO2 = velocidad específica de consumo de O2 , mg O2 / g celula seca h
El efecto del oxígeno puede ser descrito como una cinética de tipo saturación, al igual que
muchos otros sustratos. Si el O2 es bajo, puede llegar a ser un factor limitante. Por el
contrario, si el O2 es alto, éste no es un factor limitante y puede ser representado como una
cinética de orden cero o primer orden. Sin embargo, en la mayoría de los casos, tanto el
oxígeno (aceptor de electrones) como algún dador de electrones (generalmente algún
compuesto orgánico) son sustratos limitantes, por lo que la velocidad específica de
crecimiento se ve afectado por ambos sustratos. En este caso, se usa una cinética de Monod
de múltiples sustratos:
S1 SO2
max (1.60)
K S S1 K S SO
1 O2 2
19
La concentración crítica de O2 (en la cual = max /2) está entre el 5 a 10% de la
concentración de saturación de O2 en líquido, para bacterias y levaduras. La concentración
de saturación de O2 en agua a 25 °C y 1 atm es de 7 mg/L.
dX
dt
YX /O2 k L a SO*2 SO2 , L (1.62)
1.- Escherichia coli se está usando para la producción de una hormona de crecimiento
porcina. La bacteria se hace crecer aeróbicamente en un cultivo discontinuo con glucosa
como fuente limitante de sustrato. Tanto la biomasa como el sustrato se miden en el tiempo.
Los resultados se muestran a continuación:
20
3,5 11,7 0
3,7 11,6 0
Resolución
X (11,60 0, 2)
YX' / S 0, 456 g X g -1S (1.64)
ST (0 25)
Finalmente, se hace el análisis para el consumo de sustrato. Dado que en este caso no hay
formación de producto y suponiendo que mS = 0 y que µ = µmax , se tiene que:
dS max
X (1.65)
dt YX / S
21
4,5
4
3,5
3
ln(X/X0)
2,5
2
1,5
1
0,5
0
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4
tiempo, h
Finalmente:
X0
S S0
YX / S
e max t 1 (1.67)
Al aplicar la ecuación (1.67) y comparar los resultados obtenidos con los resultados
experimentales, se observa que esta ecuación puede predecir el comportamiento sólo desde
la zona posterior a la fase lag del sistema (desde t = 0,33 h), pero con errores involucrados,
los cuales no son superiores al 5% dadas las suposiciones y simplificaciones realizadas. La
comparación se muestra en la Figura 7. En esta figura, YX /S YX' / S = 0,456 g X g-1 S.
22
Figura 7: Comparación de S medido y S calculado por ecuación (1.67).
2.- Se desea producir un cierto metabolito extracelular por cultivo por lotes de una bacteria
aeróbica en un medio con sacarosa como única fuente de carbono y energía. La producción
del metabolito sigue una cinética de Luedeking y Piret:
dP dX
X
dt dt
Donde α = 0,27 (g producto/g célula), β = 0,31 (g producto/g célula h)
La célula posee un μm = 0,44 (h-1 ) y un rendimiento global de sustrato ( YX' / S ) en células de
0,28. Además, X0 = 0,15 g/L y P0 = 0,08 g/L. El rendimiento máximo de producto (YP/S) es
0,65. Considere una fase de latencia despreciable y un contenido celular de C del 47%.
a) Determine el valor del coeficiente de mantención
b) Concentración celular y el consumo de sacarosa después de 10 horas de cultivo
c) Concentración de producto después de 10 horas de fermentación
d) Porcentaje de la fuente de carbono destinado a crecimiento, mantención y producción
Resolución
23
a) Se sabe que el proceso es la formación de producto que está indirectamente
asociado a crecimiento. Así, los balances en un reactor discontinuo serán:
Biomasa:
dX
X (1.68)
dt
Producto:
dP dX
X X X (1.69)
dt dt
Así, combinando (1.68) y (1.69):
dP
X (1.70)
dt
El consumo de sustrato para un sistema donde la formación de producto está indirectamente
asociado al crecimiento está dada por:
dS q
X P X mS X (1.71)
dt YX / S YP / S
Realizando un análisis similar al realizado para obtener la ecuación (1.38), se tiene que:
1 1 qP m
'
S (1.72)
Y X /S YX / S YP / S
En la ecuación (1.72), son conocidos los valores de YX' / S , YP/ S y q P . El valor de YX / S debe
ser determinado. ¿Cómo se determina? Usando una metodología presentada por Acevedo et
al. (1995), quienes indican que YX / S puede ser aproximado por la siguiente ecuación:
% elemento C en nutriente
YX / S f X (1.73)
% elemento C en biomasa
Los valores de f X varían entre 0,5 y 0,6 para cultivos aeróbicos, mientras que para cultivos
24
Para calcular el valor de qP, se requiere el valor de µ. En este caso, se supone que µ = µmax .
Así:
gP gP gP
q P max 0,27 0, 44 h -1 + 0,31 0, 4288 (1.75)
gX gXh gXh
Despejando mS desde ecuación (1.72):
1 1 qP
mS ' (1.76)
YX /S YX / S YP/ S
qP
mS '
(1.77)
Y X /S YX / S YP /S
0, 44 0, 44 0, 4288 gS
mS 0,097 (1.78)
0, 28 0, 54 0, 65 g Xh
b) El cálculo de la biomasa se hace con la ecuación (1.6):
g 0, 4410
X X 0 e max t 0,15 e 12, 22 g/L (1.79)
L
Para estimar el consumo de sustrato, debemos integrar la ecuación (1.35):
dS q
X ms X P X (1.80)
dt YX / S YX / S
Luego:
dS q
X 0 e max t ms X 0 e max t P X 0 e m ax t (1.81)
dt YX / S YX / S
S
dS X 0 ms X 0
X t e max t dt (1.82)
0
S0 YX / S YX / S 0
X m X max
S0 S 0 s 0
max YX /S max
X 0 e max t 1 (1.83)
YX / S
Reemplazando datos:
S0 S 46.66 g S/L (1.84)
Otra forma más sencilla para realizar este cálculo es utilizando el concepto de YX' / S :
X 12,22
S '
43, 63 g S/L (1.85)
Y X/S 0,28
c) La concentración de producto debe ser determinada integrando la ecuación (1.69):
25
dP
max X X (1.86)
dt
Luego
10 10
P P0 max X dt X dt (1.87)
0 0
X0
P P0 X 0 e max t 1 max
e max t 1 (1.89)
mS gS
Sustrato dedicado a mantención: 0, 22
max gX
qP gS
Sustrato dedicado a formación de producto: 1, 499
YP / S g gX
1 gS
El consumo de sustrato total fue: '
3, 57
Y X /S gX
Así, los porcentajes son:
1
YX / S
% crecimiento: 100 51,86%
1
YX' / S
% mantención: 6,6 %
% producto: 41,97 %
26
Para el estudio de cultivos continuos, generalmente se usan 2 sistemas: el Turbidostato y el
Quimiostato. El turbidostato se basa en mantener la concentración celular constante, a
través del monitoreo de la densidad óptica del cultivo y el manejo de la velocidad de flujo.
El quimiostato se basa en mantener constante su medio químico, controlando la
composición de la alimentación y su velocidad de flujo. Debido a que este último sistema
es el más usado, el presente apunte trabajará este sistema.
27
Figura 8: Esquema de un quimiostato ideal.
- Biomasa
dX
V Q X 0 Q X V X (1.91)
dt
En la ecuación (1.91), V es el volumen de líquido en el reactor. Luego
dX Q
X0 X X (1.92)
dt V
Definiendo la velocidad o tasa de dilución:
F 1
D (1.93)
V TRH
Suponiendo que la alimentación no contiene microroganismos.
dX
D X X (1.94)
dt
En estado estacionario:
D (1.95)
28
- Balance de sustrato limitante
dS 1
V Q S0 Q S V X (1.96)
dt YX / S
Luego
dS X
D S 0 S (1.97)
dt YX / S
En estado estacionario
D S0 S X (1.98)
YX / S
Despejando X de ecuación (1.98), se tiene:
X YX / S S 0 S (1.99)
- Balance de producto
dP
V Q P0 Q P V qP X (1.100)
dt
Luego
dP
D P0 P q P X (1.101)
dt
En estado estacionario y suponiendo que la alimentación tiene una concentración de
producto despreciable, se tiene
D P qP X (1.102)
Finalmente, el valor de S, P y X es el siguiente, indicando que:
S
max (1.103)
KS S
Así:
D KS
S (1.104)
max D
D KS
X YX / S S 0 (1.105)
max D
qP X
P (1.106)
D
29
Las ecuaciones anteriores fueron desarrolladas suponiendo que la cantidad de sustrato
usado para mantención es despreciable, pero, ¿Qué pasa si éste es importante?
Considerando el efecto de la mantención, el balance de sustrato en el bioreactor queda:
dS X
V Q S0 Q S V mS X (1.107)
dt YX / S
Luego, en estado estacionario:
X
D S 0 S D mS YX / S (1.108)
YX / S
Luego
D
S0 S 1
D mS X 0 (1.109)
X YX / S
De acuerdo a lo visto anteriormente, los valores de S0 , S y X se relacionan con el coeficiente
de rendimiento observado, YX' / S :
X Xf
YX' / S (1.110)
ST S 0 S
Así
1 S0 S
'
(1.111)
Y X /S X
Reemplazando la ec. (1.111) en la ec. (1.109):
D D mS YX / S
'
0 (1.112)
YX / S YX / S
1 mS 1
' (1.113)
YX / S D YX / S
muestra en la Figura 9.
30
Figura 9: Cálculo de YX/S a través de datos experimentales en un quimiostato.
Haciendo P0 = 0, entonces:
D P qP X (1.117)
D S0 S
X (1.119)
1 q
D mS YX /S P
YX / S YP /S
31
Ahora, volvamos a considerar las ecuaciones (1.104) y (1.105), además del factor
D X X . Al graficar X y D·X en función de D, se obtiene una gráfica como la de la
Figura 10. Allí aparece un punto llamado Dcrit , a partir del cual la biomasa en el sistema se
hace cero, o se “lava”. Es en este punto donde se indica que el quimiostato se lava. El Dcrit
para un cultivo sin formación de producto y mS = 0 es:
S0
Dcrit max (1.120)
K S S0
450 60
400
50
350
300 40
250
DX
30
X
200
150 X 20
100 DX 10
50
0 0
0 0,05 0,1 0,15 0,2
D
32
KS
Dop max 1 (1.124)
K S S0
La ecuación (1.124)es válida sólo para el caso en que mS = 0, aunque de todas maneras
puede ser usada como primera aproximación en caso de no conocer los valores de mS y qP.
Ejercicio de aplicación
1.- 2.- Una nueva cepa de levadura esta siendo considerada para la producción de biomasa.
Los siguientes datos fueron obtenidos usando un quimiostato. Una concentración de entrada
de 800 mg/L y un exceso de oxígeno fue usado a pH = 8,5 y T = 35 °C. Usando los
siguientes datos, calcule max , K S , YX / S y ms . Determine además la productividad
volumétrica de biomasa, el Dcrit y el D óptimo para el crecimiento de la cepa.
Resolución
33
299 502 0,596
59 98 0,602
Una vez calculados los valores de YX' / S , construimos la gráfica 1/ YX' / S v/s 1/ D , como se
muestra en la Figura 11.
2,5
1,5
1/Yap
puntos experimentales
Linealización
1
y = 0,0555x + 1,5958
2
R = 0,9899
0,5
0
0 2 4 6 8 10 12
1/D
Figura 11: Gráfico 1/ YX' / S v/s 1/ D para los datos del problema.
De la ecuación de la recta obtenida de la Figura 11, se pueden obtener los parámetros k d , mS
e YX / S . Así:
Pendiente de la recta = mS = 0,055 g S/ g X h
Intersecto en el eje Y cuando X = 0:
1/ YX / S = 1,5958. Por lo tanto, YX / S = 0,627 g X/ g S.
34
Figura 12: Linealización de ecuación (1.125) para el cálculo de parámetros cinéticos.
Una vez calculados todos los parámetros cinéticos, se calcula el Dopt, el Dcrit y finalmente la
productividad volumétrica máxima.
Para el óptimo:
KS -1
Dopt max 1 0,58 h
K S S0
Para el crítico:
S0
Dcrit max 0,80 h -1
K S S0
El valor de Dcrit fue calculado sin incluir mS , aún así, es válido para realizar el análisis.
Finalmente, la productividad óptima:
Q X Dopt X opt (1.127)
Sin considerar efectos de mantención, se calcula Sopt y Xopt :
Dopt KS
Sopt 220,14 mg/L
max Dopt
X opt S0 Sopt YX / S 363,57 mg/L
Así:
QX 210, 87 mg X/L h
35
1.- Un fermentador de 10 litros de medio es inoculado con 500 mL de inóculo de 4,1 g/L.
Se sabe que si se deja crecer la cepa, al cabo de 6 horas la biomasa en el fermentador será
de 6 g/L. Determinar el tiempo de duplicación y el tiempo que deberá permanecer la cepa
en el fermentador para alcanzar la misma concentración del inóculo. (Resp: td = 1,23 h; t (X
= 4,1) = 5,35 h.)
b) Cuando transcurría la mitad del tiempo determinado en (a), se agregaron 3 litros de una
solución estéril de glucosa de 25 g/L, además de los otros componentes de medio. Además,
se cambia la temperatura de 28 ºC a 34 ºC. Calcular el tiempo total de cultivo y la
concentración celular final, si la energía necesaria para activar su metabolismo reproductivo
es de 13 kcal/mol (Resp: tb = 4,98 h; X = 9,57 g/L).
36
4.- Una fermentación batch de una bacteria aeróbica que usa como fuente de carbono
metanol entrega los resultados siguientes:
Tiempo, 0 2 4 8 10 12 14 16 18
h
Biomasa 0,2 0,211 0,305 0,98 1,77 3,2 5,6 6,15 6,2
(X), g/l
Sustrato 9,23 9,21 9,07 8,03 6,8 4,6 0,92 0,077 0
(S), g/l
Determine:
a.- velocidad máxima de crecimiento específico, max . (Resp: 0,28 h-1 )
b.- Coeficiente de rendimiento observado, YX/S (Resp: 0,65)
c.- tiempo de duplicación, td (Resp: 2,48 h)
d.- Constante de saturación, K S (Resp: 1,13 g/L)
e.- Velocidad específica de crecimiento ( g) a t = 10 h (Resp = 0,24 h-1 )
37
b) Determinar la concentración final de P, conociendo que inicialmente no hay P presente.
(Resp: 90,54 g/L)
7.- Usted dispone de la siguiente información experimental del crecimiento de una bacteria,
obtenida en cultivo batch:
Tiempo, 0 0,50 1,00 1,50 2,00 2,50 3,00 3,50 4,00 4,50 5,00 5,50 6,00
h
Biomasa 0,10 0,13 0,16 0,21 0,27 0,35 0,45 0,57 0,74 0,94 1,21 1,56 2,00
(X), g/l
Sustrato 100 99,93 99,84 99,72 99,57 99,38 99,13 98,82 98,41 97,89 97,22 96,36 95,26
(S), g/l
Tiempo, 6,50 7,00 7,50 8,00 8,50 9,00 9,50 10,00 10,50 11,00 11,50 12,00 12,50
h
Biomasa 2,56 3,29 4,22 5,42 6,95 8,93 11,45 14,70 18,86 24,19 31,01 39,60 41,0
(X), g/l
Sustrato 98,34 92,02 89,69 86,70 82,86 79,94 71,62 63,51 53,11 39,78 22,71 1,25 0,00
(S), g/l
38
contaminante se identifica y se sabe que éste tiene una velocidad máxima de crecimiento de
0,4 h-1 . ¿Es posible eliminar el contaminante? Justifique.
Determine los valores de KS, μmax , YX/S y ms. (Resp: Ks = 0,1346 mg/ml; μmax = 0,925 h-1 ;
YX/S = 0,496 mgX/mgS; mS = 0,0593.
10.- Pseudomona putida con un max = 0,5 h-1 es cultivada en un reactor continuo bajo
condiciones aeróbicas usando un D = 0,28 h-1 . La fuente de carbono y energía es lactosa, la
cual es alimentada con una concentración de S0 = 2 g/L. La concentración de lactosa en el
efluente es de 0,1 g/L. Si la velocidad de crecimiento esta limitada por la transferencia de
O2 , usando la siguiente información: YX / S = 0,45 gX/gS; YX / O2 = 0,25 gX/gO2 , KH =
b.- ¿Cuál debe ser el coeficiente de transferencia de oxígeno (kLa) a 1 atm de presión total
para superar la limitación por transferencia de O2 , es decir, tener concentraciones de O2 en
la fase líquida superiores a 2 mg/L? (kLa = 160 h-1 )
40
Xr
c (2.2)
X
donde Xr es la concentración de biomasa en la corriente recirculada, mientras que X es la
concentración de biomasa en el reactor.
- Balance de Biomasa
dX
V Q X 0 Q c X Q 1 X net X V (2.3)
dt
Dividiendo por V y en estado estacionario:
Q Q Q
0 X 0 c X 1 X net X (2.4)
V V V
En esta ecuación podemos ingresar un nuevo parámetro, conocido como tasa de dilución, el
cual es el inverso del tiempo de residencia hidráulico:
41
Q
D (2.5)
V
Utilizando esta definición y si X0 = 0, la ecuación (2.5) se reduce a:
D 1 c (2.6)
Esta última relación es importante y muestra que, en caso de reactores con recirculación, la
velocidad específica de crecimiento se puede aumenta en 1 c veces respecto a un
Q Q1 Q2 (2.13)
Despejando X1 de ecuación (2.12) y reemplazando F2 por (F-F1 ), se obtiene:
Q
X1 c X c 1 1 X (2.14)
Q1
2.2- Reactor Fed-Batch
42
El reactor Fed-batch es un reactor especial en el cual se agrega cierto flujo con sustrato a un
reactor, sin salida de líquido del mismo. Así, a medida que se agrega flujo, el volumen
aumenta. El objetivo del reactor Fed-Batch es controlar la velocidad de crecimiento (µ)
mediante la velocidad de alimentación al reactor. El sistema se puede resumir en la Fig.2.2.
Crecimiento balanceado.
Metabolismo no se relaciona directamente con la edad del cultivo
El consumo de sustrato para mantención es despreciable
La formación de producto está directamente relacionado con el metabolismo
energético.
El aumento del volumen de reactor es igual al volumen de solución nutriente
alimentada.
43
Masa de microorganismos
d XV
XV (2.16)
dt
Masa de sustrato limitantek
d SV XV
Q S1 (2.17)
dt YX / S
Masa de producto
d PV
qP XV (2.18)
dt
Cinética de crecimiento
S
max (2.19)
KS S
Así, se tienen 5 ecuaciones y 7 incógnitas: V, XV, SV, PV, µ, Q y S1 . Por lo tanto, el sistema
requiere fijar al menos 2 variables para tener una solución. En este apunte, se fijarán los
valores de Q y S1 , aunque también pueden fijarse otras variables como µ o la concentración
de sustrato en el medio.
44
12
10
concentracion, g/L
F, S1
S
X
2
0
0 2 4 6 8 10 12 14
tiempo, h
Figura 2.3: Aplicación de la alimentación una vez lograda la fase pseudo-estacionaria. µmax
= 0,3 h; K S = 0,1 g/L; YX/S= 0,5; Q = 0,2 L/h; S1 = 30 g/L; V = 1 L.
V0 V f Q t (2.20)
dS
Dado que S ≈ 0 y que 0 entonces:
dt
XV
Q S1 (2.22)
YX/S
Despejando el valor de la velocidad específica de crecimiento, se tiene:
45
Q S1 Y X / S
(2.23)
XV
Reemplazando la ecuación (2.23) en el balance de masa de microorganismos (ec. (2.16)):
d XV
XV Q S1 YX /S (2.24)
dt
Integrando la ecuación (2.24) entre XV0 y XV :
XV t
dXV Q S1 Y X / S dt (2.25)
XV0 0
XV XV0 Q S1 YX /S t (2.26)
De la ecuación (2.26) es fácil determinar el valor de la masa final de microorganismos en el
proceso Fed-Batch:
XV Q S1 Y X / S t XV0 (2.27)
Así, el valor de µ esta dado por:
Q S1 Y X / S
(2.28)
Q S1 YX /S t XV0
¿Cuál puede ser el criterio para diseñar una alimentación adecuada? De acuerdo a un texto
argentino, la oferta del sustrato debe ser igual o superior a la demanda de sustrato por parte
del microorganismo. Así, se tiene que:
XV
demanda (2.29)
YX / S
oferta Q S1 (2.30)
Así, se además se tiene que µ deber ser como máximo µmax , entonces la oferta debe
equiparar a la demanda máxima:
XV max
Q S1 (2.31)
YX/S
¿Qué pasa con el producto? Dado que todo el sustrato sólo se utiliza en el crecimiento,
entonces:
qP Y P / X (2.32)
Luego:
46
d PV
qP XV (2.33)
dt
d PV
YP/ X XV (2.34)
dt
Reemplazando la ecuación (2.23) en la ecuación (2.34):
d PV
Q S1 Y X / S Y P / X (2.35)
dt
Integrando la ecuación anterior entre t = 0 y t y entre PV0 y PV:
PV PV0 Q S1 YX /S YP / X t (2.36)
Finalmente, la masa de producto al final de la etapa Fed-Batch:
PV Q S1 YX /S YP /X t PV0 (2.37)
Caso 2: se inicia la alimentación antes que el sustrato se acabe: Este tipo de sistema se
muestra esquemáticamente en la Fig. 4. Allí se aprecia que la alimentación no comienza
una vez que se logra el pseudo-estado estacionario (S ≈ 0), sino que antes, mientras el
sistema está en pleno desarrollo, como se muestra en la Figura 2.4.
16
14
F, S 1
12
Concentracion, g/L
10
S
6 X
0
0 5 10 15 20
tiempo, h
Figura 2.4: Operación del sistema fed-batch para una alimentación cuando S ≠ 0. Datos
graficados con µmax = 0,3 h; KS = 0,1 g/L; YX/S= 0,5; Q = 0,2 L/h; S1 = 30 g/L; V = 1 L.
47
Dado la complejidad de este tipo de operación, Acevedo et al. (2002) 1 desarrollaron una
forma simple de calcular S y X, basados en dividir la operación en zonas, de acuerdo al
crecimiento celular.
En la primera fase, cuando S >> KS se tiene un sistema donde μ se aproxima a μmax , por lo
tanto, tenemos una fase de crecimiento exponencial. En la segunda fase, cuando S 0, μ
se aproxima a la cinética de Monod (si corresponde), por lo que estamos en la fase de
crecimiento limitado.
a) Zona de crecimiento exponencial: Para esta etapa, los balances de masa son:
- Flujo
dV
Q (2.38)
dt
- Biomasa
d XV
max XV (2.39)
dt
- Sustrato
d SV XV
Q S1 max (2.40)
dt YX / S
- Producto:
d PV
qP XV (2.41)
dt
1
Acevedo F, Gentina JC, Illanes A. “Fundamentos de Ingeniería Bioquímica” (2002)
48
Para determinar la masa de sustrato (SV), tomamos la ecuación (2.43) y la reemplazamos en
la ecuación (2.40):
d SV
Q S1 max XV0 e max t (2.44)
dt YX / S
Integrando entre SV y SV0 :
XV0
SV SV0 Q S1 t
YX/S
e max t 1 (2.45)
Así:
XV0
SV Q S1 t
YX / S
e m ax t 1 SV0 (2.46)
Finalmente
1
P V P0 V0 qP X 0 V0
max
e max t 1 (2.48)
Donde
q P max YP / X (2.49)
b) Zona de crecimiento limitado: para esta etapa, los balances son similares a los
presentados para la zona de crecimiento exponencial. Así:
49
- Flujo
dV
Q (2.50)
dt
- Biomasa
d XV
XV (2.51)
dt
- Sustrato
d SV XV
Q S1 (2.52)
dt YX / S
- Producto
d PV
qP XV (2.53)
dt
-Velocidad de crecimiento específico
S
max (2.54)
KS S
Para poder encontrar la masa de microorganismos, reemplazamos la ecuación (2.51) en
(2.52)
d SV 1 d XV
Q S1 (2.55)
dt YX / S dt
50
XV Q S1 YX /S (2.60)
Para poder saber en que zona de crecimiento se está operando, es necesario determinar el
tiempo de transición (t T), que es equivalente al tiempo que dura la operación en fase de
crecimiento exponencial. Para calcular el tiempo de transición, se igualan las ecuaciones
(2.43) y (2.58), dado que la masa celular en el tiempo t T debe ser la misma calculada tanto
por la ecuación de la fase exponencial como por la fase limitante. Se calcula como el
“tiempo fronterizo” donde termina la fase exponencial y comienza la zona de crecimiento
limitado.
Así:
X 0 V0 e max tT F S1 tT YX / S S0 V0 YX / S X 0 V0 (2.65)
51
d XV
XV (2.67)
dt
Sustrato limitante
d SV
Q S1 ms XV (2.68)
dt YX /S
Producto
d PV
q p XV (2.69)
dt
Donde
qP Y P / X (2.70)
S
max (2.71)
KS S
Nuevamente, de ecuación (2.68) despejamos µ:
dS dV XV
V S Q S1 ms XV (2.72)
dt dt YX/S
Lo anterior se reduce a:
Q S1 YX /S
ms Y X / S (2.73)
XV
Reemplazando la ecuación (2.73) en ecuación (2.67):
d XV Q S Y
XV 1 1 X /S ms YX /S XV (2.74)
dt XV
d XV
Q1 S1 YX /S ms YX /S XV (2.75)
dt
Así:
d XV
ms Y X / S XV Q1 S1 YX /S (2.76)
dt
La ecuación(2.76) es una ecuación diferencial lineal de 1er orden, cuya forma general se
escribe como:
dy
P x y Q x (2.77)
dx
Para este tipo de ecuaciones, la solución general está dada por:
52
P x dx P x dx
y e Q x e dx C (2.78)
donde C es una constante.
Para el caso que queremos resolver, se tiene que:
P x ms Y X / S (2.79)
Q x Q S1 YX /S (2.80)
Y X / S m s dt t YX / S ms dt
XV e 0
Q S1 Y X / S e 0
dt C (2.81)
0
Desarrollando la primera integral:
t
Y
0
X /S ms dt YX /S ms t (2.82)
Y X / S m s t t Y m t
XV e Q S1 Y X / S e X / S s dt C (2.83)
0
Desarrollando la segunda integral:
Q S1 YX /S
Q S Y1 X/S eYX / S ms t dt eYX / S ms t 1 (2.84)
Y X / S ms
Reemplazando la ecuación (2.84) en la ecuación (2.83):
1
XV e
Y X /S ms t
Q S1 YX / S
Y m t
e X /S s 1 C (2.85)
YX / S m s
Después de trabajo algebraico se llega a que:
Q S1 Q S1 YX /S ms t
XV C e (2.86)
ms ms
C XV0 (2.87)
Por lo tanto, se puede indicar que:
Q S1 Q S1 YX /S ms t
XV XV0 e (2.88)
ms ms
53
2.3.- Eje mplos de aplicación.
1.- Un quimiostato aireado con recirculación, comúnmente conocido como “lodo activo”,
es usado para la remoción de materia orgánica desde aguas residuales. Una empresa lleva a
cabo un estudio a nivel piloto usando un reactor de 500 L, operando con un flujo de 250
L/h y una concentración de alimentación de 50 g/L de DBO5 . Un estudio cinético previo
demostró que el cultivo mixto obedece a una cinética tipo Monod. Se le pide calcular:
a. Calcular el valor de X, S y X1 cuando se trabaja sin una purga en el sistema.
b. Calcular el valor de X, S y X1 cuando se trabaja con un flujo de purga de 50 L/h.
c. Dado que hay restricciones ambientales en cuanto a la concentración de biomasa en
el efluente, calcule el flujo de salida necesario para que la concentración de salida
sea nula.
d. Calcule para el sistema el Dcrit .
(Datos adicionales: µmax = 0,5 h; K S = 2 g/L DBO5 ; YX/S = 0,5; = 0,7; c = 1,5).
Solución
a) Del balance de masa celular en el reactor, se obtiene la ecuación (2.8) y con ésta
obtenemos el valor de S:
K S D 1 c
S (2.89)
max D 1 c
Reemplazando valores:
2 (mg/L) 0,5 h -1 1 0, 7 0,7 1, 5
S 3,71 mg/L (2.90)
0, 5 h -1 0,5 h -1 1 0, 7 0, 7 1,5
54
-1
D S0 S YX / S 0,5 h 50 3, 71 mg S/L 0,5 mg X/mg S
X -1
0, 325 h (2.92)
X 35, 65 mg/L
Para calcular el valor de X1 , usamos el balance de masas celular en el separador (ecuación
(2.14)):
Q
X1 c X c 1 1 X (2.93)
Q1
Dado que Q = Q 1 (no hay purga, es decir, Q2 = 0), entonces la ecuación (2.93) se simplifica.
Reemplazando valores:
X1 1,5 35,65 mg/L 1, 5 1 0, 7 1 35, 65 (mg/L) 23,17 mg/L (2.94)
250 L/h
X1 1,5 35,65 mg/L 1,5 1 0, 7 1 35, 65 (mg/L) (2.96)
200 L/h
X1 15,6 mg/L
c) En este caso, nos piden calcular el valor de Q1 y Q2 para que X1 = 0. Nuevamente,
usamos la ecuación en el separador (ecuación (2.14)):
Q
X1 c X c 1 1 X (2.97)
Q1
Si X1 = 0 y despejando Q1 se obtiene:
Q c 1 1
Q1 (2.98)
c
Reemplazando valores, se obtiene:
250 (L/h) 1,5-1 0,7 1
Q1 141, 67 (2.99)
1,5
Luego
Q2 Q Q1 108,33 L/h (2.100)
55
d) Para calcular el Dcrit , debemos suponer que: X = 0 (el reactor se lava) y S = S0 (no hay
consumo de sustrato en el reactor). Así, igualando la ecuación (2.6) y la ecuación de
Monod, se obtiene la siguiente expresión (ecuación (2.7)):
S0
Dcrit 1 c max (2.101)
K S S0
Despejando Dcrit y reemplazando valores, se obtiene:
0,5 h -1 50 g/L
Dcrit 0,739 h -1 (2.102)
1 0, 7 0,7 1, 5 2 g/L+50 g/L
2) Una empresa recientemente compró un nuevo microorganismo para producir un
producto P. Los datos cinéticos de este nuevo microorganismo son: µmax = 0.3 h-1 ; KS = 0,1
g/L; YX/S = 0,4 g b.s./g sustrato; YP/X = 0,5 g P/g b.s h. Se sabe que la formación de
producto está directamente asociada a crecimiento. De acuerdo a la empresa que distribuye
el microorganismo, la mejor forma de operación es del tipo Fed-Batch. Así, se le pide a ud.
determinar los siguientes puntos:
a) El tiempo después del cual Ud. puede comenzar a alimentar el bioreactor para operar un
cultivo Fed-batch en estado pseudo-estacionario. Suponga las siguientes condiciones
iniciales: S0 = 10 g/L; X0 = 0.5 g/L; P0 = 0.02 g/L.
b) Si las condiciones de operación recomendadas para un Fed-Batch en estado pseudo-
estacionario son: F = 85 L/h; V0 = 1000 L; S1 = 12 g/L, con F y S1 constantes, calcular el
tiempo de operación, la masa total de células y la masa total de producto si el volumen
máximo del reactor es de 3000 L.
c) ¿Qué pasaría si el reactor comenzara a alimentarse a un tiempo t = 2,5 h después de
iniciar el sistema en discontinuo?¿Cual será el tiempo de transición?¿Los valores de XV y
PV?
Resolución
a.- Para solucionar este punto, debemos calcular el tiempo que demora el sistema batch en
llegar a una concentración de sustrato cercana a 0. Así, haciendo S = 0, se calcula el tiempo
de operación batch:
56
X0
S S0
YX / S
e max t 1 (2.103)
Luego:
X0
S0
YX / S
e max t 1 (2.104)
Despejando t se tiene:
1 S Y
t ln 0 X / S 1 (2.105)
max X0
Reemplazando valores, se obtiene que:
1 10 0, 4
t -1
ln 1 7, 32 h (2.106)
0, 3 h 0,5
b) En general, para este tipo de ejercicios debemos realizar varios pasos:
Paso 1: Cálculo de las concentraciones iniciales de X y P, es decir X0 y P0 . Teniendo el
valor de t, se puede obtener el valor final de X y P en la fase batch:
X X 0 e max t 0,5 e 0,3 7, 32 4,5 g/L (2.107)
g X
0,5
gP L e 0,3 7,32 1 2, 02 g P/L
P 0,02 g/L+0,15 -1 (2.110)
g X h 0,3 h
El valor anterior es el valor de la concentración de P al inicio de la etapa fed-batch.
57
Así:
V V0 3000 1000
t 23, 53 h -1 (2.112)
Q 85
Por lo tanto, el tiempo de operación es de 23 horas.
Paso 3: Ahora procedemos a calcular la masa de biomasa (XV) y de producto (PV), usando
las ecuaciones determinadas anteriormente para el caso de pseudo-estado estacionario.
Para la masa de biomasa (ecuación (2.27):
XV YX / S S1 Q t X 0 V0 (2.113)
Reemplazando valores:
g X g S L gX
XV 0.4 12 85 23, 53 h + 4,49 1000 L
gS L h L (2.114)
XV 14090, 24 g
Para el producto ligado directamente a crecimiento (ecuación (2.37)):
PV PV
0 0 Q S1 YX / S t YP / X (2.115)
Reeemplazando los valores:
g P L g S g X gP
PV 2,02 1000 L + 85 12 0,4 0, 5 23,53 h
L h L gS g X
PV 2020 g P + 4800,12 g P (2.116)
PV 6820,12 g P
Reemplazando valores
0,5 0,3 2,5
S 10 e 1 8, 6 g/L (2.118)
0, 4
Para la biomasa:
X X 0 e max t 0,5 e 0,3 2,5 1,06 g/L (2.119)
58
Para el producto:
P P0 X 0 YP/ X e
max t
1
gP g X 0,3 2,5 (2.120)
P 0,02 g P/L 0, 5 0, 5 e 1 0, 3 g/L
g X L
Los valores calculados anteriormente pasan a ser los valores iniciales de la etapa Fed-
Batch.
Paso 2: Dado que en este caso la alimentación comenzó antes de lograr el pseudo-estado
estacionario, nos encontramos en la situación b, es decir, alimentación en cualquier tiempo.
Así, debemos calcular el tiempo operación de la etapa de crecimiento exponencial y el
tiempo de operación de la etapa de crecimiento limitado. Para realizar lo anterior, es
necesario calcular el tiempo de transición, que no es otra cosa que el tiempo de operación
bajo la condición de crecimiento exponencial. Usando la ecuación (2.65) y definiendo:
a X 0 V0 e max tT (2.121)
b F S1 tT YX / S S0 V0 YX / S X 0 V0 (2.122)
Luego, definiendo una función que debe ser cero:
c a b (2.123)
Así, se realiza una iteración. La Tabla 1 muestra los resultados.
Tabla 1: Resultados las funciones a, b y c en función del tiempo t T.
tT a b c (a-b)
6,3 7016,5308 7070,4 -53,8691981
6,31 7037,612 7074,48 -36,8679997
6,32 7058,75654 7078,56 -19,8034628
6,33 7079,9646 7082,64 -2,67539695
6,34 7101,23639 7086,72 14,5163886
6,35 7122,57209 7090,8 31,7720853
En la Tabla 1 se aprecia claramente como se produce un cambio de signo entre 6,33 < t T <
6,34. Así, dado que se logra el cero entre 6,33 < t T < 6,34, se puede indicar que el tiempo de
transición debe ser aproximadamente 6,33 h. Así:
59
tT 6,33 h -1 (2.124)
Por lo tanto, necesariamente a las 23 horas de operación el sistema opera bajo la modalidad
de crecimiento limitado.
L g S g X g S gX g X
XV 85 12 23 h 0, 4 8, 6 1000 L 0, 4 1, 06 1000 L
h L gS L gS L
(2.126)
XV 9384 g X + 3440 g X + 1060 g X = 13.884 g X (2.127)
Para el producto (ecuación (2.64)):
PV PV0 Q S1 YX /S YP/ X t (2.128)
Reemplazando datos:
60
b) Determinar la expresión matemática para calcular la masa final de microorganismo (XV)
si la concentración de alimentación (S1 ) y la velocidad específica de crecimiento son
constantes.
Solución
Para el cálculo de S1, hacemos uso del balance de sustrato. Al aplicar la regla de la cadena
a la ecuación (2.132):
dS dV XV
V S Q S1 (2.136)
dt dt YX / S
Dado que µ es constante, entonces S también es constante (ver ecuación (2.133)), por lo
tanto la ecuación anterior se reduce a:
dV XV
S Q S1 (2.137)
dt YX / S
Luego
61
XV
S Q Q S1 (2.138)
YX/S
Despejando S1:
XV
S1 S (2.139)
Q YX / S
Dado que XV es una función exponencial y S1 depende de XV, entonces la concentración
de alimentación debe ir incrementándose exponencialmente para mantener un µ cte.
Finalmente, calculamos SV también a partir del balance de sustrato:
dSV XV XV
Q S Y (2.140)
dt Q YX / S X /S
Así:
d SV
QS (2.141)
dt
Integrando:
SV Q S t SV 0 (2.142)
En el caso b), el razonamiento es similar, sólo que en este caso las variables conocidas son
µ y S1. Por lo tanto, es el mismo sistema anterior. Del balance de masa microbiano, se tiene
que:
XV XV 0 e t (2.143)
62
XV 0
Q e t (2.147)
YX /S S1 S
Así, para este tipo de proceso, se necesita un caudal que aumente exponencialmente. Para
determinar el cambio de volumen, utilizamos la ecuación (2.130):
dV XV 0
e t a e t (2.148)
dt YX / S S1 S
1.- Un quimiostato simple de 5 litros de volumen útil presenta algunos problemas de diseño
que ocasionan una imperfecta agitación. El equipo se va a utilizar para cultivar una
levadura de μmax = 0,48 h-1 y KS = 0,072 g/L. La alimentación se hará a 1,1 L/h con una
concentración de nutriente limitante S0 = 65 g/L. En esa condición YX/S = 0,43 g/g. Para
predecir los resultados de esa experiencia se plantea un modelo que supone que un 35% del
flujo de alimentación no pasa por el fermentador, sino que se une a la corriente de salida y
que el resto ingresa al quimiostato que se considera perfectamente agitado.
a) Determine los valores estacionarios de μ, X, S y QX. (Resp: μ = 0,143 h-1; X = 27,94
g/L; S = 0,031 g/L; QX = 3,99 g/L h)
b) Comparar los resultados anteriores con los valores generados considerando un
fermentador perfectamente agitado.
63
la operación normal es con una alimentación estéril de 100 l/h que contiene 10g/l de
glucosa:
a.- ¿Cuál es la tasa específica de producción de biomasa (g/L h) en estado estacionario?
(Resp: Qx = 0,475 g/l h)
b.- Si se usara un reciclo de 10 l/h y una concentración de biomasa en el reciclo 5 veces
mayor a la concentración a la salida del reactor, ¿Cuál será la nueva tasa específica de
producción de biomasa (g/L h)? (Resp: Qx = 0,81 g/l h)
c.- Explique cualquier diferencia entre los valores encontrados en a y b.
4.- Un quimiostato de 12 m3 de volumen con recirculación de células y sin purga, posee una
alimentación fresca de 6240 L/h con una concentración de 1,2 g/L. Se pide determinar el
factor de concentración en el separador, la concentración celular en el fermentador y la
concentración de sustrato en el efluente para un factor de recirculación de 0,6.
Datos: μmax = 0,62 h-1 μ = 0,35 h-1 KS = 0,2 g/L Yx/s = 0,5 g/g.
(Resp: S = 0,259 g/L; Xreactor = 0,7 g/L; c = 1,55).
5.- Un fermentador continuo de laboratorio de 2,5 litros está acondicionado para operar con
retención de células, para lo cual tiene dos salidas: una con un filtro absoluto que retiene la
64
biomasa (y cuya fase líquida es completamente eliminada) y la otra directa desde el
fermentador. A través de la salida con el filtro fluye un 30% de la alimentación al sistema,
mientras el porcentaje restante fluye por la salida directa. Se pide:
a) Establecer las ecuaciones que describan totalmente la operación del fermentador en
estado estacionario.
b) Calcular la concentración celular y concentración de nutriente limitante en el
fermentador en estado estacionario si μmax = 0,83 h-1 , KS= 0,377 g/L e Yx/s= 0,33 g/g, con
un medio conteniendo 4 g/L de nutrientes y un flujo de 8,5 mL/min. (Resp: S = 0,0783 g/L;
X = 1,85 g/L)
c) Calcule la máxima productividad celular (Resp: Qmax = 0,38 g/l h)
65
inicia por lotes con un volumen de líquido de 20 litros. La concentración celular después de
inocular es de 0,1 g/L, en un medio de cultivo con 7,5 g/L de nutriente limitante. El cultivo
por lotes continúa hasta que la masa celular se quintuplica, iniciándose entonces la
alimentación.
Determine:
a. Condiciones iniciales del cultivo por lotes alimentado. (Resp: S = 6,61 g/L)
b. Condiciones de transición. (Resp: tT = 5,53 h; S = 0,0047 g/L; X = 12,62 g/L)
c. Condiciones finales, correspondientes al momento en que el volumen de caldo es de 30
litros. (Resp: X = 20,58 g/L; S = 0,0102 g/L).
Datos: μmax = 0,62 h-1 , KS = 80 mg/L, Yx/s = 0,45
8.- Se le ha solicitado a usted diseñar una fermentación por lotes alimentado con
alimentación constante (F y Sf constantes). El microorganismo a cultivar es una bacteria
que posee un μmax = 0,4 h-1 , Yx/s= 0,4 y KS= 0,010 g/L, cuando se utiliza glucosa como
fuente de carbono y energía. Para estos efectos se cuenta con un fermentador piloto de 200
litros de volumen total, al cual parte en régimen discontinuo con un S0 = 2 g/L, X0 = 0,05
g/L y V0 = 140 litros. Después de 3 horas, comienza a alimentarse una solución con Sf y F
desconocidos. Usando glucosa como nutriente limitante, se observó que en un tiempo de
4,6 horas se terminó la fase de crecimiento exponencial, llegando a un volumen de líquido
de 142,3 L y una concentración de sustrato de 4,72 mg/L. El tiempo total del cultivo por
lote alimentado no debe sobrepasar las 6 horas.
a. ¿Cuál debe ser el valor de F y Sf? (Resp: F = 0,5 L/h; Sf = 30 g/L)
b. ¿Cuál es la concentración final de microorganismos alcanzada al final del cultivo por lote
alimentado? (X = 1,08 g/L)
9.- En un sistema de 2 quimiostatos en serie, el volumen del primer y segundo reactor son
V1 = 500 l y V2 = 300 l, respectivamente. El primer reactor es usado para producción de
biomasa y el segundo es para formación de un metabolito secundario. El caudal de
alimentación al primer reactor es de 100 l/h, con una concentración de S = 5,0 g/l. Usando
las siguientes constantes: μmax = 0,3 h-1 ; KS = 0,1 g/L; YX/S = 0,4 g X/g sustrato:
66
a.- Determine la concentración de biomasa y sustrato en el efluente de la primera etapa.
(Resp: S1 = 0,2 g/L; X1 = 1,92 g/L)
b.- Suponga que el crecimiento es despreciable en la segunda etapa y que la velocidad
específica de formación de producto es qP = 0,02 g P/g biomasa h, con YP/S = 0,6 g P/g S.
Determine la concentración de sustrato y producto en el efluente del segundo reactor.
(Resp: P2 = 0,1152 g/L; S2 = 8 mg/L)
67
(Resp: S2 = 0,032 g/L; X2 = 22,45 g/l; 2 = 0,24 h-1 )
3.1.- Mezclado
El mezclado involucra:
Mezclar los componentes solubles en el medio, tales como azúcares.
Dispersar los gases, tales como aire, en el líquido en la forma de pequeñas
burbujas.
Mantener en suspensión los sólidos particulados tales como las células.
68
Cuando fuera necesario, dispersar los líquidos inmiscibles para formar una
emulsión o una suspensión de finas gotas.
Promover la transferencia de calor desde o hacia el líquido.
2
Del te xto “Bioprocess Engineering Principles” de Pauline Doran
69
Baffle (Placa deflectora): Usado para evitar los vortex y remolinos en el líquido.
La posición del deflector dependerá de la viscosidad del fluido (Ver Figura 3.2).
70
Impulsor: Existen variedad de diseños para diferentes tipos de fluidos. La Figura 3.3
muestra los más comunes. En cuanto a su uso, depende de la viscosidad del fluido. La
Figura 3.4 muestra las diferentes posibilidades.
3
Del te xto “Bioprocess Engineering Principles” de Pauline Doran.
71
Figura 3.4: Rango de viscosidad para diferentes tipos de impulsores4 .
4
Del te xto “Bioprocess Engineering Principles” de Pauline Doran.
72
Figura 3.5: Perfil de concentración después de inyección de un pulso de trazador al reactor.
tm: tiempo de mezclado; tc : tiempo promedio que toma el fluido para hacer 1 circuito en el
reactor (tiempo de circulación). 5
Para un líquido en un reactor con varios deflectores y un pequeño impulsor, existe una
relación aproximada entre el tiempo de mezclado y el tiempo de circulación:
t m 4 tc (3.1)
En reactores de mezcla completa industriales con volúmenes de trabajo entre 1-100 m3
tienen tiempo de mezclado entre 30 a 120 s.
El tiempo de mezclado en reactores agitados dependerá de variables tales como el tamaño
del estanque y el impulsor, las propiedades del fluido y la velocidad de agitación. La
relación entre estas variables y el tiempo de mezclado ha sido experimentalmente
determinado para diferentes tipos de impulsores. Para Rei (Numero del Reynolds del
impulsor) > 5x103 y un impulsor tipo turbina Rushton, se puede calcular:
1,54 V
Ni t m 3
(3.2)
Di
Donde
5
Del te xto “Bioprocess Engineering Principles” de Pauline Doran.
73
Ni : Velocidad rotacional del impulsor.
74
Figura 3.6: Variación del tiempo de mezclado con el N° de Reynolds para un impulsor tipo
turbina Rushton. Impulsor localizado a un tercio del diámetro del estanque sobre el fondo
del reactor. Reactor con 4 deflectores. 6
La energía eléctrica se usa para mover el impulsor en los reactores agitados. Para una
velocidad de agitación dada, la potencia requerida depende de la resistencia ofrecida por el
fluido a la rotación del impulsor.
Consumo de energía reactores pequeños (< 0,1 m3 ) = 10 kW m-3
Consumo de energía reactores grandes (100 m3 ) = 1-2 kW m-3 .
6
Del te xto “Bioprocess Engineering Principles” de Pauline Doran.
75
Experimentalmente se determinaron diferentes valores de Np en función de Rei. Los
resultados para 5 impulsores se muestran en las Figuras 3.7 y 3.8. Allí también se muestran
los diferentes valores de los parámetros geométricos.
Figura 3.7.1: Np en función del Rei para impulsores del tipo turbina Rushton (1), canalete
(2) y hélice (3). 7
7
Del te xto “Bioprocess Engineering Principles” de Pauline Doran.
76
Figura 3.7.2: Dimensiones y especificaciones para Figura 7.1. Turbina Rushton (1),
canalete (2) y hélice (3). 8
Figura 3.8.1: Np en función del Rei para impulsores del tipo ancla (1) y tornillo helicoidal
(2). 9
8
Del te xto “Bioprocess Engineering Principles” de Pauline Doran.
9
Del te xto “Bioprocess Engineering Principles” de Pauline Doran.
77
Figura 3.8.2: Dimensiones y especificaciones para Figura 1.1. Ancla (1), tornillo helicoidal
(2). 10
El valor de Np y P va a depender del régimen de flujo. Dado que tres regímenes de flujo
pueden ser identificados, las siguientes simplificaciones se pueden usar:
En régimen laminar (Rei < 10)
P k1 liq Ni2 Di3 (3.7)
En régimen turbulento
P N 'p Ni3 Di5 (3.8)
Para impulsores tipo ancla y tipo tornillo helicoidal, el flujo laminar persiste hasta Rei =
100.
Tanto k1 como NP ’ son valores constantes que deben ser especificados. Algunos valores se
muestran en la Tabla 1.
10
Del te xto “Bioprocess Engineering Principles” de Pauline Doran.
78
Tabla 1: Constantes en ecuación (3.7) y (3.8).
k1 N P'
Tipo de Impulsor
(Rei = 1) (Rei = 105 )
Turbina Rushton 70 5-6
Canalete 35 2
Hélice 40 0,35
Ancla 420 0,35
Cinta Helicoidal 1000 0,35
Con las Figuras 3.7 y 3.8, se puede calcular la potencia de agitación P, conociendo la
densidad y la viscosidad del caldo, el diámetro del rotor y la velocidad de rotación. Como
una guía, se puede decir que:
Velocidad de rotación en reactores de laboratorio: 200-1000 rpm
Velocidad de rotación en reactores industriales: 50-300 rpm
¿Qué pasa si proporciones geométricas difieren de Figura 2.7 o 2.8? En ese caso, se debe
aplicar una corrección, la cual se basa en la siguiente ecuación:
( Dt / Di ) ( H L / Di )
P Pf (3.9)
( Dt / Di ) f ( H L / Di ) f
Cuando existe aireación, se observa una baja de la potencia necesaria del orden del 40-60%,
en los rangos usuales de aireación. Lo anterior se aprecia claramente en la Figura 3.9,
79
donde Na representa el número de aireación, P representa la potencia sin aireación y Pg
representa la potencia con aireación. El número de aireación se define como:
Fg
Na 3
(3.11)
Ni Di
Figura 3.9: Relacipón entre la potencia con y sin aireación y el número de aireación Na.
(1) Turbina de 8 paletas; (2) Turbina de disco Rushton ; (3) Turbina de 4 paletas.
3.2.- Aireación.
80
3.2.1.- Demanda de O2 de un cultivo.
La demanda de oxígeno, NO2 ,se define como: “ La cantidad de oxígeno requerida por
unidad de tiempo y por unidad de volumen de cultivo”. La demanda de O2 de un cultivo
está dada por:
X
NO2 (3.14)
YX / O2
En ecuación (3.14), el valor de YX/O2 debe ser calculado desde estequiometría. Otra
definición comúnmente usada está dada por:
nO2 NO2 (3.15)
YX / O2
Esta última ecuación no es otra cosa que la demanda específica de oxígeno, cuyas unidades
típicas son g O2 / g biomasa h.
Los valores más usuales de NO2 están alrededor de 50 a 200 m- moles de O2 /L h (1.6-3.2 g
O2 / L h). Valores superiores a 120 m- moles de O2 /L h son difíciles de satisfacer en equipos
de diseño estándar y en condiciones de operación económicas.
Especie celular
Naturaleza de fuente de carbono: Sustratos más fácilmente biodegradables, mayor
es la demanda de oxígeno. Ej: Para Penicillium, las velocidades máximas de
consumo de oxígeno han sido 5.5, 6.1 y 12 mmol l-1 h-1 para lactosa, sucrosa y
glucosa, respectivamente.
Concentración de O2 : Cuando el nivel del oxígeno disuelto cae bajo cierto valor, la
demanda de O2 también depende de la concentración de O2. La dependencia de nO2
con la concentración de oxígeno molecular se muestra en la Figura 3.10. Si la
concentración de oxígeno está sobre la concentración crítica de O2 , nO2 es constante
e independiente del O2 . Por el contrario, si cO2 < cO2,crit , la demanda específica de
oxígeno depende linealmente de la concentración de O2 .
81
Figura 3.10: Efecto de la concentración de O2 en un cultivo.
En un proceso aeróbico, las moléculas de oxígeno deben vencer una serie de resistencias al
transporte antes de ser utilizadas por la célula. De acuerdo a Doran11 , 8 pasos de
transferencia de masa están involucrados en el paso del oxígeno desde el interior de la
burbuja de aire al interior de la célula. Estos pasos se muestran esquemáticamente en la
Figura 3.11.
(i) Transferencia desde el interior de la burbuja a la interfase gas-liquido: Etapa
rápida.
(ii) Movimiento a través de la interfase gas-líquido. La interfase posee una
resistencia despreciable.
(iii) Difusión a través de una capa de líquida estancada que rodea la burbuja. Debido
a la baja solubilidad del oxígeno en soluciones acuosas, se puede suponer que
esta etapa domina la transferencia de masa gas-líquido.
11
“Bioprocess Engineering Principles” de Pauline Doran
82
(iv) Transporte en del seno del líquido. En líquidos no viscosos, los gradientes de
concentración son minimizados en reactores bien mezclados. En líquidos
viscosos, esto no necesariamente se cumple, y esta resistencia comienza a ser
importante.
(v) Difusión a través de una capa de líquido estancado que rodea a la célula.
Cuando la biomasa esta suspendida, la capa de líquido estancado que rodea la
célula es muy delgada en comparación a la capa que se forma en la burbuja,
dado que la célula es mucho más pequeña que la burbuja de aire. Así, esta
resistencia puede ser despreciada. En caso de agrupaciones de células muy
grandes (biofilms), la resistencia en esta zona puede ser significativa.
(vi) Movimiento a través de una interfase líquido-célula.
(vii) Si las células están floculadas o adheridas a un soporte sólido, existe difusión a
través del sólido hasta la célula individual. Esta resistencia depende del tamaño
del flóculos o biopelícula. Si las células están suspendidas, esta etapa
desaparece.
(viii) Transporte a través del citoplasma al sitio de reacción. Generalmente se
desprecia por efectos de las distancias involucradas.
83
Figura 3.11: Etapas para la transferencia de oxígeno desde las burbujas de gas hasta la
célula.
Como se indicó en el punto anterior, cada proceso de transporte de oxígeno involucra una
cierta velocidad, pero el proceso global se realizará a la velocidad del paso más lento,
llamado paso limitante. En el caso de la transferencia de oxígeno desde el aire a la célula, el
paso limitante es la transferencia desde la burbuja hacia el seno del fluido a través de la
película de líquido alrededor de la burbuja de aire (fase (iii)).
Para la determinación de la velocidad de transferencia de oxígeno (VTO) se hace uso de la
hipótesis de las 2 películas estáticas, una a cada lado de la interfase, a través de las cuales se
producen los gradientes de presión parcial y concentración que inducen el transporte de O2 .
La Figura 3.12 muestra la situación de una interfase líquido- gas que contiene un
componente A.
Para determinar la velocidad de transferencia por unidad de volumen de fluido, se puede
realizar el siguiente razonamiento:
En estado estacionario, la velocidad de transferencia de masa de A a través de la capa de
gas estancado puede escribirse como:
WAG kG a c AG c AG ,i (3.16)
84
Figura 3.12: Gradientes de concentración para la transferencia de masa líquido-gas.
c AG ,i m c AL, i (3.18)
(3.17) para eliminarlas de las ecuaciones, usando para eso la ecuación (3.18). Así,
reemplazando la ecuación (3.18) en las ecuaciones (3.16) y (3.17):
WAG
c AG m c AL , i (3.19)
kG a
W AL c AG ,i
c AL (3.20)
kL a m
85
Ahora, multiplicando la ecuación (3.17) por m y dividiendo la ecuación (3.16) por m, se
tiene:
WAG c c AG ,i
AG (3.21)
kG a m m m
W AL m
m cAL ,i m c AL (3.22)
kL a
c AG , i cAG WAG 1
(3.23)
m m kG a m
W AL m
m cAL ,i m cAL (3.24)
kL a
Reemplazando la ecuación (3.23) en ecuación (3.20) y la ecuación (3.24) en la ecuación
(3.22), se puede eliminar las concentraciones en la frontera líquido-gas:
W AL cAG WAG 1
c AL (3.25)
kL a m k G a m
W AG W m
c AG AL m c AL (3.26)
kG a kL a
86
Definiendo un coeficiente de transferencia de masa total, tanto en la fase líquida como en la
fase gas, se tiene:
1 1 m
(3.31)
KG a kG a k L a
1 1 1
(3.32)
KL a kL a k G a m
Donde
KG = coeficiente de transferencia de masa total en fase gas.
Ó
c
WA K L a AG cAL (3.34)
m
Dado que m c AL es igual a la concentración en la fase gas que está en equilibrio con
WA KG a c AG c *AG (3.35)
k L a K L a . Por lo tanto:
WO2 k L a cO* 2 cO2 (3.37)
87
La diferencia entre la máxima posible concentración en el líquido ( cO*2 ) y la actual
de masa, la diferencia c*O2 cO2 .La solubilidad en agua pura entre 0 y 36 °C puede ser
calculada como:
c*O2 14,161 0, 3943 T 0,007714 T 2 0, 0000646 T 3 (3.38)
88
Así, pequeñas burbujas crean altas tasas de retención de gas (gas hold- up), la cual se define
como la fracción volumen que ocupa el gas en el reactor:
VG
(3.39)
VG VL
c.- Presión de gas usado para oxigenar y presión parcial del oxígeno.
La presión del gas usado para oxigenar y la presión parcial de o2 afectan el valor de cO*2 .
La relación de equilibrio entre estos parámetros para soluciones diluidas esta dada por la
ley de Henry:
pO2 pT yO2 H cO*2 (3.40)
Donde pO2 es la presión parcial del O2 en el gas, pT es la presión total de gas, yO2 es la
Una vez determinada la forma en que se transfiere el O2 desde la fase gas a la fase líquida,
se puede plantear la ecuación general del balance de oxígeno para un bioreactor
discontinuo:
89
dcO2 , L X
dt
k L a c*O2 cO2 , L YX / O2
(3.41)
Para que el cultivo pueda crecer sin limitación de oxígeno, el suministro de oxígeno debe al
menos igualar la demanda de oxígeno por el cultivo, esto es:
X
k L a cO*2 cO2 , L YX / O2
(3.42)
kL a cO*2
xmax (3.43)
YX / O2
X
YX /O2
k L amin (3.44)
(cO* 2 cO2 ,crit )
90
Se basa en la rápida reacción química de oxidación del sulfito a sulfato mediante O2 . Se
reemplaza el medio por solución de sulfito de sodio (sulfato cúprico como catalizador) y se
burbujea aire por un cierto tiempo. La reacción puede ser expresada como:
2 SO42 O2 2 SO32 0 (3.45)
entre un tiempo t2 y t1 :
c*O cO ,2
ln *2 2
kL a t 2 t1 (3.47)
cO cO ,1
2 2
La técnica por absorción consiste en eliminar el O2 de la fase líquida, burbujeando
nitrógeno, por ejemplo, hasta que cO2 = 0. Luego, se inyecta nuevamente aire, midiendo el
incremento del oxígeno en la fase líquida con el tiempo. Así, cO2 ,1 = 0 a t1 = 0 y la ecuación
(3.47) es:
cO , L
ln 1 *2 k L a t (3.48)
cO2
91
La técnica por desorción consiste en inyectar aire hasta que la concentración de saturación
sea lograda. Una vez lograda, se corta la aireación y se inyecta nitrógeno, decreciendo la
concentración de O2 . Esta disminución es medida en función del tiempo. Así, cO2 ,1 cO*2 a t1
= 0 y la ecuación 17 es:
cO*
ln 2 k L a t (3.49)
cO , L
2
vs
En ambos casos, k L a puede ser determinada desde la pendiente del gráfico ln f cO2
92
La Figura 3.14 muestra esquemáticamente la etapa 1 y 2
Etapa 2: El flujo de aire se repone antes que se alcance la concentración crítica de oxígeno,
cO2 , crit (bajo este valor la velocidad de metabolismo se hace dependiente de la concentración
1 x dcO2
cO2 c*O2 (3.51)
kL a YO2 / X dt
etapa. Además, conocemos el valor de cO*2 y el valor de cO2 para cada tiempo. Así, para
x dcO
2
v/s cO2 , obteniendo un perfil como el que se muestra en la Figura 3.15. El
YO2 / X dt
93
Figura 3.15: Esquema que muestra el gráfico de la ecuación (3.51).
12
Richards , JW. “Studies in aeration and agitation”. Progress in Industrial Microbiology, 3 141, (1961).
94
Existen varias correlaciones en la literataura especializada. Una excelente revisión de éstas
fue hecha por García-Ochoa y Gomez (2009) 13 . Para mayor información, revise esta cita.
Todo lo anterior incide en que sea dificultoso alcanzar altos valores de VTO.
En la mayoría de los casos, la inyección de oxígeno se realiza a través de la aireación. Para
lo anterior, es necesario conocer la velocidad de flujo de aire que permita alcanzar cierta
13
Garcia-Ochoa F, Go mez E. “Bioreactor scale-up and oxygen transfer rate in microbio l processes: An
overview”. Biotechnology andvances, 27, pp 153-176 (2009).
14
Acevedo F, Gentina JC, Illanes A. “Fundamentos de Ingeniería Bioquímica” (2002).
95
concentración de oxígeno en el líquido. ¿Cómo se calcula la aireación? Acevedo et al.
(2002)15 proponen calcular el flujo de aire en función de la demanda de oxígeno y la
eficiencia de absorción de O2 en el líquido, valor que varía normalmente entre 3 y 30%. La
tasa específica de aireación, que se entrega normalmente en vvm (volumen de aire por
Laire
volumen de líquido por minuto, ) se calcula como:
Lliquido min
F R T 1 1
vvm N O2 (3.54)
V P f O2 / aire
donde f O2 / aire es la fracción molar del O2 en aire (0,21), R es la constante de los gases
1.- Una fermentación se lleva a cabo en un reactor con un caldo de densidad promedio
=1200 kg/m3 y una viscosidad de 0,2 cp, siendo agitado a una velocidad de 90 rpm. Fue
introducido aire a través de un difusor a una velocidad de 0,4 vvm. El número de aireación
se relaciona con el término Pg / P como se muestra en la Figura 3.16, para un sistema no
aireado. El fermentador fue equipado con 2 sets de turbinas Rushton y 4 deflectores. Las
dimensiones del estanque, agitadores y deflectores se muestran a continuación:
Diametro de estanque, Dt = 4 m;
15
Acevedo F, Gentina JC, Illanes A. “Fundamentos de Ingeniería Bioquímica” (2002).
96
c.- kLa calculada a través de la correlación de Richards, usando un valor de K = 2.
1,2
1
0,8
Pg/P 0,6
0,4
0,2
0
0 0,05 0,1 0,15 0,2
Na
Solución
a.- Los pasos para calcular la potencia aireada y no aireada es la siguiente: 1.- Calcular el
valor de Re i ; 2.- Calcular, a través de alguno de los gráficos Np vs Rei, el número de
potencia; 3.- Calcular la potencia aireada (P) a través de la ecuación (3.6); 4.- Calcular el
factor de correción geométrica (ecuación (3.9)) si corresponde; 5.- Calcular el valor de Pg a
través de la correlación de Michel y Miller ó a través de algún gráfico Pg/P vs Na; 6.-
Calcular para el número de impulsores.
Aplicando estos pasos al ejercicio:
1.- Cálculo del Rei :
kg
1,5 rps 22 m 2 1200 3
2
N D m 3, 6 105
Re i i i
(3.55)
kg
0, 02
s m
Así, el flujo es turbulento (Rei > 1x104).
2.- Usando el gráfico Np vs Rei para una turbina Rushton (Figura 7.1), se aprecia que Np =
6.
3.- Ahora, calculamos P:
97
3 1 5 kg
P N p Ni3Di5 6 1,5 3 2 m 5 1200 3
s m
(3.56)
kg
P 7, 776 105 2 3 W 777, 6 kW
m s
El valor anterior es sólo para 1 impulsor. Dado que en este sistema hay 2 impulsores, se
tiene que:
P 777, 6 2 1555, 2 kW (3.57)
4.- Debemos revisar si el sistema nuestro concuerda con el sistema de donde sacamos el
valor de Np . Así:
Dt 4
2 (3.58)
Di 2
H L 6, 5
3, 25 (3.59)
Di 2
( Dt / Di ) ( H L / Di ) 2 3, 25
P Pf 1555, 2 1321, 67 kW (3.60)
( Dt / Di ) f ( H L / Di ) f 3 3
5.- Calculamos ahora el valor de Pg usando la Figura 16. Para lo anterior es necesario
calcular Fg y Na.
42 m3 m3
Fg 0, 4 VL 0, 4 6,5 32, 67 0,5445 (3.61)
4 min s
Ahora
m3
0, 5445
Fg s
Na 3
0, 045 (3.62)
N i Di 1,5 1 23 m 3
s
Así, usando la Figura 16, se puede obtener un valor aproximado de:
Pg
0,74 (3.63)
P
Así, calculamos el valor de Pg :
98
Pg 0, 74 1321,66 978 kW (3.64)
m3
0,5445
vS s 0, 0433 m (3.65)
12,57 m2 s
Así, usando la correlación:
0,4 0,4
Pg 978 103 0,5 0,5
0, 0433 1, 5 21,81 s (3.66)
0, 5 0, 5 -1
K La K v s N 2
V 81,68
Solución
Para este caso, la solución es iterativa. Suponiendo la que relación entre P y Pg puede ser
calculada por la correlación de Michel y Miller, entonces, se puede hacer el siguiente
cálculo iterativo para que se cumplan las siguientes condiciones:
1.- Rei mayor que 1x104 ; 2.- Np entre 5 y 6; 3.- Pg/P entre 0,8 y 0,5.
El primer paso es determinar el valor de P para 1 impulsor. Dado que la eficiencia
energética es de 72%, la potencia total para el sistema es de 72 kW. Como tenemos 2
rotores, entonces el valor de P para 1 impulsor es de 36 kW. Además:
D2 D3
VL H L t 1, 33 t (3.67)
4 4
Despejando Dt en ecuación (3.67):
Dt 3, 452 m (3.68)
Así:
99
Di 1, 036 m (3.69)
H L 4,5 m (3.70)
kg
36000 2 3
P m s
Np 3 5
(3.72)
N Di Ni 3 1, 0365 m 5 1115 kg
i
3
m
Corrigiendo el valor de P (36 kW) en función del factor de forma
( Dt / Di ) ( H L / Di ) 3,33 4,33
f 1, 27 (3.73)
( Dt / Di ) f ( H L / Di ) f 3 3
Luego:
P 36
Pf 28346, 46 W (3.74)
f 1, 27
Ahora calculamos para un régimen laminar y turbulento:
a.- Turbulento: en este caso, Np = 6. Despejando Ni desde ecuación (3.72):
kg
28346, 46 2 3
P m s
Ni 3 3 1, 62 rps (3.75)
N p Di5 kg
6 1, 0365 m 5 1115 3
m
Reemplazando Ni calculado en (3.71):
1 kg
21,53 1, 036 2 m 2 1115 3
N D s m 4,82x10
Re i i i
(3.76)
kg
0, 038
s m
Este valor es superior a 1x104 , por lo tanto, es flujo turbulento y cumple con los
requerimientos.
100
3.- En un bioreactor discontinuo con biomasa aeróbica trabajando a 18° C, se obtuvieron
los siguientes valores de oxígeno disuelto en el líquido:
Tiempo
(min) cO2 , mg/L
0 5
1 4,67
2 4,33
3 3,97
4 3,66
5 3,34
6 3,03
7 2,72
8 2,42
9 2,14
10 1,86
10,4 1,7
11 2,37
11,5 3
12 3,26
12,5 3,5
13 3,54
13,5 4,22
14 4,45
14,5 4,65
15 4,83
15,5 4,94
16 5,07
Determine el valor de kLa a través del método dinámico y obtenga el valor de qO2 si la masa
de células secas es 2 g/L.
Solución
Para encontrar el valor de kLa a través del método dinámico, la metodología es como se
mostró en el documento, es decir, se calcula NO2 en la primera parte del experimento (en
101
Calculo consumo de oxígeno
6
5
OD, mg/L 4 y = -0,3153x + 4,9527
3 R2 = 0,9988
2
1
0
0 2 4 6 8 10 12
tiempo, min
Una vez calculados estos valores, se grafica cO2 c*O2 vs NO2 + dc / dt , como se muestra en
la Figura 3.18. Allí, se aprecia que debemos descartar una serie de puntos para poder
obtener una tendencia lineal. ¿Cómo se eliminan puntos? Se descartan aquellos que no
tienen una tendencia de acuerdo a lo esperado. Por ejemplo, en la Tabla 3 se puede eliminar
cO2 = 3,52 y cO2 = 3,88, dado que los valores de dc/dt son muy diferentes o no cumplen con
OUR + dc/dt
0
-1 0 0,5 1 1,5 2
-2
-3
c-c*
-4
-5
-6
-7
datos experimentales
Una vez eliminados los puntos mencionados anteriormente, se puede calcular la pendiente
de la curva (Figura 19). En este caso, aún cuando R2 sea menor a 0,7, el valor de la
pendiente es representativo. Por ejemplo si se eliminan más puntos ( cO2 = 3,13 y cO2 =
3,38), el valor de R2 mejoraría a 0,98 (Ver Figura 20), sin embargo, el valor de la pendiente
varía sólo en un 1%.
103
OUR + dc/dt
0
-1 0 0,5 1 1,5 2
-2
-3
c-c*
y = -2,2295x - 3,1289
-4 R2 = 0,666
-5
-6
-7
OUR + dc/dt
0
-1 0 0,5 1 1,5 2
-2
-3 y = -2,2104x - 2,8701
c-c*
-4 R2 = 0,989
-5
-6
-7
N O2
nO2 (3.81)
YX /O2 X
0, 315
nO2 0,1575 mg O2 /mg X min (3.82)
2
104
4.- En un quimiostato simple se realiza una fermentación aerobia, con D = 0,3 h-1 e YX/O2
=1,45. El fermentador tiene un volumen total de 2000 L, estando lleno en un 75%. Las
relaciones geométricas son HL/Dt=2, Di/Dt=0,3. El agitador es de dos turbinas de disco de
seis paletas operando a 200 rpm. Experimentalmente, se determinó que:
0,9
P
kLa 6 g vs0, 7 (3.83)
V
donde kLa está en h-1 . La relación entre la potencia con aireación y la potencia sin aireación
puede ser descrita por la correlación de Michel y Miller. En todo momento, la
concentración de oxígeno disuelto debe mantenerse en un 10% de la de saturación. La
temperatura de fermentación es de 25 ºC. ¿Cuál debe ser la aireación (vvm) para que la
concentración celular sea de 5 (g/L)?
Solución
El objetivo de este ejercicio es calcular el valor de los vvm para lograr una concentración
de biomasa en el bioreactor de 5 g/L. Dado que:
Fg
vvm (3.84)
VL
El volumen de líquido es fácil de determinar, por lo que el principal esfuerzo está en
calcular el valor de Fg . A su vez, el valor de Fg depende de la velocidade superficial de
ascensión del gas y del área transversal del bioreactor :
Fg vs A (3.85)
El valor de v S se calcula desde la correlación, por lo que la tarea ahora es calcular el valor
de k La y Pg para reemplazar en la correlación y determinar v S .
105
En estado estacionario y dividiendo por VL:
X
0 D SO2 k L a S O*2 S O2 YX /O2
(3.87)
Despejando el valor de k La
X
D SO2
YX /O2
kLa (3.88)
S *
O2 S O2
Como se aprecia en la ecuación (3.88), se necesita calcular el valor de µ, SO2 y SO*2 para
Reemplazando datos:
SO*2 8,115 mg/L (3.92)
106
Dt
3,333 (3.95)
Di
HL
6, 667 (3.96)
Di
Di 0, 293 m (3.99)
Así, se tiene que:
2 kg
3, 333 s-1 0, 293 m 2 1000 3
Re i m 2,86 105 (3.100)
kg
0, 001
m s
Claramente, el sistema está en régimen turbulento. De allí, dado que es una turbina
Rushton, el valor de NP = 6. Despejando el valor de P desde la relación del número de
potencia NP :
P
NP (3.101)
Ni3 Di5
P N P Ni3 Di5 (3.102)
Reemplazando datos:
3
kg 3 1 5 5
P 6 1000 3 3,333 0, 293 m (3.103)
m s
P 479,73 W (3.104)
El valor anterior es válido para 1 impeller. Dado que en el sistema hay 2 impeller, se tiene
que:
P 2 479,73 959, 46 W (3.105)
Los valores anteriores son válidos para sistemas con la msimas relaciones geométricas que
las que se tienen en las gráficas y tablas. Sin embargo, el sistema que se tiene en este
107
ejercicio difiere de esas relaciones, por lo que tenemos que calcular el factor de corrección
geométrico. Así:
Dt H L
f Di Di 1, 57 (3.106)
Dt H L
Di f Di f
108
m3
0,008334
Fg s 60 s
vvm 3
0, 333 min 1 (3.113)
VL 1, 5 m 1 min
De esta manera, los vvm necesarios para mantener una concentración de biomasa de 5 g/L
es de 0,33.
2.- Una cierta fermentación discontinua que tiene una demanda máxima de oxígeno de 1,6
(g/L h), se lleva a cabo en un fermentador de 62.000 (L) de volumen útil, provisto de un
agitador de dos turbinas de disco con un motor de 250 kW. La razón HL/Dt es 1,0, mientras
que la eficiencia de absorción de oxígeno ε = 19%, la viscosidad es de 2 cp y la densidad de
1.200 (kg/m3 ). Si el motor tiene una eficiencia total de 66% y opera mediante un reductor a
130 rpm, ¿Cuál es el máximo diámetro que pueden tener los agitadores si se trabaja en un
régimen turbulento? (Resp: Di = 1,01 m)
109
sabiendo que al final de la fase exponencial la concentración de oxígeno disuelto debe ser
al menos de 2,0 mg.L-1 ? La concentración de oxígeno en saturación es de 7,5 mg.L-1 .
(Resp: vvm = 0,418; kLa = 418,18 h-1 )
6.- Se dispone de un equipo de 2 rotores que funciona a una velocidad de rotación constante
igual a 300 rpm, y cuyas características geométricas son las siguientes, HL = 1 m, Dt = 0,5
m, Di=0,2 m. Experimentos efectuados durante la fermentación en discontinuo derivan la
siguiente expresión, que relaciona el kLa con la velocidad superficial del aire en el equipo:
kLa = K * VS0.63
110
y verifique que los vvm se encuentren dentro de los rangos recomendados para
fermentaciones.
7.- El flujo de aire en 2 fermentadores fue cortado por un corto periodo de tiempo y luego
restaurado. El valor de C* fue determinado en las condiciones de operación y fue de 7,3
mg.L-1 . Use los valores de oxigeno disuelto tabulados para el reactor A y reactor B y estime
el valor de kLa de ambos sistemas. ¿Cuál de los 2 sistemas se aproxima más a un reactor
industrial? Justifique.
(Resp: Reactor A: 0,18 < kLa < 0,34 min-1 ; Reactor B: 5,6 < kLa < 8,7 min-1 ).
Reactor A:
Tiem
1 1 1 1 1 1 1 1
po, -1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
0 1 2 3 4 5 6 7
min
O2
3, 3, 2, 1, 0, 0, 0, 0, 0, 1, 1, 2, 2, 2, 2, 3, 3, 3, 3,
(mg/
3 3 4 3 3 1 0 0 3 0 6 0 4 7 9 0 1 2 2
L)
Reactor B
Tie
0 0, 0 0, 0 0, 0, 0 0, 0, 0 0, 0
mpo - 0,0 0,0 0,1 0,2
0 , 1 , 2 , 3 3 , 4 4 , 5 ,
, 1 33 67 33 33
1 7 2 7 3 3 7 4 3 7 5 7 6
min
O2 3 3 0 0 1 2 3 3
0, 1, 2, 2, 2, 3, 3,
(mg/ , , 2,5 1,2 , 0,1 , 0,3 , , , ,
0 1 1 4 9 0 2
L) 3 3 3 0 5 7 1 2
8.- Un quimiostato con recirculación de células, sin purga, opera con 12000 L y una
alimentación fresca de 6240 L/h, con una concentración de 1,2 g N/L. La población
microbiana contiene 11% N, el sustrato contiene un 1,21 % y presenta un μmax de 0,62 h-1 y
un Ks de 0,2 mg N/L. El factor de recirculación es 1,0. El fermentador tiene un agitador con
dos rotores de turbina de disco, HL/T=1,8 y D/T=0,26 y se airea con 0,8 vvm. La densidad
del caldo es 1,05 g/ml y su viscosidad 4 cp.
a) Determinar el factor de concentración del separador sólido/líquido y la concentración
celular en el fermentador y en el efluente clarificado, si la velocidad específica de
crecimiento debe ser 0,35 h-1 . (Resp: c = 1,327; X = 0,196 g/L; X1 = 0,132 g/L)
b) Calcular la velocidad de rotación del agitador para que la potencia aireada (Pg) sea de 6
kW si se requiere un flujo turbulento. (Resp: 2,55 rps)
111
112