UNIVERSIDAD DEL MAGDALENA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

LABORATORIO DE BIOLOGÍA
MICROSCOPÍA

INTRODUCCIÓN

El microscopio compuesto es un instrumento óptico que se emplea para aumentar o ampliar las
imágenes de objetos y organismos no visibles. El microscopio de luz es un sistema coordinado
de lentes dispuestos para producir una imagen aumentada y enfocada de una muestra.

La invención del microscopio de luz fue uno de los eventos más importantes en la biología, ya
que fue usado para la formulación de la teoría celular y el estudio de las estructuras biológicas a
un nivel más detallado. Hoy en día el uso de este microscopio y los que de él se derivan, sigue
siendo una herramienta fundamental para el estudio de los diversos organismos vivos.

LOGRO:

Al finalizar la práctica el estudiante estará en condiciones de

- Recordar las partes del Microscopio eléctrico.
- Explicar conceptos básicos de su funcionamiento para la aplicación en el laboratorio.
- Montar, enfocar y observar imágenes de con diferentes aumentos.
- Reconocer la importancia del microscopio en la investigación.

MATERIALES Y EQUIPOS

- Microscopios - Portaobjetos - Cubreobjetos

- Gotero - Aceite de Inmersión - Beaker de 300ml
- Agua de Charca - Tijeras* - Papel periódico*
- Hoja de block - 3 lápices de colores - Trozos de hilos de colores*
NOTA: Los elementos que tienen un asterisco* debe traerlos el estudiante.

A. DESCRIPCION DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

Se acostumbra a dividir el conjunto de las estructuras de un microscopio en las siguientes partes:

1. Sistema óptico: Aumenta y reproduce las imágenes por medio de los lentes que lo
componen. Este sistema a su vez, incluye la óptica de iluminación que dirige la luz natural
o artificial hacia la preparación que se va a observar, y la óptica de reproducción que
consta de un sistema de lentes, que a su vez se dividen en oculares y objetivos.

1.1 Objetivos: Son el sistema de lentes que producen el aumento de las imágenes
(objetos y organismos) y se hallan cerca de la preparación que se va a estudiar. Estos
objetivos son
Acromáticos, es decir, no descomponen la luz, existiendo varios tipos de ellos.

1.1.1 Objetivos Secos: Se utilizan sin necesidad de colocar una sustancia

alguna entre ellos y la preparación. El aumento de estos objetivos varía desde
poco aumento (3.2x) hasta un mayor aumento (40x). Las indicaciones en la
parte externa del objetivo, indican el aumento y la apertura numérica
respectivamente. Ej.; 40/0.65

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 a. Las lentes de los objetivos van puestas sobre un tubo corto. Otro tipo de
índices que aparecen son: “160” que indica la longitud mecánica del tubo del
microscopio. “____” que indica que el objetivo se puede trabajar con cubre
objetos. “0.17” indica que el objetivo debe tener un espesor de 0.17mm

1.1.2 De Inmersión: Para observar a través de este microscopio, es necesario

utilizar aceite de cedro entre el objetivo (100x) y la preparación. Este tipo de
objetivos se distingue por uno o dos círculos negros o por la palabra oil.

b. Los Oculares están constituidos generalmente por dos lentes (lente ocular
y lente de campo). Se denomina así porque a través de él se observa el
material. Este lente aumenta la imagen real proyectada por el objetivo y
elimina defectos de la imagen. El aumento de los oculares generalmente es
de 8-10x.

2. Sistema de iluminación:

2.1 Espejo: Capta la luz solar y la redirige hacia la muestra

a. Lámpara: Es una fuente artificial que está dispuesta en el eje vertical del
microscopio en la parte inferior, enviando los rayos de luz hacia el
condensador.
b. Condensador: Formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es
concentrar los rayos lumínicos sobre el plano de la preparación. Se halla
debajo de la platina, puede ser fijo y se mueve en forma ascendente y
descendente.
c. Diafragma: Controla la cantidad de luz que pasa a través del condensador.

3. Sistema mecánico del microscopio

3.1 Tubo: en su extremidad superior se coloca el ocular(es): en la parte inferior lleva

incorporado el revolver.
3.2 Revolver: Pieza giratoria provista de orificios donde se enroscan los objetivos
3.3 Brazo o estativo: Pieza de soporte que conecta la parte inferior o base del
microscopio con la parte superior; además sirve como apoyo para transportarlo.
3.4 Platina: Sobre la cual se coloca la preparación a observar.
3.5 Base o pie: Parte inferior sobre la cual se apoya el microscopio.
3.6 Carro: Dispositivo colocado sobre la platina que permite deslizar la preparación
de adelante hacia atrás y de derecha a izquierda.
3.7 Tornillo Macrométrico: Es el encargado de acercar o alejar la platina de los
objetivos, ayudando al enfoque rápido de la preparación.
3.8 Tornillo Micrométrico: Es el encargado de enfocar más exactamente la muestra
con movimientos más cortos que los del tornillo macrométrico.

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B. PROPIEDADES DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

1. Poder de resolución: Es la distancia mínima ente dos puntos próximos en la cual

puede verse separados. La resolución es más grande cuanto más grande sea el Índice
de refracción del medio y se logra su valor máximo cuando el medio del montaje de la
preparación. El cubreobjetos y el medio (aceite de inmersión o agua) tienen el mismo
índice de refracción.
2. Aumento del microscopio: Cifra que indica cuantas veces más grande aparece la
imagen microscópica y el mismo objeto. Se calcula multiplicando el aumento del ocular
por el del objetivo.
3. Campo del microscopio: Es el círculo visible que se observa a través del ocular.

C. CUIDADOS DEL MICROSCOPIO

La humedad y los vapores corrosivos pueden deteriorar los microscopios, por lo tanto el trabajo
del aparato debe realizarse en lugares alejados de laboratorios de química. Después de usar
el microscopio, debe protegerse del polvo cubriéndolo totalmente con una bolsa.

Los objetivos son las partes más importantes y delicadas del microscopio, por lo tanto deben
tomarse con sumo cuidado, evitando golpes y protegiéndolos del polvo y la suciedad. NUNCA
deben ser desarmados o retirados del revolver. De los objetivos, SOLO el lente frontal puede
ser limpiado, al igual que los oculares en la parte exterior de los lentes.

En los oculares se puede utilizar un tejido de hilo húmedo y luego uno seco para limpiarlos. Al
utilizar el objetivo de inmersión, se debe limpiar la superficie del lente frontal del objetivo de
inmersión con una tela de hilo suave humedecido con xilol o cualquier otro disolvente de grasa
que sea volátil. Después se pasa por la superficie del lente una parte seca del mismo tejido.

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D. USO DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

El microscopio compuesto con el cual usted estudiará durante el semestre, es un instrumento

de alta precisión y muy delicado por lo que debe ser manejado cuidadosamente, siguiendo las
instrucciones que se le darán. Para la mayoría de los trabajos, usted usará un microscopio
compuesto con aumentos entre 100 y 4000 veces el tamaño real de los objetos.

PRECAUCIONES

1. No haga ninguna operación ni mueva ninguna de las partes del microscopio hasta que
sus profesores le hayan dado las instrucciones necesarias.
2. Localice en el microscopio y según se le vaya indicando las partes: ocular, tubo, tornillo,
revolver, objetivos y su numeración, platina, carro mecánico, diafragma y su graduación,
base y lámpara.
3. Recuerde que la iluminación baja permite observar un mayor número de detalles en la
preparación, que en una iluminación intensa. La creencia de que con mayor luz se ven
más detalles, es completamente falsa. .
4. Mantenga ambos ojos abiertos y en caso de que usted use anteojos, no se los quite
para mirar por el microscopio, verificando primero que el ocular indica que si se pueden
usar los anteojos.

PROCEDIMIENTO

1) CONOCIMIENTO DEL MICROSCOPIO

- Haga rotar el revolver con los objetivos hasta que el objetivo de menor aumento entre
en línea con el tubo del microscopio. Tenga cuidado de que al hacer la rotación el objetivo
no toque la platina, pues hace que el objetivo se pierda completamente o la muestra se
corra. Esto se puede evitar bajando la platina antes de mover el revolver.

- Observe que mientras menor sea el aumento de objetivo:

a) El diámetro del lente inferior es mayor

b) La distancia de la platina es mayor

- Usted encontrará un objetivo identificado por un anillo negro o blanco. Este objetivo es
el de mayor aumento (100x de inmersión), el cual en los trabajos iniciales no se usará.
Este objetivo representa un 60% del valor del microscopio y un daño en el lente por
rayado con la platina, sería costoso y difícil de reponer.

- Habiendo centrado el objetivo de menor aumento (10x), observe por el ocular y vea el
efecto del diafragma, en cuanto a su apertura y distancia de la platina, sobre la
iluminación general. Procure tener una iluminación baja y que no le moleste a la vista. Si
el objetivo o el ocular están empañados, límpielo cuidadosamente con el papel para
lentes que se le ha dado. Esta precaución deberá tenerla continuamente.

2. MONTAJE DE MATERIALES

- Coloque sobre el portaobjetos una pequeña tira de papel periódico que tenga la letra
“E” en posición normal a lectura y agregue una gota de agua, permitiendo que la tira de
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 papel se humedezca completamente por unos segundos. Coloque luego un cubreobjetos
sobre la preparación evitando que se formen burbujas de aire. Ponga el portaobjetos
sobre la platina, centrando la preparación según se le indique.

3. ENFOQUE

- Mirando lateralmente (no por entre el microscopio) y usando el tornillo macrométrico,

acerque el objetivo de menor aumento lo más cerca posible a la preparación. Luego
mirando por el ocular, aleje o acerque la platina lentamente hasta que visualice la letra.
- Ajuste el tornillo micrométrico para tener una visión nítida, gradúe la luz usando el
diafragma. Proceda de la misma manera para visualizar la letra “A”.

• ¿Cuál es la posición de esta letra cuando se mira por el microscopio?

• ¿Qué razón daría usted para explicar la diferencia o similitud con la imagen real de lo
que está observando en su microscopio?
• Usando el carro mecánico, mueva la preparación primero hacia la derecha y lego
hacia la izquierda. ¿En qué dirección se mueve la imagen?
• Ahora mueva la preparación de arriba hacia abajo. ¿Qué sucede?

- Haga ahora una nueva preparación similar pero usando pequeños trozos de hilos de
varios colores y colóquelos en forma de asterisco y adicione una gota de agua.
-Observe primero en un menor aumento y luego use el objetivo de mayor aumento (40x),
sin mover el tubo. NO USE OBJETIVO DE INMERSION. La preparación debe entrar en
foco y solo requiere un ajuste con el micrométrico. Esta es la llamada CONDICION
PARAFOCAL.
- cambie a un aumento mayor tal como se le indicó.
• ¿Puede observar diferentes planos en las fibras?

- Trace en un papel tres líneas, una sobre otra de tres colores diferentes. Coloque el
papel sobre una lámina NO ADICIONE AGUA. Observe la apariencia a simple vista,
luego observe al microscopio y localice una región done las tres líneas estén
sobrepuestas. Usando el tornillo micrométrico, enfoque suavemente. Primero observe
con el objetivo de menor aumento y luego con el de mayor aumento.

• ¿De qué color es la capa que queda en la parte de arriba?, en el medio y en la parte
interior?
- Haga una comparación entre lo que observo a simple vista y lo que observó en el
microscopio.
En un portaobjetos agregue una gota de agua de charco y cúbrala con una laminilla.
Observe los diferentes microorganismos que pueden encontrarse allí.

4. ACTIVIDAD COMPLEMENTARIA

a. Investigue:
- sobre las buenas prácticas en el uso de microscopio.
- Sobre los diferentes tipos de microscopios y su utilización
- Sobre el funcionamiento de 3 tipos de microscopios.

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LABORATORIO DE BIOLOGÍA
MICROSCOPÍA

NOMBRE______________________________CÓDIGO____________________FECHA_____________

a. Cuando utilizó el microscopio, ¿Cómo eran las imágenes de las letras observadas
observadas?__________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
b. Dibuje

10x 40X

c. ¿Qué razón daría usted para explicar la diferencia o similitud con la imagen real de lo que
está observando en su microscopio?_______________________________________________
____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
d. Cuando movió el tornillo hacia la derecha, izquierda, abajo y arriba, ¿hacia dónde se desplazó
la imagen?
____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
e. En el montaje del asterisco de fibra o hilo ¿cambio de un aumento menor a uno mayor cambia
la posición del material en el campo visto?__________________________________________
____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
f. ¿En el caso anterior, el campo de visión muestra un área mayor o menor al hacer el cambio de
aumento al observar el objeto? ¿Aumenta la luminosidad al cambiar de bajo a alto
aumento?____________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
g. Dibuje

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h. ¿Por qué razón las muestras que se observan en el microscopio compuesto deben ser
delgadas y utilizar un medio de montaje?
____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
i. Explique las razones porque NO deben tocarse los lentes de un microscopio con los
dedos._______________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
j. ¿Por qué razón el objetivo de inmersión debe sumergirse en un líquido especial (aceite) para
poder observar la imagen microscópica?____________________________________________
____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
________________________________________________________________
k. Explique la relación entre aumento, distancia de trabajo e intensidad luminosa____________
____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
l. Calcule el aumento (poder de magnificación) de los objetos observados.

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