AMILASA LIQUIDA

METODO IFCC
Para la determinación “in vitro” de la Amilasa en suero o plasma.

Principio
α-Amilasa
5 Etilideno-G7PNP* + 5 H2O Etilideno-G3 + G4PNP + 2 Etilideno-G4 +
+ 2 G3PNP + 2 Etilideno-G5 + 2 G2PNP
α-Glucosidasa
2 G2PNP + 2 G3PNP + G4PNP + 14 H2O 5 PNP + 14 Glucosa

* 4,6-Etilideno(G7)-p-nitrofenil(G1)-α,D maltoheptaósido.
* PNP = p-Nitrofenol

Cálculos
Reactivos
Determinar la ΔE/min. obtenida an cada lectura
Kit 1 x 60 ml. (Ref. 99 60 66). Contiene: y hallar el valor medio.
A. 1 x 50 ml. Tampón / Enzimas. Ref. 99 60 88 Suero, plasma,orina
B. 1 x 10 ml. Tampón / Substrato. Ref. 99 60 90 U/ L (37º C) = 2930 x ΔE 405 nm./min.
µkal / L (37º C) = 48.8 x ΔE 405 nm./min.
Kit 1 x 120 ml. (Ref. 99 26 40). Contiene:
A. 1 x 100 ml. Tampón / Enzimas. Ref. 99 26 45 Valores Normales
B. 1 x 20 ml. Tampón / Substrato. Ref. 99 26 50 Suero / plasma: 28 - 100 U/L (0,47- 1,67 µkal/L)
Orina: ≤ 460 U/L (≤ 7.67 µkal/L)
Reactivo de trabajo
Los reactivos A y B, están listos para su uso. En caso de que se quiera
trabajar como Monorreactivo: mezclar las cantidades deseadas, pero
manteniendo la proporción 5 partes de A (Tampón / Enzimas) + 1 parte Técnica Semimicro
de B (Tampón / Sustrato). Puede llevarse a cabo con la mitad de los volúmenes indicados anterior-
Las concentraciones en la disolución reactiva son: mente.
Tampón Hepes pH 7,1 65 mM
NaCl 95 mM Prestaciones. Características de funcionamiento.
MgCl2 15 mM
Linealidad: Hasta ΔE /min. de 0,300. Con actividades superiores se
Etilideno-G7PNP 17 mM
aconseja diluir la muestra 1/10 con salina (NaCl 0.9%) y repetir el ensayo.
α-Glucosidasa ≥ 4500 U/L
Multiplicar el resultado por 10.
Estabilizantes y conservantes
Las características de funcionamiento del producto dependen tanto del
reactivo como del sistema de lectura manual o automático empleados. Los
Conservación y estabilidad
siguientes datos se han obtenido de forma manual:
Los componentes del kit almacenados en refrigerador a 2-8º C, son
estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. Una vez Coeficiente de Variación en la serie: 1,56%
mezclados los componentes A y B dicha disolución monoreactiva es Coeficiente de Variación entre series: 1,98%
estable, 2 semanas a 2-8º C y 5 días a temperatura ambiente. Proteger Exactitud: 98,8 de porcentaje de recuperación.
de la luz.
Debe evitarse la contaminación por saliva o sudor del material o de las
Muestra muestras utilizadas, pues al contener α-amilasa, falsearían los resultados.
Suero o plasma heparinizado u orina. Utilizar muestras exentas de Un ligero color amarillento de la disolución reactiva no influye en la deter-
hemólisis. minación.
En ausencia de contaminación bacteriana, la actividad α-amilásica en No hay interferencia por la Bilirrubina hasta 15 mg/dl ni Hemoglobina hasta
suero o plasma se mantiene en refrigerador a 2-8ºC, durante 6 días. 450 mg/dl.
En orina dicha actividad se mantiene 10 días 2-8ºC y 2 días a temp.
ambiente (≤ 25ºC). Control de calidad
Seriscann Normal (Ref. 99 41 48) y Seriscann Anormal (Ref. 99 46 85).
Precauciones
El reactivo contiene Azida sódica al 0,09%, manipular con precaución. La Autoanalizadores
eliminación de residuos debe hacerse según la normativa legal vigente. Adaptaciones a distintos analizadores automáticos, disponibles bajo
demanda.

Técnica Monorreactivo Birreactivo Bibliografía

1.Temp. (37ºC.) muestra muestra
Junge, W., Troge, B., Klein, G., Poppe, W., Gerber, H. (1989). Clin.
ml ml
Biochem. 22, 109 – 114.
Monorreac. (A+B) 3,00 ---
Reactivo A --- 2,50 Lorentz, K., (2000). Clin.Chem., 46, 644-649.
Muestra 0,10 0,10
Reactivo B --- 0,50
Mezclar e incubar durante 3 min., poner
en marcha el cronómetro y leer la
absorción. Repetir las lecturas
exactamente después de 1,2 y 3 min.

Lectura
Longitud de onda: Hg 405 nm; (400 - 420 nm).
Blanco: medida frente a aire.
Cubeta: Termostatizada, 1 cm. paso de luz.
Distribuidor: http://www.cromakit.es
QUIMICA CLINICA APLICADA S.A.
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Revisión: Octubre 2011 PRO4_REG9_AMIL