BIOLOGÍA MOLECULAR APLICADA EN LA AGRONDUSTRIA:

IDENTIFICACION DE AGENTES PATOGENOS.

Biología Molecular

BIOLOGÍA MOLECULAR APLICADA EN LA AGRONDUSTRIA.

IDENTIFICACION DE AGENTES PATOGENOS.

AUTORES

Osorio Cassalins Gabriela1, Pedrozo León Zulay Marcela2, Vasquez Gómez Dayelis
Carolina3.

Resumen

Debido a la gran problemática que han generado los microorganismos patógenos en la

industria, provocando en ella pérdidas cuantiosas del capital de estas. Con ayuda del avance
de la biotecnología y biología molecular se han desarrollados métodos para identificación de
los patógenos que impactan de forma negativa la industria, con el fin de saber cómo
neutralizarlos y así evitar pérdidas que afecten a los abastecedores que, en muchos casos con
agricultores, a las empresas, y a los clientes. Esta revisión bibliográfica se realizó con el fin
de definir las técnicas moleculares más importantes para la detección e identificación de
patógenos en la agroindustria. Los métodos moleculares se basan en la detección de
características genotípicas, que son mucho más estables y objetivas que las fenotípicas
tradicionalmente empleadas en microbiología. Además, el genoma bacteriano presenta
regiones de ADN variables y comunes que permiten la detección de especies, así como de
factores de virulencia y/ o toxinas. El gran aumento en la disponibilidad de información de
secuencias de ADN y de otras moléculas (ARN, ribosomas, etc.) de diferentes
microorganismos, incluyendo gran cantidad de patógenos alimentarios ha permitido el
desarrollo de diferentes métodos y técnicas para los sistemas de detección basados en ácidos
nucleicos (ADN y/ o ARN), que, usando esta información, permiten eliminar gran parte de
los inconvenientes asociados a la microbiología clásica (velocidad, especificidad, entre
otros). Las técnicas de análisis rápidos para la aplicación en la industria deben ser sencillos,
económicos y deben demostrar una sensibilidad y especificidad reproducibles. Hoy en día,
la mayoría de los métodos moleculares que cumplen todos estos requisitos, están basados en
sistemas de detección de ADN. las principales técnicas basadas en la amplificación de los
ácidos nucleicos utilizadas para la detección de microorganismos (amplificación basada en
la secuencia de ácidos nucleicos (Nucleic Acid Sequence-Based Amplification, NASBA),
amplificación isotérmica mediada por lazo (Loop-mediated isothermal amplification,
LAMP), hibridación in-situ fluorescente (Fluorescent In-Situ Hybridization, FISH) y
microarrays), así como otras que son aplicadas para la tipificación de estos (polimorfismo de
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la longitud de los fragmentos de restricción (Restriction Fragment Lenght Polymorphism,

RFLP), electroforesis en gel con campo pulsante (Pulse-Field Gel Electrophoresis, PFGE),
polimorfismo en la longitud de los fragmentos amplificados (Amplified Fragment Length
Polymorphism, AFLP) y amplificación aleatoria del ADN polimórfico (Randomly Amplified
Polymorphic DNA, RAPD). Posiblemente la técnica más conocida y utilizada para la
detección de ácidos nucleicos, sea la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y su versión
de última generación, la PCR en tiempo real o cuantitativa (qPCR).

Palabras clave

Pcr; ADN-ARN; Relp; Secuenciación; Técnicas moleculares

Abstract

Due to the great problems that pathogenic microorganisms have generated in the industry,
causing significant losses in the capital of these. With the help of the advancement of
Biotechnology and molecular biology, methods have been developed for the identification
of pathogens that negatively impact the industry, in order to know how to neutralize them
and avoid losses that affect the suppliers that Many cases with farmers, companies, and
customers. This bibliographical review was carried out in order to define the most important
molecular techniques for the detection and identification of pathogens in the agro-industry.
The molecular methods are based on the detection of genotypic characteristics, which are
much more stable and objective than the phenotypic ones traditionally used in microbiology.
In addition, the bacterial genome presents variable and common regions of DNA that allow
the detection of species, as well as virulence factors and/or toxins. The large increase in the
availability of information on sequences of DNA and other molecules (RNA, ribosomes, etc.)
of different microorganisms, including a large number of food pathogens has allowed the
development of different methods and techniques for Detection systems based on nucleic
acids (DNA and/or RNA), which, using this information, allow to eliminate much of the
drawbacks associated with classical microbiology (speed, specificity, among others). Rapid
analysis techniques for application in the industry should be simple, economical and must
demonstrate reproducible sensitivity and specificity. Today, most of the molecular methods
that meet all these requirements are based on DNA detection systems. The main techniques
based on the amplification of nucleic acids used for the detection of microorganisms (nucleic
acid sequence-based amplification, NASBA), isothermal amplification Loop-mediated
isothermal amplification, LAMP, fluorescent in-situ hybridization (fluorescent in-situ
Hybridization, FISH) and microarray), as well as others that are applied for the
characterization of these (polymorphism of the length of the Restriction fragments
(Restriction fragment Length Polymorphism, RFLP), gel electrophoresis with pulsating field
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(Pulse-field gel Electrophoresis, PFGE), polymorphism in the length of the amplified

fragments (Amplified fragment length Polymorphism, AFLP) and random amplification of
polymorphic DNA (randomly Amplified Polymorphic DNA, RAPD). Possibly the best
known and used technique for the detection of nucleic acids be it polymerase chain reaction
(PCR) and its latest generation version, PCR in Tiempo Due to the great problems that
pathogenic microorganisms have generated in the Industry, causing real or quantitative
significant (QPCR).

Keywords

PCR, DNA-RNA, RELP, sequencing, molecular techniques

Introducción microorganismos de ayudar a los cultivos.

En las últimas décadas, en el sector
agroindustrial se han venido presentando
problemáticas, debido a que se enfrentan a
las diferentes plagas que afectan de forma
directa al desarrollo de la producción de
las empresas provocando grandes pérdidas
económicas.
Teniendo en cuenta que las plagas no solo
afectan al agricultor sino a su vez afecta a
las empresas, empleados y consumidores,
ha tomado importancia para los
investigadores los cuales en busca de una
solución han llegado al descubrimiento de
plaguicidas químicos, pero, así como la
ciencia avanza también los problemas.
Los plaguicidas solucionaron parte de la
problemática, pero consigo trajeron una
mayor, esto por los daños producido al
suelo y el personal quien los utiliza por
esto los estudios nos han llevado a estudiar
más afondo la naturaleza y se descubrió el
gran potencial de un grupo
(Eddy et al., 2018)
Emplear microorganismos en la
agroindustria ha sido de gran ayuda para la
mejora, producción y mantenimiento de
alimentos, gracias al avance de la
biotecnología, pero aquellos
microrganismos que son patógenos
afectan de manera directa el campo
agroindustrial disminuyendo las
posibilidades de tener materias primas
prominentes, afectando la vida de las
plantas ornamentales y a su vez
disminuyendo la economía agrícola,
disminuyen la óptima potabilidad del agua
afectando la calidad e inocuidad de la
agroindustria.(Calero et al., 2019)
A causa de identificar y diferenciar
microorganismos benéficos de patógenos,
se han utilizado distintas técnicas de las
cuales las más importantes son las
moleculares que permiten al investigador
tener una idea clara y precisa del
microorganismo con el que va a trabajar o
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al que se va a enfrentar, con esto se
disminuyen las pérdidas y se aumenta la
producción. (Fernández et al.,2011) Este
estudio bibliográfico tiene como objetivo
principal el identificar las técnicas
moleculares que nos ayudan a la detección
de aquellos agentes patógenos que están
afectando de gran manera la agroindustria.
Marco Teórico
Agricultura
Anteriormente, junto con el desarrollo de
las grandes culturas, se produjo el
nacimiento de la agricultura como una
actividad diaria; esto no indica con
exactitud en qué momento nació esta
práctica. Cada cultura fue adoptando este
mecanismo, el cual permitía saciar sus
necesidades alimenticias y posteriormente
económicas. De la misma manera ha
venido ocurriendo a lo largo de los
tiempos, siendo una de las actividades más
realizadas a nivel mundial, y de la cual
dependen muchas áreas de la sociedad.
(Leiva Sajuria, 2014)
Agricultura y Biotecnología
Hoy en día la agricultura se ha visto
sometida a diversos cambios, todos ellos
enfocados en el beneficio de las personas
y el medio ambiente, muchos de esos
cambios implican el uso de la biología, a
través de técnicas moleculares que
permiten el desarrollo de algo nuevo a
partir de un producto original extraído de
la agricultura. Todo esto se realiza con el
fin de poder disminuir el impacto negativo
en el medio ambiente sobre el uso de
químicos en los campos agrícolas. La idea
principal es poder desarrollar alimentos
naturales, pero mantener un control en el
crecimiento de estos sin necesidad de
afectar otra cosa que haga parte de la
misma cadena alimenticia. Muchas de
estas sustancias químicas pueden producir
daños en la fertilidad de los suelos, en la
contaminación del agua e incluso de los
mismos alimentos. Por este motivo la
biotecnología se ha convertido en un
importante aliado de esta área de estudio,
ya que permite mejorar las producciones
agrícolas sin el uso de fertilizantes o
sustancias químicas que sean
contraproducentes para el ambiente y las
personas; por el contrario, trabaja con
técnicas moleculares que permiten realizar
los estudios necesarios para poder
brindarle soluciones a estos problemas.
(Alejandro Moreno, 2018)
Biotecnología y Microbiología
La biotecnología en los últimos tiempos se
ha convertido en una manera eficaz de
avanzar a través de la ciencia, realizando
estudios que permiten el desarrollo de
muchos campos de estudios, dentro de los
cuales se encuentra la industria. Este
campo brinda las herramientas que se
necesitan para poder llevar a cabo
procesos de modificaciones y/o
adaptaciones en los productos que se
brindan. Todo esto se realiza con el fin de
mejorar el campo industrial, usando como
impulso las ciencias moleculares, lo que
puede establecer un incremento en la
productividad de las empresas
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industriales. Hablando en ese sentido, se
puede establecer la importancia que tiene
la microbiología en este tema, ya que a
través de esta ciencia se puede llegar a la
generación de productos nuevos, más
avanzados o que no causen daños en el
medio ambiente. En ese sentido, los
microorganismos pueden aportar un grano
de arena en todos estos procesos
industriales dependiendo sus
características. (Rosa Oliart, 2016)
Las industrias vienen generando un
impacto grande en el medio ambiente con
el pasar de los tiempos, debido a los
desechos que producen, a las malas
prácticas de trabajo o al tipo de productos
que producen. Justo aquí es donde
comienza el trabajo de los
microorganismos. Se ha venido
estudiando la manera en la que estos
pequeños seres pueden aportar beneficios
al medio ambiente, degradando o
eliminando las consecuencias que las
industrias han dejado sobre el mismo,
Todo esto se puede realizar explotando las
características o factores a los que se
pueden someter estos microorganismos,
como lo son el pH, la temperatura, presión
etc. (Reed y col., 2013).
De esta manera se puede establecer la
relación que existe entre la industria, la
biotecnología y la microbiología. En la
biotecnología se pueden diferenciar dos
grandes áreas. Una de ellas es llamada
biotecnología verde, que es la encargada
de la parte agrícola, estudiando los
cultivos, la tierra, el agua, y examinando la
manera en la que se pueden diseñar cosas
nuevas como las plantas transgénicas que
son capaces de crecer en condiciones
ambientales muy bajas, o la creación de
plantas resistentes a plaguicidas y en cada
uno de estos procesos participan los
microorganismos. (Tang y Zhao, 2009).
Por otro lado, se encuentra la
biotecnología blanca, que es aquella que se
encarga de llevar estudios en la parte
industrial, analizando la manera en la que
se pueden mejorar los productos realizados
allí a base de fuentes renovables, células
vivas, o enzimas que sirvan como
catalizadores industriales (Tang y Zhao,
2009).
Importancia de los Microorganismos en
este campo
Los microorganismos son descritos como
organismos microscópicos capaces de
realizar diferentes actividades
metabólicas, enzimáticas, de
reproducción, de crecimiento y producción
de energía, todo esto de manera
independiente, sin ayuda de alguna otra
célula. Dentro de este grupo encontramos
las bacterias, los hongos, algas, entre otros
(Madigan y col., 2003). La función que
cada uno de ellos cumple en la vida es
supremamente importante, aunque no sean
vistos a simple vista, la tierra sin duda
alguna no sería la misma si no tuviera su
ayuda (Demain y Adrio, 2008). Los
microorganismos no solamente fueron las
primeras formas de vida sobre la Tierra,
por lo que todos los seres vivos comparten
una historia evolutiva con el mundo
microbiológico, sino que además,
actualmente sustentan la vida en ella
(Madigan y col., 2003; Demain y Adrio,
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2008). Estos pequeños organismos
presentan la mayor capacidad metabólica
y genética comparada a los demás seres
vivos (Madigan y col., 2003), lo que,
comparado a su tamaño es algo increíble.
El crecimiento que presentan, y la
capacidad o habilidad que tienen de
intercambiar genes les ha permitido vivir y
adaptarse en muchos lugares de la tierra,
ya que tienen la facilidad de acoplarse a las
condiciones que presentan estos
ecosistemas. Además, los
microorganismos son capaces de realizar
los procesos de fotosíntesis en mayor
cantidad que las plantas verdes y las algas,
convirtiéndolos en los primeros seres que
ayudan a la estabilidad del planeta, pero,
algunos de ellos son los causantes de
innumerables enfermedades en el hombre,
a este grupo lo conocemos como
“Microorganismos patógenos” (Demain y
Adrio, 2008). Se prefiere usar
microorganismos o sus productos para
producir compuestos que se podrían aislar
de plantas y animales, o ser sintetizadas
químicamente, debido a que los
microorganismos producen grandes
cantidades de metabolitos valiosos y cuya
producción vía síntesis química puede ser
muy compleja y costosa (Tang y Zhao,
2009). Con ellos se pueden obtener altos
rendimientos en la producción de
sustancias químicas, ya que tienen una alta
relación área/volumen, lo que facilita la
adquisición de los nutrientes requeridos
para sostener altos niveles de biosíntesis.
Además, pueden llevar a cabo una gran
variedad de reacciones en diversos
ambientes y medios de cultivo,
produciendo compuestos de alto valor
agregado a partir de materiales bioló gicos
y sin la generación de residuos tóxicos
(Demain y Adrio, 2008).
Las bacterias, hongos, algas entre otros,
pueden ser manipulados genéticamente a
través de técnicas moleculares,
dividiéndose en dos, in vivo e in vitro, lo
que permite aumentar la producción de
metabolitos en los mismos, y con eso se
logra la modificación de actividades
agroindustriales. (Demain y Adrio, 2008).
Por todo lo anterior, estos organismos son
clave en el desarrollo de tecnologías que
requieran de sistemas biológicos o sus
derivados.
Técnicas moleculares para la detección
de Microorganismos en Agroindustria
Una gran desventaja que presentan los
métodos de microbiología clásica, como se
ha descrito en el apartado anterior, es que
requieren varios pasos en días sucesivos
para el aislamiento de las bacterias de
interés. Esto hace que los procedimientos
sean largos y muy laboriosos. Además, los
patógenos alimentarios generalmente se
Alejandro Garrido Maestú 9 Introducción
encuentran presentes en muy bajas
concentraciones (menos de 100 ufc/ g),
pueden estar estresados ó en estado de
viables no cultivables (VNC) y pueden no
recuperarse satisfactoriamente o pasar
inadvertidas entre grandes cantidades de
microorganismos interferentes. Este hecho
constituye uno de los grandes
inconvenientes de estas técnicas (32, 33) y
puede suponer un peligro potencial para la
salud pública. Los métodos moleculares se
basan en la detección de características
genotípicas, que son mucho más estables y
objetivas que las fenotípicas
tradicionalmente empleadas en
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microbiología. Además, el genoma
bacteriano presenta regiones de ADN
variables y comunes que permiten la
detección de especies así como de factores
de virulencia y/ o toxinas . El gran
aumento en la disponibilidad de
información de secuencias de ADN y de
otras moléculas (ARN, ribosomas, etc.) ha
permitido el desarrollo de diferentes
métodos y técnicas, que usando esta
información, permiten eliminar gran parte
de los inconvenientes asociados a la
microbiología clásica (velocidad,
especificidad, entre otros). Las técnicas de
análisis rápidos para la aplicación en la
industria deben ser sencillos, económicos
y deben demostrar una sensibilidad y
especificidad reproducibles. Hoy en día, la
mayoría de los métodos moleculares que
cumplen todos estos requisitos, están
basados en sistemas de detección de ADN
(Maestú, 2013)
Amplificación basada en la secuencia de
ácidos nucleicos (Nucleic Acid
Sequence-Based Amplification,
NASBA)
La técnica NASBA ha sido
específicamente diseñada para amplificar
ARN. Se basa en el empleo de 3 enzimas:
transcriptasa reversa, ARNsaH y ARN
polimerasa T7, que actúan de modo
combinado para amplificar el ARN molde
de cadena sencilla. Se usan 2 cebadores,
uno complementario a la secuencia diana
de ARN y otro a la de ADNc (dado que se
sintetizan, tanto ARN como ADN, la
mezcla de reacción contiene dNTPs y
NTPs). Uno de los cebadores además
contiene una secuencia de reconocimiento
para la ARN polimerasa T7. (Maestú,
2013)
Amplificación isotérmica mediada por
lazo (Loop-mediated isothermal
amplification, LAMP)
La técnica LAMP se basa en el autociclado
de las hebras con desplazamiento del ADN
sintetizado por el fragmento grande de la
Bst ADN polimerasa. Fue diseñada por
Notomi et al. en el año 2000, como un
método alternativo a la PCR y al NASBA
para la amplificación de material genético.
Entre otras, presenta las ventajas de que
toda la reacción se realiza a una única
temperatura, los productos de
amplificación se pueden observar
directamente sin necesidad de ningún
equipo y presenta una alta especificidad ya
que utiliza un total de seis cebadores para
realizar la amplificación (Maestú, 2013)
Hibridación in situ fluorescente
(Fluorescent In-Situ Hybridization,
FISH)
Esta técnica se suele utilizar para realizar
estudios sobre la presencia y distribución
de determinadas cepas en comunidades
microbianas, sin tener que recurrir al uso
de cultivos. En primer lugar se fija la
muestra, en el caso de bacterias Gram
positivas se permeabilizan las células
usando proteinasa K para que puedan
entrar las sondas fluorescentes. A
continuación se usan sondas fluorescentes
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complementarias al ADN aunque no
tienen porqué ir dirigidas única y
exclusivamente a una diana. Distintos
estudios han utilizado ARNr o ARNm de
las bacterias de interés marcadas con un
fluoróforo (52-54). Se realiza una
incubación y finalmente las células
marcadas pueden ser visualizadas con un
microscopio de fluorescencia (21). Esta
técnica, con diferentes variantes, se ha
empleado para detectar y cuantificar
distintos microorganismos en el medio
ambiente, alimentos e incluso poblaciones
dentro de los biofilms bacterianos
(Maestú, 2013)
Microarrays de ADN
Uno de los últimos grandes avances en las
técnicas de biología molecular son los
microarrays de ADN (60). Se diseñaron
originariamente para el análisis de
expresión génica (61) y se componen de un
número determinado de sondas de ADN
fijadas a un substrato sólido. Cada sonda
se corresponde con un oligonucleótido
específico de una secuencia de ADN diana
(también se puede utilizar ARN 16S y 23S
(62)). Se realiza una PCR tras la cual los
fragmentos amplificados se unen
exclusivamente a las sondas
complementarias. Uno de los
oligonucleótidos usados en la PCR lleva
un marcaje fluorescente por lo que los
sitios donde se ha unido el ADN presentan
fluorescencia (21). Debido a su alto
rendimiento, ya que permite analizar un
elevado número de muestras o dianas, se
pueden utilizar para detectar e identificar
diferentes genes pertenecientes a una
misma especie bacteriana, o a varios
patógenos de modo simultáneo en
muestras de diferentes orígenes
(alimentos, cultivos, animales, etc.) (32).
Con esta técnica se eliminan las
limitaciones del poder de resolución de los
geles de agarosa que presenta la PCR o del
número de fluoróforos diferentes que
puede detectar un equipo de qPCR (21, 38,
61-63). Estudios recientes han demostrado
que los errores de reproducibilidad y
precisión de esta técnica se encuentran
asociados al tipo de muestra analizada y,
principalmente, a errores humanos
(Maestú, 2013)
PCR Convencional
Consiste en el uso de dos oligonucleótidos
(cebadores) que se unen, cada uno a una
hebra de ADN en sentido 5’ → 3’. Cada
cebador hibridado proporciona un punto
de partida para la ADN polimerasa que lo
amplifica añadiendo desoxinucleótidos.
Este proceso se repite durante varios ciclos
de desnaturalización del ADN, hibridación
y extensión mediante el ajuste a la
temperatura óptima para etapa (40, 65,
66)}. Tras la repetición de varios ciclos se
consigue la amplificación específica, y
aumento exponencial, de la secuencia de
ADN que se encuentra definida entre
ambos cebadores, como se observa en la
Figura 4. La forma más habitual de
detectar el producto de la reacción es
realizando una electroforesis, que separa
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los fragmentos por tamaño, y tinción con La qPCR se diferencia de la PCR

bromuro de etidio que permite ver el
fragmento bajo luz ultravioleta; aunque
existen otras posibilidades como ELISA o
Southern blot (64, 65, 67). El fundamento
de la técnica era tan sencillo que el propio
Dr. Mullis se sorprendió de que nadie se
hubiera dado cuenta de sus posibilidades
con anterioridad (68). El impacto que
supuso la aparición de esta técnica, por sus
múltiples aplicaciones, fue tal que, en
1993 se le concedió el Premio Nobel de
química al Dr. Mullis. (Maestú, 2013)
PCR en tiempo real o cuantitativa
(qPCR)
convencional en que los procesos de
amplificación y detección se producen de
manera simultánea, en el mismo vial
cerrado, sin necesidad de ninguna acción
posterior (electroforesis, tinción con
bromuro de etidio, etc.) lo cual reduce las
posibilidades de contaminación cruzada.
La detección del producto de
amplificación se realiza mediante
fluorescencia, y se puede medir la cantidad
de ADN sintetizado en cada momento, ya
que la emisión de fluorescencia producida
en la reacción es proporcional a la cantidad
de ADN formado. (Maestú, 2013)

BIBLIOGRAFÍA

Eddy J. Bautista; Leyanis Mesa; Martha I. y Gómez A. (2018). Alternativas de

producción de bioplaguicidas microbianos a base de hongos: el caso de América Latina
y El Caribe. Rev. Scientia Agropecuaria 9(4): 585 – 604. Tomado de:
http://revistas.unitru.edu.pe/index.php/scientiaagrop.

Calero; A. Quintero; E. Pérez; A. Olivera; D. Peña; K. y Jiménez; J. (2019). Efecto entre

microorganismos eficientes y fitomas-e en el incremento agroproductivo del frijol. rev.
Biotecnología en el Sector Agropecuario y Agroindustrial Vol. 17 No 1. ISSN - 1692-
 BIOLOGÍA MOLECULAR APLICADA EN LA AGRONDUSTRIA:

IDENTIFICACION DE AGENTES PATOGENOS.

Biología Molecular

3561. Tomado de: http://www.scielo.org.co/pdf/bsaa/v17n1/1692-3561-bsaa-17-01-

00025.pdf

Fernandez; H. Guevara; C. San vicente; F. Marin; R. y Subero; L. (2011). Detección de

marcadores microsatelites asociados con la resistencia a curvularia pallescens (Boedijin)
maíz. Rev. Científica UDO agrícola 11(1):93-96. Tomado de:
http://www.bioline.org.br/pdf?cg11009

Garrido, A. (2013). Aplicación de la PCR en tiempo real para la detección de patógenos en

la industria alimentaria, 169. https://doi.org/10.1016/j.resuscitation.2017.07.018

Universidad Nacional de Colombia. Departamento de Biologiá , C. L., OSORIO, N. W., &

MARÍN MONTOYA, M. (2013). Acta biológica colombiana. Acta Biológica Colombiana
(Vol. 18). Universidad Nacional de Colombia. Retrieved from
http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0120-548X2013000200007

Limitaciones, V. Y. (2014). a20V31N3(1), 31(3), 535–546.

Morales, R., Valenzuela, E., González, C., Riegel, R., & Aravena, M. (2016). Distribución
geográfica y caracterización fenotípica y molecular de Neonectria fuckeliana, asociado
a cancros fustales de Pinus radiata en Chile. Bosque (Valdivia), 36(3), 531–541.
https://doi.org/10.4067/s0717-92002015000300019

Galvis, F., & Carrillo, M. (2015). Identification and characterization molecular of

Burkholderia glumae, causal agent of bacterial panicle blight in rice | Identificación y
caracterización molecular de aislados de Burkholderia glumae, agente causante del
añublo bacterial en el cultivo de a. Informacion Tecnologica, 26(3), 33–40.
https://doi.org/10.4067/S0718-07642015000300006

Patricia, S., Gómez, M., Eugenia, S., Berdugo, B., & Valencia, C. M. (n.d.). arbusculares
como alternativa para el fortalecimiento del cultivo de aguacate ( Persea americana
Miller ) en Colombia B ioprospección de hongos micorrízicos Bioprospecting of fungi
mycorrhizal mycorrhizal as an alternative for the strengthening of the cul, 71–80.

Puentes, L. N. D. (2009). Interacciones moleculares entre plantas y microorganismos:

saponinas como defensas químicas de las plantas y su tolerancia a los
microorganismos. Una revisión. RET. Revista de Estudios Transdisciplinarios, 1(2),
32–55. Retrieved from http://www.redalyc.org/resumen.oa?id=179214945004
 BIOLOGÍA MOLECULAR APLICADA EN LA AGRONDUSTRIA:

IDENTIFICACION DE AGENTES PATOGENOS.

Biología Molecular

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR IDENTIFICACIÓN MOLECULAR DEL

FITOPLASMA CAUSANTE. (2017).

Domínguez-Serrano, D., García-Velasco, R., Mora-Herrera, M. E., & Salgado-Siclan, M.

L. (2015). Identificación y alternativas de manejo de la cenicilla del rosal. Revista
Mexicana de Fitopatología, Mexican Journal of Phytopathology.
https://doi.org/10.18781/r.mex.fit.1509-1

Caicedo Morales Sugey, C. M. J. (2012). Universidad Politécnica Salesiana Sede – Quito.

https://doi.org/10.20868/UPM.thesis.39079

Salazar, I. C., Granja, E. M., Peña, F., Cabezas, M., Gómez, J., Correo, I. a I. a, …
Agronómica, I. (2010). Identificacion del Agente Causante de la Marchitez de Proteas
( Leucadendron sp .). Udca, (13), 79–87.

Yunari, L., Castro, M., Marina, L., & Forero, L. (2010). Identificación De Hongos
Fitopatógenos Asociados Al Roble, 13(2), 347–356.

Cabra, T., Alonso Rodríguez, C., & Villota, C. (2014). Capacidad antagónica y quitinolítica
de microorganismos aislados de residuos de Higuerilla (Ricinus communis).
Biotecnología En El Sector Agropecuario y Agroindustrial, 12(1), 56–61.

PASTRANA PELUCHE, Y. I., Acevedo Correa, D., & DURANGO VILLADIEGO, A. M.

(2017). Efecto Antimicrobiano Del Clavo Y La Canela Sobre Patógenos. Biotecnoloía
En El Sector Agropecuario y Agroindustrial, 15(1), 56.
https://doi.org/10.18684/bsaa(15)56-65

Filippone, M. P., Perera, M. F., Salgado, M., García, M. G., Vellicce, R., & Castagnaro, A.
P. (2010). Diagnóstico molecular de enfermedades sistémicas de la caña de azúcar en
la Argentina : ajuste metodológico y aplicaciones. Rev. Ind. y Agríc. de Tucumán,
87(2), 1–11.

Peyrou, M., Rigamonti, N., Del Campo, R., Russi, P., Larrechart, L., Pérez Faggiani, E., &
Mara, H. (2012). Técnicas biológicas, serológicas y moleculares para la detección
asintomática de Xanthomonas axonopodis pv. citri. Agrociencia Uruguay, 124–133.
Retrieved from http://www.scielo.edu.uy/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S2301-
15482012000100015&lang=es

Buitrón-Bustamante, J. L. (2016). Estandarización de un método de detección molecular

del Cucumber mosaic virus (cmv) en banano ecuatoriano. Corpoica Ciencia y
Tecnología Agropecuaria, 18(1), 113.
https://doi.org/10.21930/rcta.vol18_num1_art:562
 BIOLOGÍA MOLECULAR APLICADA EN LA AGRONDUSTRIA:

IDENTIFICACION DE AGENTES PATOGENOS.

Biología Molecular

Guigón-López, C., Guerrero-Prieto, V., Vargas-Albores, F., Carvajal-Millán, E., Ávila-

Quezada, G. D., Bravo-Luna, L., … Lorito, M. (2010). Identificación Molecular de
Cepas Nativas de Trichoderma spp. su Tasa de Crecimiento in vitro y Antagonismo
contra Hongos Fitopatogenos. Revista Mexicana de Fitopatología, 28(2), 87–96.
Retrieved from
http://search.ebscohost.com/login.aspx?direct=true&db=a9h&AN=88996470&lang=e
s&site=ehost-live

Núñez, A. (2017). Aislamiento e identificación molecular de agentes fúngicos de la frutilla

(Fragaria sp.) de Pichincha-Ecuador.

Fernández, H., Guevara, C., San Vicente, F., Marin, C. R., & Subero, L. (2011). Detección
de marcadores microsatélites asociados con la resistencia a Curvularia pallescens
(Boedijn) en maíz. Revista Cientifica UDO Agricola, 11(1), 89–96.

Velasco-Belalcazar, M. L., Hernandez-Medina, C. A., Henao-Henao, E. D., Salazar-

González, C., & Gómez-López, E. D. (2018). Identificación molecular de aislamientos
de Fusarium asociados a maracuyá en el Valle del Cauca, Colombia. Agronomía
Mesoamericana, 29(1), 53. https://doi.org/10.15517/ma.v29i1.27114

Contreras, L. Y. S. (2016). Identificación molecular de aislamientos de Moniliophthora

roreri en huertos de cacao de Norte de Santander, Colombia. Acta Agronomica, 65(1),
51–57. https://doi.org/10.15446/acag.v65n1.47994

Sánchez-García, B. M., Espinosa-Huerta, E., Villordo-Pineda, E., Rodríguez-Guerra, R., &

Mora-Avilés, M. A. (2017). Identificación molecular y evaluación antagónica in vitro
de cepas nativas de trichoderma spp. sobre hongos fitopatógenos de raíz en frijol
(Phaseolus vulgaris L.) cv. montcalm. Agrociencia, 51(1), 63–79.

Victoria, H., Elena, M., & Patricia, S. (2011). Disponible en:

http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=263122300003.

Bocourt, P., Izaguirre, G., García, G., Flores, V., Ramos, R., Atencio, P., … Almandoz, J.
E. (2011). Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=209123682002.

Páez, F. A. R., Salazar, V. G., Acosta, J. G. G., & López, P. A. O. (2016). Caracterización
molecular, análisis morfológico y colonización micorrízica en la rizósfera del aguacate
(Persea americana Mill) en Caldas, Colombia. Acta Agronomica, 65(4), 398–405.
https://doi.org/10.15446/acag.v65n4.51714

Restrepo, J. A. Á., Gaviria, P. A. R., Montoya, M. M., Biología, L. De, Ciencias, F. De, &
Medellín, S. (2008). Detección molecular de Ralstonia solanacearum agroecosistemas
bananeros de Colombia en, 33, 197–203.
 BIOLOGÍA MOLECULAR APLICADA EN LA AGRONDUSTRIA:

IDENTIFICACION DE AGENTES PATOGENOS.

Biología Molecular

Gonzáles, C. A., Villa, J. M., & Carrera, J. (2006). La Biotecnología y su comercio.

Facultad de Ciencias Agropecuarias, 4(1), 77–86. Retrieved from
http://www.unicauca.edu.co/biotecnologia/ediciones/vol4/9.pdf

�lvarez L�pez, C. L., Osorio Vega, N. W., & Mar�n Montoya, M. A. (2013). Molecular
identification of microorganisms associated to the rhizosphere of vanilla plants in
colombia. Acta Biol�gica Colombiana; Vol. 18, N�m. 2 (2013); 293-306 Acta
Biol�gica Colombiana; Vol. 18, N�m. 2 (2013); 293-306 1900-1649 0120-548X,
18(2), 293–306. Retrieved from
http://revistas.unal.edu.co/index.php/actabiol/article/view/37216

Boeira Cataneo, C., Caliari, V., Valdemiro Gonzaga, L., Marta Kuskoski, E., & Fett, R.
(2008). Atividade antioxidante e conteúdo fenólico do resíduo agroindustrial da
produção de vinho Antioxidant activity and phenolic content of agricultural by-
products from wine production. Semina: Ciências Agrárias, 29(1), 93–102.

Botero, M. J., & Franco, G. (2016). Identificación y caracterización preliminar del agente
causal de la mancha necrótica de las hojas de la mora (Rubus glaucus) en el muncipio
de Trujillo (Valle del Cauca, Colombia). Corpoica Ciencia y Tecnología
Agropecuaria, 8(2), 22. https://doi.org/10.21930/rcta.vol8_num2_art:90

Andrade, H. B., Cuesta, X. Z., & Oyarzún, P. (1990). Mejoramiento Participativo en

Ecuador Aplicado al Incremento de la Severidad de Phytophthora infestans en el
INIAP Introducción Líneas de Acción y Objetivos Zonas Agroecológicas El programa
se llevó a cabo en las siguientes zonas agroecológicas del país, 1–10.

Vol, M. A., & Asades, A. (2016). No Title, 20, 29–36.

Blanco, E. L., Castro, Y., Olivo, A., & Skwierinski, R. (2018). Germinación Y Crecimiento
De Plántulas De Pimentón Y Lechuga Inoculadas Con Rizobios E Identificación
Molecular De Las Cepas, 30(3), 207–218.

Antonia Artola, M., & Ernesto de Vega, R. (2012). Tecnología: Resultados De

Investigación, (August). Retrieved from www.revistagpt.usach.cl

Tommy, L. C. V, Of, P., Bacteria, P., Mango, I. N., Tommy, L. C. V, Osuna-garcía, J. A.,
… Vázquez-vázquez, C. (2015). PREVALENCIA DE BACTERIAS PATÓGENAS
EN MANGO, 5–12.

Valenzuela, N. P. (2006). Evaluación de bioinsecticidas a base de neem para el control de

gusano cogollero ( Spodoptera frugiperda ( Smith )) en el cultivo de maíz ( Zea mayz
L .), 55. Retrieved from
http://biblioteca.itson.mx/dac_new/tesis/168_noel_pimienta.pdf
 BIOLOGÍA MOLECULAR APLICADA EN LA AGRONDUSTRIA:

IDENTIFICACION DE AGENTES PATOGENOS.

Biología Molecular

Cuéllar-Anjel, J. (2013). Vibriosis Página 2 de 5, 1–5. Retrieved from

http://www.codexalimentarius.org/search-

Aguilar-Ulloa, W., Arce-Acuña, P., & Rivera-Méndez, W. (2016). Identificación y

caracterización molecular del hongo causante de la pudrición blanca en Allium cepa,
en Llano Grande de Cartago, Costa Rica. Revista Tecnología En Marcha, 29(7), 51.
https://doi.org/10.18845/tm.v29i7.2705

Gutiérrez, F., Casados, L., & Barboza, J. (2016). Desarrollo De Biosensores Para La
Detección De Patógenos En Alimentos. Jovenes En La Ciencia, 2(1), 1150–1154.

Alvarez, M., Ortiz, F., Perez, J., Weiler, N., Huber, C., Orrego, M., … Piris, L. (2017). First
results of the comprehensive surveillance of the antimicrobial resistance of foodborne
pathogens, Campylobacter spp . and Salmonella spp ., in three different populations.
Paraguay, 2011-2012. Memorias Del Instituto de Investigaciones En Ciencias de La
Salud, 15(2), 64–72. https://doi.org/10.18004/mem.iics/1812-9528/2017.015(02)64-
072

Ramírez-Rojas, S., Osuna-Canizalez, F. D. J., García-Pérez, F., Canul-Ku, J., Hernández-

Romano, J., Ornelas-Ocampo, K., & Landa-Salgado, P. (2016). Identificación
molecular de bacterias asociadas a plantas ornamentales producidas in vitro. Revista
Mexicana de Fitopatología, Mexican Journal of Phytopathology, 173–183.
https://doi.org/10.18781/R.MEX.FIT.1511-3

Velasco-Belalcazar, M. L., Hernandez-Medina, C. A., Henao-Henao, E. D., Salazar-

González, C., & Gómez-López, E. D. (2018). Identificación molecular de aislamientos
de Fusarium asociados a maracuyá en el Valle del Cauca, Colombia. Agronomía
Mesoamericana, 29(1), 53. https://doi.org/10.15517/ma.v29i1.27114

Mardones P, G., López M, J., Mardones P, G., & López M, J. (2017). IMPLICANCIAS DE
Campylobacter spp. COMO PATÓGENO ALIMENTARIO. Chilean Journal of
Agricultural & Animal Sciences, 33(ahead), 0–0. https://doi.org/10.4067/S0719-
38902017005002005

Universidad del Cauca. Facultad de Ciencias Agropecuarias, D. P., VILLADA, H. S., &
MOSQUERA, S. A. (2010). Biotecnología en el sector agropecuario y agroindustrial.
Biotecnología en el Sector Agropecuario y Agroindustrial (Vol. 8). Universidad del
Cauca, Vicerrectoria de Investigaciones. Retrieved from
http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1692-
35612010000200015

Asociación Argentina de Microbiología., J. G., Porto, E., de Alencar, S. M., da Glória, E.

M., Corrêa, C. B., & Ribeiro Cabral, I. S. (2013). Revista argentina de microbiología.
 BIOLOGÍA MOLECULAR APLICADA EN LA AGRONDUSTRIA:

IDENTIFICACION DE AGENTES PATOGENOS.

Biología Molecular

Revista argentina de microbiología (Vol. 45). Asociación Argentina de Microbiología.

Retrieved from http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-
75412013000200006