Una bacteria que puede crecer mediante el uso de arsénico en lugar de fósforo

Felisa Wolfe-Simon, 1,2 * Jodi Switzer Blum, 2 Thomas R. Kulp, 2 Gwyneth W. Gordon, 3 Shelley E. Hoeft, 2
jennifer Pett-Ridge, 4 John F. Stolz, 5 Samuel M. Webb, 6 Peter K. Weber, 4 Paul CW Davies, 1,7 Ariel D. Anbar, 1,3,8 Ronald S. Oremland 2

1 Instituto de Astrobiología de la NASA, EE.UU.. 2 US Geological Survey, Menlo Park, CA, EE.UU.. 3 Escuela de Exploración Terrestre y Espacial de la Universidad del Estado de

Arizona, Tempe, AZ, EE.UU.. 4 Laboratorio Nacional Lawrence Livermore, Livermore, CA, EE.UU.. 5 Departamento de Ciencias Biológicas, Universidad de Duquesne, Pittsburgh, PA,

EE.UU.. 6 Stanford de Radiación Sincrotrón Fuente luminosa, Menlo Park, CA, EE.UU.. 7 ALLÁ: Centro de Conceptos Fundamentales en Ciencias de la Universidad del Estado de

Arizona, Tempe, AZ, EE.UU.. 8 Departamento de Química y Bioquímica de la Universidad del Estado de Arizona, Tempe, AZ, EE.UU..

* A quién debe dirigirse la correspondencia. E-mail: felisawolfesimon@gmail.com

La vida se compone sobre todo de los elementos carbono, hidrógeno, nitrógeno,
oxígeno, azufre y fósforo. Aunque estos seis elementos conforman los ácidos
nucleicos, proteínas y lípidos y por lo tanto la mayor parte de la materia viva, es
teóricamente posible que algunos otros elementos en la tabla periódica podrían
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biología es el fosfato (PO 43-), que se comporta de manera similar al arseniato (ASO 43-)
en la gama de gradientes de pH y redox biológicamente relevantes ( 6). La similitud
físico-química entre AsO 43- y PO 43- contribuye a la toxicidad biológica de AsO 43- porque
las vías metabólicas destinados a PO 43- no puede distinguir entre las dos

servir las mismas funciones. Aquí describimos una bacteria, la cepa GFAJ-1 de la moléculas ( 7) y arseniato se puede incorporar en algunos pasos tempranos en las

Halomonadaceae, aislado del lago Mono, CA, que sustituye el arsénico por vías de [( 6) y refs él]. Sin embargo, se piensa que los procesos metabólicos aguas

fósforo para mantener su crecimiento. Nuestros datos muestran evidencia de abajo son por lo general no es compatible con moléculas de As-incorporan debido

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arseniato en macromoléculas que normalmente contienen fosfato, ácidos y a diferencias en las reactividades de P- y AS-compuestos ( 8). Estas vías

proteínas más notablemente nucleicos. Intercambio de uno de los principales bioquímicas aguas abajo pueden requerir los metabolitos químicamente más

bioelementos puede tener un profundo significado evolutivo y geoquímico. estables a base de P; los tiempos de vida de más fácilmente hidrolizado como
portadoras se cree análogos a ser demasiado corto. Sin embargo, dadas las
similitudes de As y P, y por analogía con las sustituciones de elementos traza, la
hipótesis de que AsO 43-

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dependencia Biológica en los seis principales elementos nutrientes de carbono,

hidrógeno, nitrógeno, oxígeno, azufre y fósforo se complementa con un conjunto

seleccionado de otros elementos, generalmente de metal (Loid) s presentes en

podría sustituir específicamente para PO 43- en un organismo que posee mecanismos para
cantidades traza que sirven para funciones celulares críticos, tales como co enzima
hacer frente a la inestabilidad inherente de AsO 43- compuestos ( 6). En este sentido,
(-factores 1). Hay muchos casos de estos elementos traza que sustituyen unos por otros.
experimentalmente a prueba esta hipótesis mediante el uso de AsO 43-, combinada con no PO
Algunos ejemplos incluyen la sustitución de tungsteno para el molibdeno y el cadmio
añadido 43-,
para el zinc en algunas familias de enzimas ( 2, 3) y cobre para el hierro como un
para seleccionar y aislar un microorganismo capaz de llevar a cabo esta
transportador de oxígeno en algunos artrópodos y moluscos ( 4). En estos ejemplos y
sustitución.
otros, los oligoelementos que intercambian comparten similitudes químicas que facilitan
Geomicrobiología de GFAJ-1. Mono lago, situado en California es un
el intercambio. Sin embargo, no hay informes anteriores de sustituciones para cualquiera
cuerpo de agua hipersalina y alcalina con concentraciones de arsénico
de los seis elementos principales esenciales para la vida. Aquí presentamos pruebas de
disueltos altas (200? M, en promedio, 9). Utilizamos los sedimentos del lago
que el arsénico puede sustituir a fósforo en las biomoléculas de una bacteria de
como inóculos en un medio artificial aeróbica se define a pH 9.8 ( 10, 11)
formación natural.

que contiene glucosa 10 mM, vitaminas, metales traza, pero sin adición de PO 43- ni cualquiera

de los suplementos adicionales complejos orgánicos (extracto por ejemplo, de levadura,

peptona) con un régimen de aumento de AsO 43- adiciones inicialmente que abarca el rango de
Arsénico (As) es un análogo químico de fósforo (P), que se encuentra
100? M a 5
directamente debajo de P en la tabla periódica. El arsénico posee un radio
mM. Estos enriquecimientos se tomaron a través de muchas transferencias de dilución
similar atómica, así como cerca de electronegatividad idéntica a P ( 5). La forma
decimal- reduciendo en gran medida cualquier arrastre potencial de
más común de P en

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fósforo autóctonas ( 11). El fondo PO 43- en el medio fue 3,1 (± 0,3) micras en
promedio, con o sin AsO añadido 43-, procedentes de trazas de impurezas en las
principales sales ( 11) ( Tabla S1). La sexta transferencia de los ASO 5 mM 43- ( sin células -p, posiblemente un resultado de la recogida durante la fase y las pérdidas
adición de PO 43-) condición fue seguido de cerca y demostró una tasa de
crecimiento aproximada (μ) de 0,1 día- 1.
después de 10- 7 diluciones, hemos utilizado la mM AsO 5 43- enriquecimiento para
inocular una placa de agar que contenía la misma composición química que el
medio artificial. Una colonia aislada fue recogido de las placas de agar, reintroducido
en un medio líquido artificial sin PO añadido 43- donde aumenta entonces
progresivamente la AsO 43- concentración para determinar el nivel óptimo para el
crecimiento. Actualmente este aislado, la cepa GFAJ-1 identificado por 16S rRNA
secuencia filogenia como un miembro de la familia Halomonadaceae de
Gammaproteobacteria (ver fig. S1) ( 11), se mantiene aeróbicamente con AsO 40 mM 43-,
glucosa 10 mM y no PO añadido 43- (+ Como / -P condición). Los miembros de esta
familia han demostrado previamente para acumular intracelular Como ( 12).
GFAJ-1 creció a una μ promedio máx de 0,53 día- 1 bajo + As / -
P, aumentando en más de 20 veces en el número de células después de seis días. También
creció más rápido y más ampliamente con la adición de PO 1,5 mM 43- (- Como / + P, μ máx de
0,86 día- 1, La Fig. 1A, B). Sin embargo, cuando ni AsO 43- ni PO 43- se añadió, no se observó
crecimiento (Fig. 1A, B). Se incluyen tanto la densidad óptica y los recuentos de células
directos para demostrar de forma inequívoca crecimiento utilizando dos métodos
independientes. Las células cultivadas en + As / -P eran oblonga y aproximadamente dos
por uno micras cuando se fotografiada por microscopía electrónica de barrido (Fig 1C, 11). Cuandobacteriano secuenciado promedio para ser 3.8 Mbps, que contendrían
se cultiva bajo + como las condiciones / -P, las células GFAJ-1 tenían más de
1,5 veces mayor volumen intracelular (vol. ≈ 2,5 ± 0,4 micras 3) en comparación con
-Como / + P (vol. ≈ 1,5 ± 0,5 micras 3) ( Fig. 1D) ( 11).
Microscopía electrónica de transmisión reveló grandes regiones de vacuolas como en +
células / -P crecido como que pueden explicar este aumento de tamaño (Fig. 1E). Estos
experimentos demostraron crecimiento arseniato-dependiente, diferencias morfológicas
en GFAJ-1 impulsado por ASO 43- en el medio de crecimiento, y el hecho de que el nivel
de PO 43- impurezas en el medio fue insuficiente para provocar el crecimiento en el control
(-Como / -P).
estequiometría celular y la distribución elemental. Para determinar si
GFAJ-1 estaba tomando AsO 43- a partir del medio, se midió la intracelular Como
contenido por ICP-MS ( 11). En
+ Como células / -P crecido, la media intracelular como era 0,19 (±
0,25)% en peso seco (Tabla 1), mientras que las células contenían sólo el 0,02 (± 0,01)% P
en peso seco. Esta P fue presumiblemente rescatados de PO traza 43- impurezas en los
reactivos; y no es probable debido al arrastre dada nuestra estrategia de enriquecimiento y
aislamiento [véase más arriba, ( 11)]. Por otra parte, cuando se cultiva + As / -P este
intracelular P es 30 veces menor que nuestros valores P medidos para este microbio
cuando se cultiva -Como / + P (ver arriba) y muy por debajo del 1-3% P en peso seco
requerido para apoyar el crecimiento en una bacteria heterotrófica típico ( 13). Por el
contrario, GFAJ-1
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células cultivadas bajo -Como / + P condiciones tenían un contenido de P media de
0,54 (± 0,21)% en peso seco. Hubo variación en el total medida que el contenido de la + As /
estacionaria durante las repetidas centrifugaciones y ciclos de lavado debido a la
inestabilidad potencial de las estructuras celulares dado su estado hinchado (Fig. 2C, E). En
contraste, la integridad de la - As / + P células apareció robusta (Fig 2D.) Y por lo tanto
intracelular P medido para estas células probablemente refleja su contenido. Sin embargo, el
P intracelular total de baja en las células + AS / -P fue consistentemente muy por debajo de
la cantidad necesaria para apoyar el crecimiento, lo que sugiere que estos bajos valores son
correctos pesar de la variación en los datos de la + As / células -P. P intracelular bajo en
concierto con alta intracelular Como se confirmó adicionalmente mediante resolución de alta
espectrometría de masas de iones secundarios y de rayos X análisis como se discute a
continuación.
Utilizamos radiomarcado 73 AsO 43- para obtener información más específica sobre la
distribución intracelular de arsénico ( 11). Hemos observado arsénico intracelular en
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proteína, metabolito, lípido y fracciones celulares de ácido nucleico (Tabla 2). células
en fase estacionaria incorporan aproximadamente una décima parte del total
intracelular 73 AsO 43- etiquetar en ácidos nucleicos, pero más de tres cuartas partes de la 73
AsO 43- en el fenol extraído fracción “proteína”, con una pequeña fracción de entrar en
lípidos. Advertimos que la fracción grande “proteína” es probablemente una
sobreestimación, ya que esta etapa de extracción probablemente contiene numerosos
metabolitos pequeños, no proteínicas también. Para determinar si este patrón de
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distribución refleja un uso de AsO 43- en lugar de PO 43- en el ADN, se estimó el genoma
aproximadamente
7,5 x 10 6 átomos o 12,5 x 10- 18 moles de P. Suponiendo un genoma completo por
célula, esto equivaldría a 0,39 fg de P en el genoma. Por ICP-MS, que mide
aproximadamente 9,0 fg P por célula en los -Como / + P condición, que implica que
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sólo ~ 4% de P intracelular total se asocia con el genoma. Puesto que estas células
se cosecharon en fase estacionaria ( 11), la fracción de P asociado con ARN es
probable pequeño ( 14). Por lo tanto, aproximadamente el 96% de P se distribuye
presumiblemente entre las fracciones “proteína” “lípido” y. Si AsO 43- está sustituyendo
PO 43- en el ADN, entonces podemos asumir que aproximadamente la misma fracción
del total AsO intracelular 43- reflejaría una distribución similar a nuestro PO prevista 43- distribución.
La distribución de intracelular
73 AsO 43- en nuestros experimentos fue consistente con estas estimaciones. Si AsO 43- está
cumpliendo el papel biológico de PO 43-
a continuación, AsO 43- debe actuar en muchas funciones bioquímicas análogas incluyendo
ADN, la fosforilación de proteínas, metabolitos de pequeño peso molecular (por ejemplo,
análogos de arsenylated de NADH, ATP, y productos intermedios como la glucosa y
acetil-CoA) y fosfolípidos.
Nuestros datos sugieren que el arsénico estaba presente en un número de
biomoléculas y, en particular, hemos tratado de confirmar la presencia de arsénico en la
fracción de ADN. Inicialmente, se
medido trazas de Como por análisis de ICP-MS de ácido nucleico extraído y proteína /
fracciones de metabolitos a partir de células / -P crecido + AS ( 11) ( Tabla S1). A continuación,
utiliza de alta resolución espectrometría de masas de iones secundarios (NanoSIMS) para
identificar positivamente como en extraída, el ADN genómico se purificó en gel (Fig. 2A).
Estos datos mostraron que el ADN de células / -P + como se había elevado como y bajo P en
relación con el ADN de las -Como / + P células. análisis NanoSIMS del ADN mostró que los
As: relación P en un átomo por átomo de base fue significativamente mayor en el
+ Como / -P frente -Como / Células + P cultivadas (Fig. 2A, 11 S2 tabla). Ya sea
expresado como una proporción de iones con respecto a C, ( 75 Como-: 12 C-, Fig. 2A) o 31 PAG-:
12 C- ( 11) ( tabla S2) o normalizado por rendimiento ion relativa y expresado como
concentración en partes por mil millones ( 11) ( tabla S2), se vio una tendencia parecida
consistente, con significativamente más alta Como en el ADN + As / -P, y más alto P en
el ADN -Como / + P. En ambos casos, la concentración de elemento no modificado era
igual o menor que los niveles de fondo. Estas mediciones demostraron por lo tanto
específicamente que el ADN purificado extraído de células -P + AS / contenía como.
Nuestros NanoSIMS análisis, combinados con la evidencia para el arsénico intracelular
por ICP-MS y nuestra radiomarcado 73 AsO 43-
experimentos demostró que intracelular AsO 43- fue incorporado en
biomoléculas clave, específicamente ADN.
Caracterización del entorno químico arsénico intracelular. A continuación
utiliza estudios de rayos X de sincrotrón para determinar el entorno de especiación y
química del arsénico intracelular ( 11). absorción Micro X-ray cerca de espectroscopia de
borde (μXANES) de células / -P + AS cultivadas exhibió una característica borde de
absorción de la coordinación (V) sin evidencia de As (III) observado. Las mejores
ajustes de los micro extendido de absorción de rayos X de estructura fina (μEXAFS)
espectros se enumeran en la Tabla 3 y se muestra en la Figura 3. La primera cáscara
vecino alrededor del arsénico en + Como células / -P consistió en cuatro ligandos de
oxígeno (Tabla 3) , pero tiene una segunda cáscara que es incompatible con nuestros
Como-Fe y modelos As-S, iones arseniato libres o espectros publicado por
organo-arsenicales (Fig. 3A) ( 15, 16).
Mientras que otros compuestos arsenicales, tales como dimetilarsinato (DMA)
también tienen Como-O y AS-C bonos, tienen posiciones de borde que se desplazan
a disminuir la energía de lo observado As (V) y mucho más corto han observado As-C
distancias de enlace ( dieciséis). En contraste con los modelos, estas distancias
Como-O y AS-C son consistentes con los reportados a partir de la estructura cristalina
resuelta de ADN para la posición estructural análogo de P con respecto a átomos de
O y C (Fig. 3A) ( 16, 17). Por lo tanto, nuestros datos de rayos X apoyan la posición de
arseniato en una configuración similar a fosfato en un esqueleto de ADN o
potencialmente otras biomoléculas también. Estos datos también indican evidencia de
la presencia de arseniato en metabolitos de bajo peso molecular (por ejemplo,
análogos de arsenylated de NADH, ATP, glucosa, acetil-CoA), así como proteínas
arsenylated donde arseniato sería sustituir a fosfato en serina, tirosina y treonina ( 1, 11)
( S3 tabla). De rayos X de micro
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datos de fluorescencia (μXRF) confirmó aún más nuestras mediciones ICP-MS y
mostraron fondo bajo P que contrastaba con las regiones de alta arsénico
correlacionados con alto contenido de hierro y zinc (Fig. 3B, fig. S2) ( 11). Estos dos
últimos elementos se utilizan habitualmente como indicadores de la presencia de
material celular (tal como C, N y O) en nuestros experimentos debido a que estos
elementos de luz no podían ser detectadas por fluorescencia de rayos X bajo nuestras
condiciones sin vacío. Sin embargo, para apoyar aún más la distribución de arsénico
con material celular, se utilizó NanoSIMS para mapear relaciones iónicas celulares de
75 Como-: 12 y C- 31 PAG-: 12 C- (Fig. 2B-G, fig. S2) ( 11). Estos análisis
confirman, con una resolución mucho más fina, la distribución
intracelular de Como con C en la condición + As / -P con un fondo bajo
de P (Fig. 2B, D, F). Esto está en contraste con la distribución
intracelular de P en -Como / + P células cultivadas (Fig. 2C, E, G).
Debido a que los datos de absorción de rayos X proporcionan
información acerca de la coordinación promedio de arsénico, nuestros
datos identifican una mezcla de compuestos en las células. Estos
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resultados indican que estos compuestos están dominados por
arsénico (V) estructuras coordinadas -oxygen-carbono y, por tanto, el
entorno de unión de describimos es consistente con nuestra
NanoSIMS datos (Fig. 2A) y se puede atribuir a ADN. En resumen,
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Nuestros datos muestran crecimiento dependiente de arsénico por GFAJ-1 (Fig.
1). El crecimiento fue acompañado por la captación de arseniato y la asimilación en
biomoléculas que incluyen ácidos nucleicos, proteínas y metabolitos (Tabla 1 y 2, Figs. 2 y
3). En algunos organismos, arsénico induce genes de resistencia específicos para hacer
frente a su toxicidad ( 7); mientras que algunos arsénico dissimilatory la utilización de
microbios pueden conservar la energía para el crecimiento de la oxidación de especies de
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arsénico reducidos, o “respirar" AsO 43-, como aceptor terminal de electrones ( 18). Nuestro
estudio se diferencia porque utilizamos arsénico como un agente selectivo y fósforo
excluidos, un requisito importante en todos los organismos conocidos hasta ahora. Sin
embargo, GFAJ-1 no es un arsenophile obligado y creció considerablemente mejor cuando
se proporciona con P (Fig. 1A, B). Aunque AsO 43- ésteres se predice que son órdenes de
magnitud menos estable que PO 43- ésteres, por lo menos para las moléculas simples ( 8), GFAJ-1
puede hacer frente a esta inestabilidad. Las regiones de vacuolas como observados en las
células GFAJ-1 cuando el cultivo en + como las condiciones / -P son hidroxibutirato
potencialmente poli-β- rica [como se muestra en otra Halomonas especies ( 19)] que puede
estabilizar As (V) estructuras de tipo -OC porque los entornos no acuosos parecen promover
velocidades de hidrólisis más lentas para compuestos relacionados ( 8). Proponemos que las
regiones intracelulares o mecanismos que excluyen el agua también puede promover esta
estabilidad.
 Se presenta el descubrimiento de un microbio inusual, la cepa GFAJ-1, que
excepcionalmente puede variar la composición elemental de sus biomoléculas
básicas sustituyendo cuanto a
P. ¿Cómo se insinúa arsénico en la estructura de biomoléculas no es clara, y
los mecanismos por los que tales moléculas operan son desconocidos.
referencias y notas
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Freeman & Co., Nueva York, ed. Sexto, 2007).
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11. Materiales y métodos están disponibles como material de apoyo en Ciencia
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Microb Technol 38, 148 (2006).
20. Los autores desean agradecer a S. Benner, W. Hastings, IL ten Kate, A.
Pohorille, B. Rosen, D. Schulze-Makuch y
R. Shapiro para estimular los debates. Agradecemos a G. King,
A. Oren y L. Young para críticas constructivas de los primeros borradores de
este manuscrito, y S. Baesman, M. Dudash, y
L. Miller para la asistencia técnica. Cepa GFAJ-1 está disponible bajo petición
por otros investigadores para investigar. Los datos de secuencia se depositan
con GenBank (HQ449183 adhesión). Las porciones de esta investigación se
llevaron a cabo en el Stanford Synchrotron Radiation Lightsource (SSRL), una
división de SLAC National Accelerator Laboratory y una
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Oficina de Ciencia facilidad de usuario operado por el Departamento de Energía
Oficina de Ciencia por la Universidad de Stanford. El Programa de Biología
Molecular Estructural SSRL es apoyada por la oficina de la GAMA de Ciencias
Básicas de Energía, Oficina de Investigación Biológica y Ambiental, y por los
Institutos Nacionales de Salud, Centro Nacional de Recursos para la
Investigación Biomédica, Programa de Tecnología. NanoSIMS análisis se
llevaron a cabo bajo los auspicios del Departamento de Energía de Estados
Unidos en el Laboratorio Nacional Lawrence Livermore bajo el contrato
DE-AC52-07NA27344. RSO y JFS fueron apoyados por la NASA Exobiology.
FWS reconoce el apoyo del Programa Postdoctoral de la NASA, Astrobiología
de la NASA / exobiología y el Instituto de Astrobiología de la NASA, mientras
que en residencia en el US Geological Survey, Menlo Park, CA. Los autores
declaran no tener conflictos de intereses.
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Material de apoyo en línea
Materiales y Métodos
www.sciencemag.org/cgi/content/full/science.1197258/DC1 Figs. S1 a S3
Tablas S1 a S3 Referencias
1 septiembre de 2010; aceptado 8 de noviembre de 2010 Publicado en línea el 2
www.sciencemag.org
diciembre de 2010; 10.1126 / science.1197258 incluir esta información al citar este
documento
Figura 1. Crecimiento, y microscopía electrónica de la cepa GFAJ-1. ( UNA
y SEGUNDO) Curvas de crecimiento de GFAJ-1 cultivadas en el medio sintético definido
modificados ya sea con fosfato 1,5 mM (círculos sólidos), arseniato de 40 mM (cuadrados
rellenos) o ninguno fosfato ni arseniato (triángulos abiertos). El crecimiento celular se
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controló tanto por un aumento en los números (A) de densidad óptica y de la célula (B)
de los cultivos. Los símbolos representan la media ± la desviación estándar de n = 6
experimental y n = 2 controles (A) y n = 3 experimental y n = 1 control (B). Este fue un
solo experimento con seis repeticiones, sin embargo el material se conservó para ampliar
la duración del experimento para permitir que el material para muestras de recuento de
células. Las micrografías electrónicas de barrido de cepa GFAJ-1 en dos condiciones
discutidos en el texto. ( DO) + Como / -P y ( RE) - Como / + P. micrografía electrónica de
transmisión de + As / -P GFAJ-1 ( MI) mostró vacuole- interna como estructuras. Las
barras de escala son como se indican en la figura ( 11).
Figura 2. NanoSIMS análisis de GFAJ-1: ADN extraído y células enteras mapas
relación elemental. ( UNA) en gel de agarosa cargado de ADN / ARN extraído de
GFAJ-1 adulto + As / -P (carril
2) y -Como / + P (carril 3) en comparación con un estándar de ADN (carril
1). bandas genómicas se escindieron como se indica y se analizaron por NanoSIMS. ratios de
iones de 75 Como-: 12 C- de bandas de gel extirpados se indican a continuación con error 2 sigma
muestra (todos los valores
multiplicado por 10 6). imágenes NanoSIMS de células enteras GFAJ-1 cultivadas ya sea + As

/ -P ( SEGUNDO, RE, y F) o -Como / + P ( DO, MI, y

SOL). Las proporciones de iones de 75 Como-: 12 C- [(B) y (C)], 31 PAG-: 12 C- [(D) y (E)], y de

electrones secundarios, SE [(F) y (G)]. en proporciones

B, C multiplicado por 10- 4 y D, E multiplicado por 10 3. Las barras de color indican midieron

relaciones elementales en una escala logarítmica tal como se indica. escala de longitud es

como se indica en las imágenes ( 11).

Fig. 3. análisis de rayos X de GFAJ-1 + As / -P describe similitud de como coordinado

como P en el ADN. ( UNA) comparaciones EXAFS de la transformada de Fourier de
datos para dos compuestos modelo, As-S y AS-Fe, células enteras GFAJ-1 (lavadas y
fijadas) y un ajuste de ADN con fósforo arsénico sustitución de, in silico.

Identificación de cada espectro se indica en la figura y de arriba a abajo son AS-S, As-Fe,

datos GFAJ-1 (recogidos en células enteras) y ajuste a los datos GFAJ-1 (en rojo). ( SEGUNDO)

mapas XRF indica la correlación entre el arsénico (As), hierro (Fe) y zinc (Zn) y no con el

fósforo (P) con alguna variabilidad pero consistente con la tendencia de que estos

elementos se encuentran a menudo juntos (Véase la figura S3 en el SOM para elemento

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de parcelas de correlación). La barra de escala de longitud en el cuadrante “Zn”, de los

mapas es como se designa y se aplica a todas las partes de la figura. Teniendo en cuenta

la resolución espacial de estas imágenes, las estructuras identificadas que contengan alto

como, Fe, y Zn son agregados de células. Ranges como se indica en la barra de color de

ejecución de frío a caliente, en unidades de g cm- 2, como sigue: Como, de 0 a 1,6;

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P, 0 a 40; Fe, de 0 a 32,1, y Zn, 0 a 2,8. Los estándares se utilizan para
calibrar la señal y de fondo ( 11).

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Tabla 1. perfil elemental intracelular mayor de GFAJ-1 cepa. *
(% peso en seco)

Condición (n) Como PAG Áspid

+ Como / -P (8) 0,19 ± 0,25 0,019 ± 0,0009 7.3

- Como / + P (4) 0,001 ± 0,0005 0,54 ± 0,21 0,002
* Las células crecido y preparado con metales traza técnicas de limpieza ( 11). El número entre paréntesis indica replicar muestras analizadas.

Tabla 2. radiomarcado intracelular 73 AsO 4- arseniato de distribución *

Disolvente (fracción subcelular) radiomarcador celular recuperada (% del total)

Fenol (proteína + smw metabolitos) 80,3 ± 1,7

Fenol: cloroformo (proteínas + lípidos) 5.1 ± 4.1
Cloroformo (lípidos) 1,5 ± 0,8
fracción acuosa final (ADN / ARN) 11,0 ± 0,1

* Todos los principales sub celular - fracciones contenían radiomarcador después de procedimientos de lavado celular. metabolitos pequeños peso molecular (metabolitos smw)
análogos de incluir potencialmente arsenylated de ATP, NADH, acetilo - CoA y otros ( 11). muestra el error estándar.

on December 2, 2010
Tabla 3. Resultados de accesorio arsénico K-borde EXAFS de GFAJ-1 *.

Tipo Número R σ2
As-O 4.2 (0.6) 1.73 (2) 0.003 (2)
As-C 2.5 (0.5) 2.35 (4) 0.003 (2)

www.sciencemag.org
As-C 2.2 (0.5) 2.92 (6) 0.003 (2)
* Details for table: S02=1, global amplitude factor and E0= 13.97, offset for calibration. Type, the coordination type; Number, the coordination number; R,
interatomic distance; σ 2, the measure of the static disorder of the shell. See Table S2 for comparison to P in P-containing biomolecules ( 11).

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 0.30
A C
0.25

0.20
OD 680

0.15

0.10 5µm

0.05
D
0.00

5 x 10 8
B

5µm
5 x 10 7

E
cells ml- 1

5 x 10 6

5 x 10 5
0 120 240 360 480 1µm
Time (h)
 + As/-P - As/+P Ratios
A
+ As/-P - As/+P 1.00
1 2 3 0.75

75 As-: 12 C- 0.50

0.25
1 µm
B 2 µm
C
0.00
8.00

6.00
31 P-: 12 C-
4.00

2.00
1 µm
D 2 µm
E
0.00

SE
As-: 12 C-
75
13.4( ±2.5) 6.9( ±1.6)
1 µm
F
2 µm
G
A B

As-S
FT magnitude

As-Fe
As P

GFAJ (data)
Fit

Fe Zn 1 0µ m

0 1 2 3 4
~Å (r + θ r)