Bacterias Gram Positivas y Gram Negativas

El universo que descubrió Leeuwenhoek estuvo conformado por bacterias y protozoarios de diversas
características. Es por ello que hoy en día sabemos que hay millones de microorganismos que
se encuentran en todos los lugares de nuestro planeta, en al agua dulce y salada, por tanto viven en el
aire, agua y tierra, se les halla tambien en los alimentos, en el exterior y el interior de los seres vivos.
También causan enfermedades y otros que son beneficiosos para nosotros.

Por eso es de vital importancia conocer sobre estos microorganismos. Especialmente hablaremos
sobre bacterias, tipos, características y diferencias entre gramnegativas y positivas.

Las bacterias pertenecen al filum de las Shizomycophyta, se les llama también microbios o
gérmenes. Son de pequeño tamaño. Casi siempre son unicelulares.

Estan recubiertas por una pared celular de naturaleza quitinosa en su superficie externa. Poseen
prolongaciones filamentosas que les permiten desplazarse otras tienen flagelos.

La pared celular que rodea a las bacterias es compleja y existen dos formas básicas: pared celular
grampositiva con una gruesa capa de péptidoglucano y una pared gramnegativa con una delgada capa
de péptidoglucano, así como una membrana externa.

Algunas bacterias carecen de pared celular y compensan su ausencia sobreviviendo tan solo al interior
de células del organismo anfitrión o en un ambiente hipertónico.

Para clasificar a las bacterias debemos tener en cuenta su tamaño, forma, disposición espacial,
propiedades.

Se encuentran en todos los lugares de nuestro planeta, en al agua dulce y salada, por tanto viven en
el aire, agua y tierra, y se les halla tambien en los alimentos y en el exterior y el interior de los seres
vivos.

Encontramos también bacterias que pueden provocar enfermedades potencialmente mortales. La

enfermedad puede deberse a los efectos tóxicos de los productos bacterianos o a la invasión de
regiones corporales que acostumbran a ser estériles.

BACTERIAS:

Características:
-Las bacterias son de vidas libres, cosmopolitas y patógenas para el hombre y animales.
-Miden entre 1 y 10 µm.
-Estos causan enfermedades infecciosas en los seres vivos.
- Son beneficiosos como los que reciclan el carbono, azufre, nitrógeno y fósforo; algunos viven el
intestino del hombre (ejemplo: Escherichia coli), los cuales sintetizan vitaminas como BIOTINA; en
rumiantes elaboran celulosa, una enzima que digiere la celulosa.

Funciones:
-Nutrición: autótrofa: por fotosíntesis y quimiosíntesis y heterótrofa (bacterias).
-Reproducción: asexual y sexual, la reproduccion de las bacterias se realiza a gran velocidad; algunas
se dividen un vez cada 20 minutos.
Estructura:

constituida por:

§ Pared celular.
§ Membrana Celular.
§ Estructura Citoplasmáticas.
§ Genóforo=nucleoide=cromosoma bacteriano
§ Cápsula.
§ Fimbrias o Pilis.
§ Ausencia de Envoltura Nuclear

Estructura de las Gram Positivas y Gram Negativas

TINCIÓN GRAM

La tinción Gram es una prueba potente y rápida que nos permite diferenciar dos clases de bacterias
estas son: Bacterias grampositivas y las gramnegativas.

Las grampositivas se tiñen de morado ya que el colorante se queda atrapad en la capa gruesa de
peptidoglucanos que rodea a la célula

Las gramnegativas tienen una capa de petidoglucano mucho más delgada es por ello que no retiene
el violeta cristal y por esto las células se tiñen con safranina y las observamos rojas.

Terminado el proceso inicial de incubación que consiste en 5 días en agitación orbital, a 30ºC en
medio Hierro-Oxidasa, se puede realizar una tinción de Gram para confirmar la presencia de
microorganismos oxidadores del hierro.

La tinción de Gram consiste en utilizar dos distintos colorantes, uno rojo y uno azul, para
distinguir una de las propiedades características de las bacterias: la alta concentración de
peptidoglicano en la pared celular.

Aplicando esta tinción a una bacteria, se pueden tener dos resultados, Gram positivo o Gram
negativo; donde una célula resultante Gram positiva indica la presencia de una pared celular más
gruesa debido al peptidoglicano contenido, mientras que una bacteria Gram negativa tiene sólo un
poco.

Teñir las células con cristal violeta (azul) y añadir lugol al iniciar la tinción, es lo que le da a la
tincion de Gram la posibilidad de diferenciar, ya que estas dos sustancias cuando reaccionan se
forma un compuesto insoluble en agua, por lo tanto, para decolorarse es necesario usar una solución
de alcohol-acetona la cual aunque debilita la pared celular de las células más delgadas, las Gram
Positivas debido a su pared más gruesa puede retener el colorante Azul dentro de ellas.

Una vez decoloradas las células, se tiñen con safranina (rojo), pero las células que ya están
coloreadas azul no podrán tomar color de nuevo, así que sólo aquellas bacterias cuya pared celular
no logró retener el cristal violeta con el lugol, se teñirán de color rojo.

El contenido de peptidoglicano en una bacteria es un factor de referencia para distinguir a las

bacterias, ya que se ha comprobado que muchas bacterias Gram Negativas son patógenas, es decir,
pueden causar enfermedades. Escherichia coli, Salmonella typhi, Kiebsiella pneumoniae, son
algunos ejemplos de bacterias patógenas, todas ellas Gram Negativas.

Pasos para la realización de la tinción de Gram

Preparación del frotis: (medio líquido)

1. Tomar un portaobjetos y limpiarlo con una torunda de algodón con alcohol.
2. Secar el portaobjetos y etiquetarlo en un extremo.
3. Prender el mechero y esterilizar el asa bacteriológica en la flama del mechero.
4. Dejar enfriar el asa, sin salir del área de esterilidad.
5. Acercar el cultivo (frasco o tubo) al mechero, destaparlo y flamear rápidamente la boca del
mismo.
6. Introducir el asa al cultivo y tomar cuidadosamente la muestra.
7. Extender la muestra sobre el centro del portaobjetos, cuidando esparcir la muestra lo suficiente.
8. Esterilizar el asa en el mechero.
9. Apagar el mechero y dejar secar la muestra al aire.
10. Fijar el frotis utilizando dos gotas de etanol o metanol absoluto, y dejar secar al aire.

Tinción de Gram:
1. Cubrir el frotis con dos gotas de cristal violeta durante un minuto.
2. Lavar cuidadosamente con agua destilada para eliminar el exceso de colorante.
3. Sacudir el exceso de agua y sin dejar secar, cubrir el frotis con dos gotas de lugol por treinta
segundos.
4. Lavar el frotis con agua destilada cuidadosamente.
5. Inclinar el portaobjetos y aplicar gota a gota el decolorante alcohol-acetona dejando que escurra,
aproximadamente diez segundos, o hasta ver que el alcohol sale transparente.
6. Lavar con agua.
7. Aplicar dos gotas de safranina durante un minuto.
8. Lavar nuevamente con agua.
9. Eliminar el exceso de agua en el portaobjetos utilizando las esquinas de una toalla de papel (solo
tocar las gotas de agua las elimina por capilaridad).
10. Dejar secar al aire.

Una vez realizada la tinción, se puede observar al microscopio óptico con los objetivos deseados, y
no es necesario utilizar cubreobjetos para la observación con objetivos de inmersión.

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DIFERENCIAS MOLECULARES ENTRE UNA BACTERIA GRAN POSITIVA Y OTRA

GRAN NEGATIVA.
BACTERIAS GRAM POSITIVAS BACTERIAS GRAM NEGATIVAS
Poseen una pared celular interna y una pared de Poseen una pared celular más compleja:
peptidoglucano. -pared celular interna
*Peptidoglucano: es un exoesqueleto que da consistencia y -pared de peptidoglucano
forma esencial para replicación y supervivencia de la - bicapa lipídica externa
bacteria.
No tiene membrana externa Membrana externa: forma un saco rígido alrededor de la
bacteria, mantiene estructura y es barrera impermeable a
macromoléculas, ofrece protección en condiciones
adversas

Espacio periplasmático: espacio entre la superficie

No tiene espacio periplasmático
La red de mureína está muy desarrollada y llega a tener
hasta 40 capas
La penicilina mata a las gram positivas, ya que bloquea la
formación de enlaces peptídicos entre las diferentes
cadenas del peptidoglucano
No contiene LPS
En la tinción de Gram, retienen la tinción azul
externa de la membrana citoplasmática y la interna de la
membrana externa.
La red de mureína presenta una sola capa
La penicilina no mata a las Gram negativas, a causa de la
capa de lipopolisacáridos situada en la parte externa de
la pared celular.
Contiene LPS: estimulador de respuestas inmunes: activa
células B, liberación de IL, FNT, IL 6 por macrófagos.
Quedan decoloradas.

Conservan el complejo yodocolorante Pierden el complejo yodocolorante

Pueden ser anaerobios o aerobios

Son esporulantes y no esporulantes, como Streptococcus,
Cisteria, Frankia.

Poseen otros componentes: ácidos teicoicos y Poseen proteínas con concentraciones elevadas.
lipoteicoicos, y polisacáridos complejos.
 Gram Positivo: Staphyloccocus aureus

Gram Negativo: Escherichia coli

Conclusiones.-

· Las bacterias son causantes de infecciones y enfermedades.

· ALgunas son beneficiosas para la agricultura, industria, salud y la investigación.
· Para observar y distinguir este tipo de celulas se utiliza la Tinción de Gram( en honor al medico
danés Hans Christian Gram)

Bibliografia:
www.biologia.edu.ar/bacterias/micro4.htm
www.bio-nica.info/biblioteca/BacteriasEnfermedades.pdf
http://www.danival.org/600%20microbio/6000notasmicro/tincion/tincion_gramneg.html
D.Male; J. Brostoff; D. Broth;I. Roitt. Inmunología. España. Séptima edición. Editor Elsevier Mosby,
2007. 535 p.
Patrick.R.Murray. Microbiología Médica. España, 5ta edición. Editor Elsevier Mosby 2006 . 963 p.
Patrick R. Murray , Ken S. Rosenthal, Michael A, Pfaller . Microbiologia Medica, 6ta Edicion
2009 Elsevier España, S.L

Elaborado por:
Asca, Andrea; Aldea, Karla; Arrué, Kattya & Valverde, Katherine.
Estudiantes de Medicina Humana de la Universidad de San Martín de Porres
Chiclayo - Perú
http://biologiamedica.blogspot.com/2010/09/bacterias-gram-positivas-y-gram.html