Fase Reversa

La cromatografía en fase reversa (RPC) permite separar moléculas en base a su

polaridad. El principio de la cromatografía en fase reversa es semejante al de la
cromatografía en capa fina. Sin embargo, aquí la fase estacionaria es de patículas de
sílica químicamente modificadas con hidrocarburos saturados, insaturados o aromáticos
de diferentes tipos. Esto convierte a la fase estacionaria en una matríz apolar. Por lo
tanto, para este tipo de cromatografías se emplean mezclas de solventes polares, tales
como agua, acetonitrilo, acetato de etilo, acetona y alcoles alifáticos.

En virtud de lo anterior, este tipo de cromatografía ha sido también llamada como

cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC). En general, este último término se ha
empleado para referirse a las aplicaciones en las que se emplean substituyentes y
matrices compatibles con fluidos biológicos. Por tanto, el termino HIC es común
cuando se habla de purificación de proteínas y carbohidratos, en tanto que RPC es más
empleado para referirse a la separación de moléculas en sistemas que son inadecuados
para la separación de macromoléculas biológicas.

el mecanismo de separación depende de interacciones hidrofóbicas entre las moléculas

de soluto en la fase móvil y el ligando hidrofóbico inmovilizado en la fase estacionaria.
La naturaleza actual de las interacciones de unión hidrofóbica asume que la interacción
de unión es el resultado de un efecto entrópico favorable. Las condiciones iniciales de
unión de la fase móvil usadas en la cromatografía de fase reversa son acuosas lo cual
indica un grado alto de estructuras de agua organizadas alrededor de las moléculas de
soluto y el ligando inmovilizado. A medida que el soluto se une al ligando hidrofóbico
inmovilizado disminuye el área hidrofóbica expuesta hacia el disolvente. Así, el grado
de organización de la estructura de agua disminuye con un favorable aumento de
entropía en el sistema

Cromatografía Flash

La Cromatografía FLASH es un método de purificación de compuestos de síntesis que

se basa en Cromatografía de Líquidos de Media Presión, a diferencia de los sistemas
tradicionales por gravedad en columna que son mucho más lentos e ineficientes.
La cromatografía FLASH difiere de la cromatografía tradicional en columna
básicamente por el tamaño de las partículas del soporte, que es menor, y en la mayor
contrapresión causada por las mismas que obliga al uso de una fuente de presión para
generar el caudal de fase móvil necesario en columna.
El resultado final en una separación rápida (FLASH) y de alta resolución. Introducimos
ahora la Ultra Performance Flash Purificacion UPFP
La cromatografía en columna es quizás el método más general, utilizado para la
separación, a la vez que para la purificación, de diferentes compuestos orgánicos que se
encuentren en estado sólido o líquido.
En este tipo de cromatografía, la fase estacionaria utilizada, es decir, el absorbente, se
coloca en el interior de una columna de vidrio, la cual finaliza con una llave para
controlar el paso de sustancias al exterior de la columna. La fase estacionaria se
impregna con el eluyente o fase móvil. Seguidamente la mezcla orgánica que nos
interesa separar la depositamos por la parte superior de la fase estacionaria, y así la fase
móvil podrá ir atravesando el sistema.
Los compuestos que se encuentran disueltos en la fase móvil, poco a poco saldrán de la
columna cromatográfica, y se recogen en fracciones. Las fracciones menos polares, que
son por lo general las que se retienen poco o nada en el absorbente, serán las primeras
en salir de la columna. En cambio, las sustancias más polares, quedan retenidas por más
tiempo en el absorbente, y a menudo es necesario el uso de diferentes disolventes con la
finalidad de incrementar su polaridad para que sean arrastradas por estos.

Cromatografia presión media

Las técnicas cromatografías de baja y media presión son aplicaciones, en su mayoría,
cualitativas. El alcance de estas técnicas instrumentales esta orientado a la purificación y
separación de componentes en una muestra.
Cromatografía en Fase Normal
Antes del desarrollo de las fases enlazadas de fase reversa, la cromatografía en fase normal
era la técnica de separación más popular. Se basa en la interacción de los analitos con
grupos funcionales polares de la superficie de la fase estacionaria, que alcanza su potencia
máxima cuando se utilizan eluyentes no polares como fase móvil.

La cromatografía en fase normal es una herramienta de separación muy potente debido a la

amplia gama de eluyentes disponibles que se pueden utilizar para ajustar con precisión la
selectividad de una separación. Sin embargo, muchos cromatografistas han dejado de
utilizarla debido a su complejidad. En determinadas circunstancias, existe un período de
equilibrado prolongado o problemas de reproducibilidad que se deben principalmente a la
sensibilidad de la técnica a la presencia de pequeñas concentraciones de contaminantes
polares en la fase móvil. Si estos problemas se controlan, la técnica normalmente
proporciona unos cromatogramas mejores a los que se obtienen con los métodos de fase
reversa debido a la baja viscosidad de los eluyentes que se utilizan habitualmente.