ESTERILIZACIÓN

Métodos
físicos
Esterilización: Proceso mediante el cual se
eliminan por remoción o muerte todos los organismos
viables de un objeto, superficie o medio.

Un objeto libre de cualquier forma de vida se dice que

está estéril.

El concepto de esterilidad es absoluto.

Limpieza: Es la remoción mecánica de toda materia extraña
en el ambiente, en superficies y objetos.

Técnica (manual y/o mecánica) que origina una reducción

cuantitativa de contaminación macroscópica.
Objetivos:
Reducir el número de
microorganismos presentes en los
objetos, por arrastre mecánico.
Eliminar restos de materia orgánica
e inorgánica.
Favorecer procesos de desinfección
y esterilización.
Desinfección:
Proceso destinado a conseguir la eliminación de microorganismos, con
excepción de las esporas, alterando su estructura o su metabolismo,
independientemente de su estado fisiológico.

Desinfectante: agente químico, empleado para eliminar

microorganismos patógenos y se utilizan sobre objetos inanimados o
material inerte.

La actividad de un desinfectante depende de los siguientes factores:

Concentración del agente químico

Tiempo de exposición
Temperatura
pH
Naturaleza del microorganismo
Presencia de materia orgánica
Factores que afectan la eficacia de los procesos de
esterilización:

Número de microorganismos: Una población mayor requiere de

mayor tiempo para morir, que una población pequeña.
Materia orgánica: La presencia de materia orgánica dificulta la
eliminación de los microorganismos.
Temperatura y tiempo: La efectividad aumenta cuando es superior la
temperatura óptima del microorganismo.
Humedad relativa: A mayor humedad relativa, mayor contenido de
agua en las células y mejor resultado de esterilización.
Resistencia de los microorganismos: Existe una resistencia
intrínseca o innata frente a los procesos de esterilización, cuya
naturaleza reside en la composición de la pared celular que regula la
penetrabilidad de los agentes desinfectantes y esterilizantes.
Las endosporas bacterianas resisten más que las células vegetativas.
 Susceptibilidad de los microorganismos a
los procesos de esterilización
MAYOR
Priones
Esporas bacterianas
Micobacterias
Protozoos

Resistencia
Virus pequeños sin envoltura
(Ej. Hepatitis A y E, poliovirus y parvovirus).
Virus grandes sin envoltura (Ej. adenovirus)
Esporas fúngicas
Formas vegetativas bacterianas y fúngicas
Virus grandes con envoltura lipídica
(Ej. VIH, VHB, varicela, rubeola)
MENOR
CLASIFICAIÓN DE LOMÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN

Tabla de Métodos de Esterilización

Vapor a presión
Húmedo (Autoclave)
Aire caliente (Horno)
Calor
Seco Flameado
Incineración
Métodos
Filtración Discos de membrana
Físicos
No Rayos UV
ionizantes Rayos infrarrojos
Radiaciones
Rayos X
Ionizantes
Rayos g
Óxido de etileno
gases Plasma –gas H2O2
Métodos Químicos
líquidos Formaldehído
 CARACTERÍSTICAS DEL AGENTE ESTERILIZADOR

Bactericida, esporocida, tuberculicida, fungicida, virucida y

Alta eficacia
prionicida
Rápida actividad Conseguir la esterilidad en el menor tiempo posible
Penetrabilidad Gran poder de penetración y difusión en los materiales
No debe alterar la constitución del material, ni modificar el
Compatibilidad
funcionamiento de los objetos esterilizados
Su uso no debe representar riesgos para el trabajador. Si estos son
No tóxico inevitables; debe existir control mediante mecanismos de
seguridad eficaces
Ecoseguridad No dañar el ambiente
Adaptabilidad Para usar en instalaciones grandes o pequeñas
Monitorización Mediante controles físicos, químicos y biológicos.
Eficacia y coste Adecuado a los estándares de la unidad de esterilización
 EL AGENTE ESTERILIZANTE IDEAL

ES AQUEL QUE CONSIGUE UNA EFICAZ ACCIÓN

MICROBICIDA Y ESPOROCIDA, ACTUANDO EN EL MENOR
TIEMPO POSIBLE(EFICIENCIA) Y POSEE UN ALTO PODER
DE PENETRACIÓN EN EL MATERIAL A ESTERILIZAR.

TODO ESTO SIN PRESENTAR RIESGOS PARA EL

TRABAJADOR Y EL AMBIENTE.
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

CALOR
Todos los microorganismos son susceptibles en distinto grado a la
acción del calor. Este provoca la desnaturalización de las proteínas,
fusión y desorganización de las membranas y/o procesos
oxidativos irreversibles en los microorganismos.

La efectividad del calor

como método de
esterilización depende
de:

Temperatura

Tiempo de exposición
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

CALOR HÚMEDO
PRINCIPIO

El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor más elevado

que el del aire. Por lo que, los materiales húmedos conducen el calor mucho
más rápidamente que los materiales secos debido a la energía liberada
durante la condensación.
Para llegar a la temperatura de
esterilización por calor húmedo se debe
tener una combinación de presión y
temperatura, el equipo utilizado para
esterilizar por calor húmedo es el
AUTOCLAVE.
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

CALOR HÚMEDO
PARTES DE UN AUTOCLAVE BÁSICO

Válvula de seguridad
Manómetro
Válvula de control de
presión
Tapa Purgador

Seguro contra apertura

Cámara esterilizadora
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

CALOR HÚMEDO

Agente esterilizante: vapor de agua

Mecanismo de acción: Produce la desnaturalización y

coagulación de las proteínas.

PROTEÍNA DESNATURALIZADA
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

CALOR HÚMEDO

Condiciones del proceso: 121°C / 15lb/pg2 / 15 min

Preparación del material para esterilización

Se identifican tres aspectos en cuanto a la

preparación del material para su esterilización :
a.- Lavado
b.- Secado
c.- Envoltura
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

CALOR HÚMEDO
Preparación del material para esterilización

Lavado de material para esterilización:

•Se usan escobillones

•Fibra suave
•Detergente extrán
•Enjuague con agua de la llave
•Enjuague con agua destilada

Secado del material:

•Horno o temperatura ambiente

MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

CALOR HÚMEDO
Preparación del material para esterilización

Protección del material:

a) Tapones de gasa algodón

b) Papel kraft
c) Tapones de hule
d) Filtros de algodón
e) Tapones metálicos o de polipropileno
f) Tapones de baquelita

Etiquetado:

a) Identificación: Nombre del material

b) Condiciones de esterilización
c) Fecha de esterilización
d) Nombre del operador
e) Tipo de material a preparar: vidrio, hule, acero
inoxidable, líquidos, sólidos
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

CALOR HÚMEDO
Preparación del material para esterilización

El material de empaque debe cumplir varios

requisitos:

a) Ser permeable al agente esterilizante

b) Resistente (a humedad, a manipulación)
c) Flexible para facilitar la manipulación
d) Ser libre de residuos tóxicos como colorante
e) Evitar la liberación de partículas o fibras
f) Mantener integridad del paquete
g) Impedir el ingreso de polvo y microorganismos
(barrera microbiana)
h) El paquete debe poder ser abierto sin
contaminar su interior
i) Económico y fácil de encontrar en el mercado
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

CALOR HÚMEDO
Materiales que se pueden esterilizar por calor húmedo:

•Material de vidrio limpio

•Material de vidrio sucio
•Medios de cultivo
•Material metálico (pinzas, tijeras, material quirúrgico)
•Telas fibras naturales
•Otros
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

CALOR HÚMEDO

PATRÓN DE CARGA

Agrupación de los materiales a ser

esterilizados, que poseen
características similares de
volumen, tamaño, tipo de material,
etc.

Cada patrón de carga tendrá un

tiempo definido de esterilización.

FIG. 1. Patrones de temperatura de las zonas

inferior y superior de la cámara vacía.
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

CALOR HÚMEDO
VENTAJAS LIMITACIONES
•Compatible con la mayoría del •No útil para el material
material termosensible
•Especial para material •Deteriora filos cortantes
termorresistente •Corroe el material
•Rapidez del proceso •No penetra en aceite, polvo
•Eficaz por el gran poder de
penetración del vapor
•Bajo coste
•Controlable
•Fácil monitorización
•Respeta el ambiente
•No tóxico
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

CALOR HÚMEDO
Validación del proceso.

Determinación de la distribución y penetración del calor, con la ayuda de

indicadores físicos (termopares), químicos y biológicos.

Indicador químico:
a) Cinta testigo de
esterilización

Indicador biológico
a) Tiras de papel indicador
b) Tubos con indicador
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

INDICADORES DE ESTERILIZACIÓN
1) QUÍMICOS

a) Internos (sustancias dentro de una ampolleta que se funde y

cambian de color al llegar a la temperatura de esterilización)

b) Externos (cintas adhesivas o sellos impresos en bolsas con

sustancia que vira de color al llegar a la temperatura de
esterilización .
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN
INDICADORES DE ESTERILIZACIÓN

BIOLÓGICOS
Indicadores hechos a base de endosporas de los
siguientes microorganismos:

calor húmedo: Geobacillus stearothermophilus

calor seco: Bacillus atropheous
Radiaciones: Bacillus pumilus
óxido de etileno: Bacillus atropheous
Formaldehído: Geobacillus stearothermophilus
Plasma peróxido:Geobacillus stearothermophilus
Bacillus atrophaeus

Se pueden encontrar en presentaciones de:

Tira de papel impregnada
Ampolleta de vidrio con endosporas inmersas en
un medio de cultivo con indicador de pH
Cartuchos conteniendo un disco de papel filtro
impregnado de endosporas

La cantidad de endosporas que contienen estos

indicadores varía entre 1 X 105 y 1 X106
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

INDICADOR BIOLÓGICO PARA ESTERILIZACIÓN POR

CALOR HÚMEDO

Endosporas de Geobacillus stearothermophilus

Bacteria Gram positiva, en forma de bacilo, termófila distribuida en suelo,

manantiales calientes y sedimentos oceánicos. Temperatura óptima de
crecimiento es 55°C.
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

CALOR HÚMEDO
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

CALOR SECO
Principio:

El aire caliente generado por el calentamiento a base de resistencias

eléctricas produce desecación de la célula , efectos tóxicos por
niveles elevados de electrolitos, procesos oxidativos y fusión de
membranas. La acción destructiva del calor sobre las proteínas y
lípidos requiere mayor temperatura cuando el material está seco o la
actividad de agua del medio es baja.

Equipo utilizado para esterilización

por calor seco: HORNO
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

CALOR SECO

Agente esterilizante: aire caliente

Materiales resistentes al calor seco:

•Material de vidrio
•Líquidos no acuosos (aceites)
•Polvos (talco)
•Material metálico (pinzas, tijeras, material quirúrgico)
•Porcelana, cerámica
•Otros
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

CALOR SECO
Preparación del material para esterilización

Lavado de material para esterilización:

•Se usan escobillones

•Fibra suave
•Detergente extrán
•Enjuague con agua de la llave
•Enjuague con agua destilada

Secado del material:

•Horno o temperatura ambiente

MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

CALOR SECO
Preparación de material:
A) Protección del material
• Cubiertas de papel aluminio
• Tapones metálicos
• Cilindros de acero inoxidable

B) Identificación
• Nombre del material
• Condiciones de esterilización
• Fecha de la esterilización
• Nombre del operador
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

CALOR SECO 180°C/30 minutos

170°C/1 hora
Condiciones del proceso: 160°C /2 horas
150°C/ 2h 30’
140°C/3 horas
Validación del proceso: 121°C/6 horas

Determinación de la distribución y penetración del calor

(temperatura) dentro de la cámara con ayuda de termopares e
indicadores biológicos.
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

INDICADORES DE ESTERILIZACIÓN
1) QUÍMICOS

a) Internos (sustancias dentro de una ampolleta que se funde al

llegar a la temperatura de esterilización)

b) Externos (cintas adhesivas o sellos impresos en bolsas con

sustancia que vira de color al llegar a la temperatura de
esterilización .
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN
INDICADORES DE ESTERILIZACIÓN

BIOLÓGICOS

Indicadores hechos a base de endosporas de los

siguientes microorganismos:

calor húmedo: Geobacillus stearothermophilus

calor seco: Bacillus atropheous
óxido de etileno: Bacillus atropheous

Se pueden encontrar en presentaciones de:

Tira de papel impregnada
Ampolleta de vidrio con endosporas inmersas
en un medio de cultivo con indicador de pH
Cartuchos conteniendo un disco de papel filtro
impregnado de endosporas

La cantidad de endosporas que contienen estos

indicadores varía entre 1 X 105 y 1 X107
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

INDICADOR BIOLÓGICO PARA ESTERILIZACIÓN POR

CALOR SECO

Endosporas de Bacillus atropheous

MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

CALOR SECO

VENTAJAS
•Selectivo para polvos, aceite y vidrios.
•Bajo costo

LIMITACIONES
•No útil para el material termosensible
•Deteriora el material
•Difícil monitorización
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

FLAMEO

• La llama es un agente
esterilizador eficaz, y el más
simple.
• Es frecuentemente utilizado para
esterilizar el asa bacteriológica
para sembrar o resembrar un
cultivo.
• Al flamear el asa, debe evitarse
de ser posible, que lleve grandes
cantidades de material biológico.
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

FLAMEO

• Materiales como tijeras, hojas de

bisturí o pinzas, se puede
esterilizar mojándolo con alcohol
y encendiéndolo.
• Se debe repetir varias veces
para lograr una esterilización
completa.
• El método es rápido pero
produce carbonización y pérdida
del filo.

36
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

INCINERACIÓN
• Cultivos de laboratorio,
• Restos de sangre y sus derivados
• Restos orgánicos: anatómicos
• Algodones, gasas, vendas usadas, jeringas objetos punzocortantes.
• Restos de animales

Horno
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

Tabla de Métodos de Esterilización

Húmedo Vapor a presión (Autoclave)

Aire caliente (Horno)

Calor
Seco Flameado

Incineración
Métodos Físicos Filtración Discos de membrana
Rayos UV
No ionizantes
Rayos infrarrojos
Radiaciones
Rayos X
Ionizantes
Rayos g
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

FILTRACIÓN
Principio:

Eliminar por remoción completa los microorganismos y partículas de un

tamaño específico que se encuentran en un líquido o gas utilizando
para ello un filtro (de profundidad o de membrana) con una porosidad
tal que permita su retención.

Agente esterilizante: Filtros de profundidad o filtros de membrana

Tipos de materiales que se esterilizan por filtración:

Todos aquellos materiales que pueden ser alterados por la acción de
la temperatura:
•Vitaminas en solución (principio activo)
•Sueros
•Medios de cultivo
•Gases (Aire, oxígeno, etc.)
•otros
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

FILTRACIÓN
Tipos de filtros:

a) Filtros de profundidad
Consisten en materiales fibrosos o
granulados que se unen para formar una
capa gruesa rellena de canales retorcidos de
un diámetro pequeño. Se fabrican con tierra
de diatomeas (filtros de Berkefield),
porcelana no vidriada (filtros de
Chamberlain), vidriada (filtros de
Chamberlain), asbesto.

b) Filtros de membrana
Estos filtros son membranas porosas, con un
grosor ligeramente superior a 0.1 mm,
fabricadas de acetato de celulosa, nitrato de
celulosa, policarbonato, fluoruro de polivinilo
u otros materiales sintéticos. Membranas con
poro de 0.22 цm se emplean para eliminar
los microorganismos de las soluciones.
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

FILTRACIÓN
Mecanismo de acción de la
filtración:
La membrana o cartucho filtrante por el
pequeño diámetro del poro retiene a las
partículas y microorganismos que se
encuentran en el líquido a filtrar .

Condiciones del proceso:

poro de 0.22 micras (esterilizar)
poro de 0.45 micras
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

FILTRACIÓN
En condiciones asépticas,
se utiliza un filto de
membrana de 0,45 µm de
tamaño de poro que se
coloca en el portafiltros de
la rampa de filtración de
vacío.
Una vez finalizado, se
recoge el filtro con unas
pinzas estériles y se
coloca dentro de un
matraz con Caldo de
Cultivo

Se coloca el embudo del

filtro previamente
esterilizado
Se incuba el matraz a
37ºC durante 1-5 días

Se inicia la filtración
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

FILTRACIÓN

Testigo de organismos que son retenidos en

membranas (0,22µm) Brevundimonas diminuta
(antes Pseudomonas diminuta)
Testigo de organismos que son retenidos en
membranas (0,45 µm) Serratia marcescens

43
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

Tabla de Métodos de Esterilización

Húmedo Vapor a presión (Autoclave)

Aire caliente (Horno)

Calor
Seco Flameado

Incineración
Métodos Físicos Filtración Discos de membrana

Rayos UV
No ionizantes
Rayos infrarrojos
Radiaciones
Rayos X
Ionizantes
Rayos g
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

RADIACIONES
Las radiaciones son consideradas como la emisión de energía
radiante en forma de ondas o partículas. Algunas longitudes de
onda del espectro electromagnético como la LUV y las
radiaciones ionizantes (rayos X, gamma) pueden ser utilizadas
para mutar o eliminar microorganismos.
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

RADIACIONES
Tipos de radiación:

a) Ionizante (Rayos X y rayos gama) : son aquellas que producen iones y

radicales libres que alteran las bases de los ácidos nucleícos, estructuras proteícas y
lipídicas, y componentes esenciales para la viabilidad de los microorganismos. Tienen
alto poder de penetración.
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

RADIACIONES
Tipos de radiación:

b) No ionizante (UV): son radiaciones que afectan a las moléculas de ADN

de los microorganismos, debido a que forman dímeros de timina que inducen
errores en la duplicación y por lo tanto mutación o pérdida de la viabilidad de
las células.

Esta mutación puede provocar que se detenga la síntesis de proteínas o

que se altere la proteína sintetizada de manera que no tenga actividad o
que esta se encuentre disminuida o aumentada.
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

RADIACIONES

Tipos de materiales que se esterilizan con radiaciones:

Se les utiliza para esterilizar materiales termolábiles (termosensibles)

material farmacéutico; material médico-quirúrgico (guantes de
cirujano, suturas de nylon, jeringas desechables, agujas, bisturís,
catéteres, prótesis, etc).
Antibióticos, vacunas, alimentos, salas de quirófano.

Se utilizan a escala industrial por sus costos.

MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

RADIACIONES
Ejemplos de la cantidad necesaria en RADS para matar a los
microorganismos (o reducir la población un log)

Microorganismo RADS
Endosporas 300-400
Mycobacterium tuberculosis 400
Poliovirus 3800
Deinococcus radiodurans 6000
rad: cantidad de energía ionizante que ocasiona la absorción de 100 ergios de
energía por gramo de material irradiado

1Gy(gray)=100rad
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

RADIACIONES
Indicador de esterilización :
 Bacillus pumilus (200 000 rads ó 2000Gy)

Fuentes de radiación:

 60Co
 137Cs
 Máquinas generadoras de radiación (rayos X aceleradores de
electrones)

 Dósis: 2000-2500 Gy

Para irradiar alimentos : 10 000 Gy

Cuando 1Kg de muestra absorbe 1 joule de energía (1 joule= 107ergios), es que
recibió una dosis de 1Gy.
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

RADIACIONES
MÉTODOS FÍSICOS DE ESTERILIZACIÓN

RADIACIONES
VENTAJAS
•Proceso que se realiza a temperatura ambiente
•No deja residuos
•Es fácil de controlar
•Alto poder de penetración

LIMITACIONES
•Instalaciones complejas
•Alto costo