A Resolução RDC no 166, de 24 de julho de 2017

(MARINHA E EXÉRCITO)
Dispõe sobre a validação de métodos analíticos e dá outras providências.

ABRANGÊNCIA/ SE APLICA: a RDC nº 166/2017 deverá ser aplicada para os métodos analíticos empregados em
insumos farmacêuticos, medicamentos e produtos biológicos (IMUNOLÓGICOS) em todas as suas fases de
produção.

NÃO SE APLICA: Estão excluídos desta Resolução os métodos microbiológicos, para os quais deve ser apresentada
justificativa técnica para a abordagem escolhida, baseada na FB OU outros compêndios oficiais reconhecidos pela Anvisa.
 ATENTAR QUE NA RDC Nº 899/03 ERAM ABRANGIDOS TESTES MICROBIOLÓGICOS.

PARA EFEITOS DESTA RESOLUÇÃO, SÃO ADOTADAS AS SEGUINTES DEFINIÇÕES:

 ENSAIO LIMITE: ensaios que permitem verificar se a quantidade do analito está acima ou abaixo de um nível
previamente estabelecido, sem o quantificar com exatidão;
 FATOR RESPOSTA: razão entre sinal analítico e concentração do analito;
 FATOR RESPOSTA RELATIVO: razão entre dois fatores resposta, que é usada como correção no cálculo da
concentração de uma substância quando essa é medida por meio da resposta analítica de outra.

DAS DISPOSIÇÕES GERAIS

Art. 4° A validação deve demonstrar que o método analítico produz resultados confiáveis e é adequado à finalidade a que
se destina, de forma documentada e mediante critérios objetivos.
PROVA Os métodos analíticos compendiais devem ter sua adequabilidade demonstrada ao uso pretendido, nas condições
operacionais do laboratório, por meio da apresentação de um estudo de validação parcial.
A medida de pH, perda por secagem, cinzas sulfatadas, umidade, desintegração, entre outros, e os métodos
analíticos descritos em monografias individuais compendiais de insumos farmacêuticos não ativos NÃO
NECESSITAM DE VALIDAÇÃO PARCIAL. PROVA

QUAIS SÃO OS PARÂMETROS MÍNIMOS A SEREM AVALIADOS NA VALIDAÇÃO PARCIAL?

 PROVA A precisão, exatidão e seletividade. (PES)
No caso de métodos analíticos destinados à quantificação de impurezas, a validação parcial deve incluir o limite
de quantificação.
No caso de ensaio limite, em substituição aos parâmetros do caput, devem ser avaliados os parâmetros de
seletividade e de limite de detecção.
No caso de transferência de método entre laboratórios, esse será considerado validado, desde que seja realizado
um estudo de validação parcial nas dependências do laboratório receptor. No caso de transferência de método entre
laboratórios com o mesmo sistema de gerenciamento da qualidade pode ser realizada por meio de um estudo de
validação parcial, ou pela avaliação da reprodutibilidade. Adicionalmente, caso a transferência também utilize testes
comparativos, a semelhança nos resultados deverá ser comprovada por meio de ferramenta estatística.
PROVA  A UTILIZAÇÃO DE MÉTODO ANALÍTICO NÃO COMPENDIAL EXIGE VALIDAÇÃO
TOTAL.

Uma revalidação de método analítico pode considerar as seguintes circunstâncias:

I.- alterações na síntese ou obtenção do IFA;
II.- alterações na composição do produto;
III.- alterações no método analítico
IV.- outras alterações que possam impactar no método validado previamente.
Parágrafo único. Os parâmetros de validação a serem avaliados dependem da natureza das alterações realizadas.
PROVA !!! Também é importante realizar a verificação do sistema a cada corrida analítica. TAL VERIFICAÇÃO
GARANTE QUE O SISTEMA É ADEQUADO AO USO PRETENDIDO, SENDO OS PARÂMETROS DESTE
PROCESSO DECIDIDOS NA ETAPA DE VALIDAÇÃO DO SISTEMA.

DAS SUBSTÂNCIAS QUÍMICAS DE REFERÊNCIA

Na validação de métodos analíticos, deverá ser utilizada Substância Química de Referência Farmacopeica (SQF)
Será admitido o uso de Substância Química de Referência Caracterizada (SQC), mediante a apresentação de relatório
de caracterização conclusivo para o lote em estudo, incluindo as razões técnicas para escolha dos ensaios utilizados e os
dados brutos pertinentes. NÃO SENDO PERMITIDO COMO SUSBTÂNCIA DE REFERÊNCIA PARA
VALIDAÇÃO COMPLETA.

Art. 15 O RELATÓRIO DE CARACTERIZAÇÃO, a depender do analito, deve conter os dados obtidos a partir de
técnicas aplicáveis à caracterização de cada substância química como, por exemplo, termogravimetria, ponto de fusão,
calorimetria
Exploratória diferencial, espectroscopia no infravermelho, espectrometria de massas, ressonância magnética nuclear,
análise elementar (carbono/hidrogênio/nitrogênio), difração de raio X, rotação óptica, métodos cromatográficos, entre
outras.

ALÉM DOS DADOS DE CARACTERIZAÇÃO, DEVEM SER INCLUÍDAS NO RELATÓRIO AS SEGUINTES

INFORMAÇÕES:
I.- número e validade do lote da substância utilizado na caracterização;
II.- denominação comum brasileira ou denominação comum internacional;
III.- n° CAS;
IV.- nome químico;
V.- sinonímia
VI.- fórmula molecular e estrutural;
VII.- peso molecular;
VIII.- forma física;
IX.- propriedades físico-químicas;
X.- perfil de impurezas;
XI.- cuidados de manipulação e conservação, e
XII.- laudo analítico comprovando a identidade, teor e validade da SQC.

DOS PARÂMETROS DA VALIDAÇÃO ANALÍTICA

Seção I

!!! PROVA ART. 18 NÃO É ADMITIDA A UTILIZAÇÃO DE SQT PARA FINS DE VALIDAÇÃO DE MÉTODO
ANALÍTICO.

!!! PROVA PARÂMETROS A SEREM AVALIADOS NA VALIDAÇÃO COMPLETA

(1)Nos casos em que foi conduzida a reprodutibilidade, não é necessário conduzir a precisão intermediária.
(2)Nos casos de ensaios de identificação, pode ser necessária a combinação de dois ou mais procedimentos analíticos
para atingir o nível necessário de discriminação.
(3)Pode ser necessário em alguns casos.

Da Seletividade
COMO AVALIAR? A seletividade do método analítico deve ser demonstrada por meio da sua capacidade de identificar
ou quantificar o analito de interesse, inequivocamente, na presença de componentes que podem estar presentes na amostra,
como impurezas, diluentes e componentes da matriz.
  No caso de métodos cromatográficos, deve ser comprovada a pureza cromatográfica do sinal do analito,
exceto para produtos biológicos.
 Deve ser utilizada a SQR na comparação com a resposta obtida para o analito.
 Para gases medicinais, a seletividade deve ser demonstrada comparando- se o resultado da leitura da
amostra com a resposta da leitura da SQR

PROVA Art. 21 Para métodos quantitativos e ensaios limite, a seletividade deve ser demonstrada por meio da
comprovação de que a resposta analítica se deve exclusivamente ao analito, sem interferência do diluente, da matriz, de
impurezas ou de produtos de degradação.
§1° Para demonstrar ausência de interferência de produtos de degradação, é necessário expor a amostra a
condições de degradação em ampla faixa de pH, de oxidação, de calor e de luz. SÃO ISENTOS DESTAS CONDIÇÕES:
I.- produtos para os quais já foi demonstrada adequação à resolução que estabelece parâmetros para a notificação,
identificação e qualificação de produtos de degradação em medicamentos.
II.- métodos de desempenho;
III.- métodos não cromatográficos.

Da Linearidade
COMO AVALIAR? A linearidade de um método deve ser demonstrada por meio da sua capacidade de obter respostas
analíticas diretamente proporcionais à concentração de um analito em uma amostra.
PROVA !!!! Art. 25 Para o estabelecimento da linearidade, deve-se utilizar, no mínimo, 5 (cinco) concentrações
diferentes da SQR para as soluções preparadas em, no mínimo, triplicata.
As soluções utilizadas para avaliação da linearidade devem ser preparadas de maneira independente, podendo ser
utilizadas soluções diluídas de uma mesma solução mãe da SQR.

PROVA !!!! Art. 27 Para avaliação da linearidade, devem ser apresentados os seguintes dados:
I.- representação gráfica das respostas em função da concentração do analito;
II.- gráfico de dispersão dos resíduos, acompanhado de sua avaliação estatística;
III.- equação da reta de regressão de y em x, estimada pelo método dos mínimos quadrados;
IV.- avaliação da associação linear entre as variáveis por meio do coeficientes de correlação (r) e de determinação (r²);
V.- avaliação da significância do coeficiente angular.
§ 1º A homocedasticidade dos dados deve ser investigada para a utilização do modelo adequado.
§ 2º Nos testes estatísticos, deve ser utilizado um nível de significância de 5%.
§ 3º O coeficiente de correlação deve estar acima de 0,990.
§ 4º O coeficiente angular deve ser significativamente diferente de zero.

Do Efeito Matriz

COMO AVALIAR? O efeito matriz deve ser determinado por meio da comparação entre os coeficientes angulares das
curvas de calibração construídas com a SQR do analito em solvente e com a amostra fortificada com a SQR do analito.
As curvas devem ser estabelecidas da mesma forma que na linearidade para os mesmos níveis de concentração,
utilizando, no mínimo, 5 (cinco) concentrações diferentes em, no mínimo, triplicata.
Art. 30 O paralelismo das retas é indicativo de ausência de interferência dos constituintes da matriz e a sua
demonstração deve ser realizada por meio de avaliação estatística adequada.
Parágrafo único. Deve ser adotado o nível de significância de 5% (cinco por cento) no teste de hipóteses.

Da faixa de trabalho
COMO AVALIAR? A faixa de trabalho deve ser estabelecida a partir dos estudos de linearidade, juntamente com os
resultados de precisão e exatidão, sendo dependente da aplicação pretendida.

PROVA !!!! Art. 32 Devem ser consideradas as seguintes faixas de trabalho:

I.- PARA TEOR: de 80% (oitenta por cento) a 120% (cento e vinte por cento);
II.- PARA UNIFORMIDADE DE CONTEÚDO: de 70% (setenta por cento) a 130% (centro e trinta por cento);
III.- PARA TESTE DE DISSOLUÇÃO: de -20% (menos vinte por cento) da menor concentração esperada a
+20% (mais vinte por cento) da maior concentração esperada a partir do perfil de dissolução; e
IV.- PARA DETERMINAÇÃO DE IMPUREZAS: do limite de quantificação até 120% (cento e vinte por
cento) da concentração no limite da especificação de cada impureza individual;
V.- PARA DETERMINAÇÃO SIMULTÂNEA DE TEOR E IMPUREZAS PELO PROCEDIMENTO DE
NORMALIZAÇÃO DE ÁREA: do limite de quantificação (LQ) até 120% da concentração esperada da substância
ativa.
§ 1º Faixas de trabalho maiores que as definidas no caput poderão ser utilizadas se justificadas tecnicamente.
§ 2º Para gases medicinais, serão aceitas faixas de trabalho alternativas desde que a abordagem para a escolha do
intervalo seja justificada
Da Precisão
COMO AVALIAR? A precisão deve avaliar a proximidade entre os resultados obtidos por meio de ensaios com amostras
preparadas conforme descrito no método analítico a ser validado.
A PRECISÃO DEVE SER EXPRESSA POR MEIO DA:
 REPETIBILIDADE
 PRECISÃO INTERMEDIÁRIA OU
 REPRODUTIBILIDADE.

 Parágrafo único. No caso de amostras sólidas e semissólidas, não é aceita a utilização de soluções diluídas
de uma mesma solução mãe.

ART.35 A PRECISÃO DEVE SER CALCULADA PELA DISPERSÃO DOS RESULTADOS, CALCULANDO-SE O
DESVIO PADRÃO RELATIVO (DPR) DA SÉRIE DE MEDIÇÕES CONFORME A FÓRMULA

"DPR=(DP/CMD)X100",

EM QUE DP É O DESVIO PADRÃO E CMD, A CONCENTRAÇÃO MÉDIA DETERMINADA.

§1° No caso de impurezas conhecidas ausentes ou presentes em concentração menor que o limite da especificação na
amostra, esta deve ser fortificada com concentrações conhecidas do padrão de impurezas.
§2° No caso de impurezas desconhecidas, a amostra deve ser avaliada utilizando a resposta do ativo acrescido à matriz na
concentração correspondente ao limite da especificação estabelecido para a impureza, desde que se considere o mesmo
fator resposta para impureza e para o ativo.

Art. 38 A DETERMINAÇÃO DA REPETIBILIDADE DEVE OBEDECER AOS SEGUINTES CRITÉRIOS:

I - avaliar as amostras sob as mesmas condições de operação, mesmo analista e mesma instrumentação, em uma
única corrida analítica.
II - utilizar, no mínimo, 9 (nove) determinações, contemplando o intervalo linear do método analítico, ou seja, 3 (três)
concentrações: baixa, média e alta, com 3 (três) réplicas em cada nível OU 6 (seis) réplicas a 100% (cem por cento) da
concentração do teste individualmente preparadas.

Art. 39 Os critérios de aceitação devem ser definidos e justificados de acordo com os seguintes aspectos:
I - objetivo do método;
II - variabilidade intrínseca do método;
III - concentração de trabalho; e
IV - concentração do analito na amostra.

Art. 40 A DETERMINAÇÃO DA PRECISÃO INTERMEDIÁRIA DEVE OBEDECER AOS SEGUINTES

CRITÉRIOS:
I.- expressar a proximidade entre os resultados obtidos da análise de uma mesma amostra, no mesmo laboratório, em
pelo menos dois dias diferentes, realizada por operadores distintos; e
II - contemplar as mesmas concentrações e o mesmo número de determinações descritas na avaliação da repetibilidade.

ART. 41 A REPRODUTIBILIDADE DEVE SER OBTIDA POR MEIO DA PROXIMIDADE DOS

RESULTADOS OBTIDOS EM LABORATÓRIOS DIFERENTES
A reprodutibilidade é aplicável em estudos colaborativos ou na padronização de métodos analíticos para inclusão
desses em compêndios oficiais, mediante testes estatísticos adequados.

PROVA Como comparar 2 resultados de precisão obtidos por 2 laboratórios diferentes?

SE F CALCULADO > F TABELADO Há diferença entre os resultados de precisão obtidos em diferentes laboratórios.
SE F CALCULADO < F TABELADO Não há diferença entre os resultados de precisão obtidos em diferentes
laboratórios.

F= (desvio padrão A)2 nível de confiança= p

(desvio padrão B)2
Da Exatidão:

OQUE É? É a proximidade dos resultados obtidos pelo método em estudo em relação a um valor adotado como
verdadeiro.

COMO AVALIAR? A exatidão deve ser verificada a partir de, no mínimo, 9 (nove) determinações, contemplando o
intervalo linear do método analítico, ou seja, 3 (três) concentrações: baixa, média e alta, com 3 (três) réplicas em cada
nível.
Art. 44 As amostras para avaliação da exatidão devem ser preparadas de maneira independente, podendo ser utilizadas
soluções diluídas de uma mesma solução mãe da SQR.

Art. 45 Para a determinação da exatidão, deve ser utilizada a abordagem mais adequada, de acordo com o método analítico
em estudo:
I.- para INSUMO FARMACÊUTICO ATIVO
a) aplicar o método proposto utilizando substância de pureza conhecida (SQR);
b) comparar os resultados obtidos com aqueles resultantes de um segundo método validado, cuja exatidão tenha sido
estabelecida; ou
c) no caso de analito em matriz complexa, realizar análise pelo método de adição de SQR no qual quantidades conhecidas
de SQR são acrescentadas à amostra.
II.- para produto terminado:
a) aplicar o método proposto na análise de uma amostra, na qual quantidade conhecida de SQR foi adicionada à matriz;
b) na indisponibilidade de amostras de todos os componentes do medicamento, pode ser realizada a análise pelo método
de adição de SQR, no qual quantidades conhecidas de SQR são acrescidas à solução do produto terminado; ou
c) comparar os resultados obtidos com aqueles resultantes de um segundo método validado.

III.- PARA IMPUREZAS:

a) aplicar o método de adição de padrão, no qual quantidades conhecidas de impurezas ou produtos de degradação são
acrescidas à amostra;
b) na indisponibilidade de amostras de certas impurezas ou produtos de degradação, pode ser realizada a comparação dos
resultados obtidos com um segundo método validado e a utilização do fator resposta relativo ao IFA;
c) para impurezas desconhecidas, a exatidão deve ser avaliada comparando-se a resposta da SQR do IFA ou de impureza
conhecida, conforme o método proposto, em uma faixa de concentração que contemple a faixa de trabalho do método,
desde que seja considerado o mesmo fator resposta.
Art. 46 A exatidão deve ser expressa pela relação percentual de recuperação do analito de concentração conhecida
adicionado à amostra ou pela relação entre a concentração média, determinada experimentalmente, e a concentração
Teórica correspondente. (fórmula 1)

RECUPERAÇÃO: CONCENTRAÇÃO MÉDIA EXPERIMENTAL X 100

CONCENTRAÇÃO TEÓRICA

RECUPERAÇÃO=CONCENTRAÇÃO DA AMOSTRA ADICIONADA – CONCENTRAÇÃO DA AMOSTRA X 100

CONCENTRAÇÃO TEÓRICA DO ANALITO

Art. 47. Deve ser calculado o Desvio Padrão Relativo para cada concentração.

Do Limite de Detecção
COMO AVALIAR? Limite de detecção deve ser demonstrado pela obtenção da menor quantidade do analito presente
em uma amostra que pode ser detectado, porém, não necessariamente quantificado, sob as condições experimentais
estabelecidas.

Art. 50 A determinação do limite de detecção pode ser realizada por meio de método visual, da razão sinal-ruído, baseado
na determinação do branco ou em parâmetros da curva de calibração, considerando-se as particularidades do método
analítico utilizado.
Art. 51 Para métodos visuais, o limite de detecção é determinado pela menor concentração para a qual é possível constatar
o efeito visual esperado (mudança de cor, turvação).
Art. 52 Para métodos instrumentais, o limite de detecção pode ser determinado pela razão sinal-ruído.
§1° O método utilizado para determinação da razão sinal/ruído deve ser descrito e justificado.
§2° A razão sinal-ruído deve ser maior ou igual a 2:1.
Art. 53 Para a determinação baseada em parâmetros da curva analítica, o limite de detecção pode ser calculado pela
fórmula 2.

LD= 3,3 X DP
IC
 DP: Desvio Padrão obtido à partir de 3 curvas de calibração construídas com concentrações do analito, próximo
ao limite de detecção.
 IC: Inclinação da curva de calibração.

Do Limite de Quantificação
COMO AVALIAR? O limite de quantificação é a menor quantidade do analito em uma amostra que pode ser determinada
com precisão e exatidão aceitáveis sob as condições experimentais estabelecidas.
Art. 56 O limite de quantificação deve ser coerente com o limite de especificação da impureza.
Parágrafo único. Para produtos adequados à resolução que estabelece parâmetros para a notificação, identificação e
qualificação de produtos de degradação em medicamentos, o limite de quantificação deve ser menor ou igual ao limite de
notificação.

Art. 57 Para a determinação deste parâmetro USAR A FÓRMULA 2, sendo que a razão sinal/ruído deve ser no mínimo
de 10:1.

LD= 10 X DP
IC

Art. 60 Devem ser testadas precisão e exatidão nas concentrações correspondentes ao limite de quantificação.

Da Robustez
COMO AVALIAR? A robustez é um parâmetro tipicamente realizado no desenvolvimento do método analítico que
indica a sua capacidade em resistir a pequenas e deliberadas variações das condições analíticas.

DAS DISPOSIÇÕES TRANSITÓRIAS

Art. 66 Serão aceitas validações de método analítico em conformidade com a Resolução RE nº 899/2003, desde que
tenham sido finalizadas antes da vigência desta resolução e as petições que as contenham tenham sido protocoladas em
até 550 (quinhentos e cinquenta) dias corridos após a vigência desta resolução.
Em caso da necessidade de execução e reapresentação de um ou mais parâmetros da validação, desde que não seja
necessária a apresentação de nova validação, a empresa poderá seguir a Resolução RE nº 899, de 29 de maio, de
2003.