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Resumen
Los biomateriales con capacidades específicas para interactuar con estructuras biológicas se han
utilizado ampliamente en el desarrollo de diferentes dispositivos destinados al uso biomédico.
Dentro de este campo, el interés en los polímeros endógenos como componentes de los sistemas
de suministro ha ganado una atención creciente. El objetivo de este capítulo es proporcionar una
visión general del uso de estos polímeros en el desarrollo de nanopartículas y, más específicamente,
presentar estrategias novedosas que podrían abrir nuevos horizontes para la terapia de genes
basada en vectores no virales. Las estrategias que describimos podrían ofrecer una oportunidad
única para respaldar la traducción de avances científicos básicos en polímeros endógenos a
aplicaciones clínicas, ofreciendo así la posibilidad de romper barreras en la transición de enfoques
basados en recursos a estrategias basadas en el conocimiento.
8.1 Introducción
Polímero:
Biocompatibilidad y biodegradabilidad - el polímero debe ser metabolizado por los tejidos
y las células y los productos de degradación deben ser compatibles con las estructuras del
cuerpo.
Ausencia de toxicidad - el polímero no debe presentar toxicidad aguda ni crónica. no debe
provocar respuestas inmunes.
Capacidad de formar nanopartículas-- el polímero debe poder formar fácilmente un sistema
estable de nanopartículas.
Disponibilidad y asequibilidad - el polímero debe obtenerse fácilmente en grado
farmacéutico y preferiblemente en piezas pequeñas.
Nanopartícula:
Protección del material genético - el sistema debe poder formar el ácido nucleico
terapéutico para la degradación (nucleasas extracelulares, lisosomas, etc.)
captación celular específica - el sistema debe ser internalizado específicamente por la célula
objetivo para evitar posibles efectos fuera del objetivo.
Liberación cinética - la liberación cinética debe evitar la liberación temprana del ácido
nucleico, pero debe tener una liberación apropiada en el objetivo.
Estabilidad - el sistema debe mostrar estabilidad en anaquel así como estabilidad después
de la administración (sin agregación, precipitación o fenómenos de disociación no
deseados).
Entre los sistemas no virales y desde una perspectiva histórica, como una premisa de las ciencias
materiales relacionadas con la selección o el diseño de componentes para el desarrollo de
nanopartículas destinadas a la terapia génica, la bioinserción ha sido un requisito fundamental. La
bioinserción significa que un material no debe provocar ninguna reacción del cuerpo. Así, en la
literatura podemos encontrar diferentes nanosistemas inertes, como los basados en poliésteres. Sin
embargo, esta posición anterior se reconsideró después de comprender que el uso de moléculas
bioactivas o biomacromoléculas podría mejorar la orientación hacia tejidos / órganos específicos y
proporcionar un valor biológico agregado, como la mucoadhesividad, la capacidad de interactuar
con receptores específicos, la capacidad de proporcionar estabilidad en fluidos biológicos, la
capacidad de aumentar la eficacia de los medicamentos e incluso proporcionar efectos sinérgicos.
Estos aspectos se analizan en las siguientes secciones, en las que nos referimos a polímeros
endógenos, es decir, aquellos componentes poliméricos que se encuentran en el cuerpo humano.
Como consecuencia, en los últimos años se ha prestado mayor atención al uso de materiales
endógenos que cumplirían dichos requisitos. Aquí enfocaremos nuestra atención en estas
nanopartículas basadas en polímeros endógenos no virales.
8.2. Las nanopartículas poliméricas en la terapia génica: principal característica de los sistemas
actualmente propuestos Nano Basado en endógenos Polímeros
La literatura describe distintos sistemas Nano destinados a la terapia génica. Entre estos sistemas
nano, los basados en polímeros y el nivel submicrométrico son generalmente denominados
nanopartículas. Sin embargo, en primer lugar hay que aclarar la diferencia entre las nanopartículas
términos y nanocomplexes (o complejos en general), tal como nos referimos a ambos en este
capítulo. Complejos pueden describirse aliado estequiométrica y por lo general se forman por
simple mezcla de polímeros catiónicos y los ácidos nucleicos en cuestión. En tal caso, sin el
compuesto de ácido nucleico activo que simplemente tendríamos una dispersión polimérica. Por el
contrario, en el caso de nanopartículas polimérico la formación de la estructura polimérica no
requiere la concurrencia de un compuesto activo, resultando en lo que es posible para denotar
como sistemas Nano “en blanco”. Debido a la naturaleza obviamente más intrincado de las
interacciones entre los polímeros en nanopartículas (que pueden variar de enlaces covalentes a las
interacciones físicamente reticulados), generalmente se reconoce que tienen una capacidad
superior para proteger la secuencia nucleico. De hecho, en algunos Nano complejos de ácido
nucleico puede ser desplazado o disociada debido a las interacciones competitivas de los polímeros
con componentes biológicos.
A pesar de las características inherentes de estos polímeros endógenos les ofrecen un gran potencial
para el diseño de los diferentes enfoques de administración de fármacos, su uso en el desarrollo de
nanopartículas no es una tarea fácil. La mayoría de estos polímeros son solubles en agua y no se
comportan bien en disolventes orgánicos. Por lo tanto, algunas técnicas de preparación
ampliamente utilizados en la nanotecnología no son adecuados para la formación de nanopartículas
utilizando tales compuestos. Además, estos uso de agentes de reticulación químicos, tales como
polímeros endógenos también pueden ser divididos sobre la base de sus características físico-
químicas a pH fisiológico, por lo que pueden ser polímeros catiónicos o aniónicos. Los compuestos
catiónicos se requieren generalmente para la terapia génica no viral, ya que la puede compactar y
proteger la secuencia terapéutica de material genético. Sin embargo, no se encuentran fácilmente
en el cuerpo. Ejemplos importantes serían protamina y la lisozima, aunque sólo el primero ha sido
propuesta como un biomaterial para la administración génica. Otras aminas de bajo peso molecular
endógenas también se han propuesto en la formación de sistemas Nano a base de compuestos
naturales, pero como agentes de reticulación iónicos e inductores de ácidos nucleicos de
compactación. Estos compuestos de amina (espermina y espermidina) están presentes en casi todos
los tejidos y poseen grupos amina que están completamente protonados a pH fisiológico. En este
nuevo enfoque, una estrategia inversa a preparación clásica ionotrópicos de nanopartículas se ha
propuesto sobre la base de carga negativa reticulantes iónicos tales como tripolifosfato o sulfato de
sodio. Los principales intereses en una estrategia de este tipo están relacionadas con la posibilidad
de: desarrollar nanopartículas a base de polímeros endógenos aniónicos tales como hialurónico o
condroitina sin la necesidad de modificar o utilizar productos químicos que pueden alterar su alto
valor biológico (polímeros endógenos en naturabilis puris); beneficiarse de las propiedades
específicas de estas poliaminas biogénicas, que son esenciales para los procesos de crecimiento del
tejido y la diferenciación celular y que tienen receptores específicos para su internalización. Poseen
propiedades especiales que confieren protección al ADN contra oxidativo. El aumento de los niveles
intracelulares de tales poliaminas puede revertir el envejecimiento procesos relacionados, lo que
conduce en última instancia a un aumento de vida útil en una gran variedad de formas de vida, tales
como levaduras, moscas y células inmunes humanas.
la modificación con dichos compuestos aumenta el punto isoeléctrico de los polímeros y así
aumenta la afinidad y la fuerza de polímero-ácido nucleico intera.
Un ejemplo, un aumento en el punto isoeléctrico de albúmina permite la producción de
nanopartículas de albúmina cationizada asociada a siRNA, como las preparadas por Han et al. (2013)
(Tamaño medio 260 nm y potencial zeta positivo +30 mV) 154).
Sin embargo, es importante tener en cuenta que la adición de amina gr aumentar la toxicidad del
polímero resultante al mismo tiempo, incluso para aquellos con alto biocompatibilidad en su estado
natural [55]. Además, la agregación inducida por el suero de nano sistemas basados en polímeros
cationizados como la albúmina se han reportado después.
Administración IV, resultando en agregados con un tamaño de hasta 5 um, lo que los lleva a ser
atrapados en los capilares pulmonares, como se ha informado anteriormente para otras
enfermedades vecinales catiónicas tors [56,57]. A pesar de que esta preferencia pulmonar puede
usarse para diseñar tratamientos específicos, debería considerarse una preocupación importante
debido a posibles daños indeseables asociados
Se abordó la agregación descrita después de la administración parenteral. Otros ejemplos se pueden
encontrar efectos indeseables en la literatura usando otras vías de administración.
Por lo tanto, después de la inyección intravítrea de partículas aniónicas basadas en albúmina, la
difusión libre en el
Se puede observar la dirección posterior desde el vítreo a la retina, pero la mayoría de los catiónicos
las partículas permanecen unidas y agregadas en el vítreo [58,59] Para ilustrar los enfoques
mencionados, la Figura 8.2 muestra algunos ligandos que ya se han utilizado en la modificación de
polímeros para sistemas de administración de medicamentos y que por lo tanto pueden encontrar
aplicaciones especiales en terapia génica.
El tripéptido RGD es un dominio de señalización derivado de la fribronectina y la laminina.y se
compone de L-arginina, glicina y ácido L-aspártico. Esta secuencia es una común elemento en el
reconocimiento celular implicado en la unión celular a través de integrinas y es uno de los enfoques
más descritos para el desarrollo de biomateriales biomiméticos.(60,61]. Por ejemplo, las
nanopartículas de albúmina injertadas con RGD demostraron 61 veces mejora en el suministro
celflar mediado por receptores específicos de oligonucleótidos en inte-células tumorales que
expresan la sonrisa en comparación con los nanoconjugados de control no dirigidos. Ellos HN
Figura 8.2 Ejemplos de ligandos utilizados para proporcionar nuevas características a los polímeros
endógenos
POLÍMEROS ENDÓGENOS COMO BIOMATERIALES PARA EL NANOPARTICULADO Pag 244
También fueron capaces de mejorar la actividad funcional del aligonucleótido en concentraciones
molares sin causar cito expresivo.
También se han utilizado para modificar los polímeros endógenos. Ácido urónico [65], mejorando
sus interacciones con las células. Es importante que a pesar de estas modificaciones no fueron
pensadas para el gen nanoparticulado abren posibilidades interesantes para apuntar a grupos
celulares específicos
62), RGD [63,64]El ácido fólico es un ligando de alta afinidad del receptor de folato, que algún tipo
de cáncer, como el cáncer de ovario o de pulmón, pero ausente en las células normales si derivado
por su grupo y-carboxilo, mantiene la afinidad de unión al receptor (66). Folato La conjugación, por
lo tanto, presenta un método alternativo para apuntar al receptor de folato.
Esta estrategia se ha aplicado con éxito in vitro no solo para terapia génica sino también para la
administración específica de receptores de anticuerpos anti-receptor de células T, interleucina 2,
agentes de terapia madre, radiofármacos y agentes de contraste de imagen, entre otros67].
Conjugación covalente de ácido fólico en la superficie de las nanopartículas de albúmina
La reacción de carbodiimina condujo a una mayor absorción de nanopartículas por las células
cancerosas (neuro línea celular de blastoma UKF-NB-3, y línea de glioblastoma de rata 101/8) pero
no de forma normal células (fibroblastos primarios normales del prepucio humano) (68]. El mismo
enfoque también fue se utiliza para las nanopartículas de albúmina dirigidas a las células SKOV3
(células de cáncer de ovario humano).línea), siendo nanopartículas (-70 nm) internalizadas con éxito
por las células por medio de la vía del folato [69]. La conjugación covalente de folato sobre la
superficie de la las nanopartículas parecen ser cruciales para mejorar la afinidad de las
nanopartículas por el receptor Las nanopartículas adsorbidas en folato exhiben una afinidad inferior
en comparación con covalentes unidos [68]
Está sobre expresado en cómo se mencionó anteriormente, la modificación química de los
polímeros mediante la adición de azucares también puede proporcionar nuevas características a los
polímeros endógenos. Carbohidratos nativos los grupos de aldehído que se contaminan como
extremos reductores se pueden acoplar directamente con el contenido de amina. Moléculas, que
conducen a la formación de un intermedio de base de Schiff. Asialoglicoproteína
Los receptores presentados en el hígado se pueden atacar utilizando polímeros con lactosa o
galactosa.
Los residuos. Así, las nanopartículas de albúmina-polietilenimina galactosiladas probadas en vitro
para la transferencia de genes sho de receptores de galactosa en células diana en una célula de
hepatoblastoma humano cultivado ine (Hep Células G2) y células de fibroblastos de ratón (células
NIH / 3T3) 170]. Otro enfoque interesante
Es modificación del polímero con manosa. En este caso, el objetivo es la manosa. proteína de unión
(MBP), una proteína de tipo lectina que participa en el sistema inmunitario innato respuesta,
estando presente en ciertos tipos de células, por ejemplo, células hepáticas y fagocíticas (tales como
macrófagos y células dendríticas) [71]. Los estudios farmacocinéticos revelaron una mayor tasa de
internalización en comparación con otros portadores específicos del hígado basados en o Albúmina
sylated, succinilada y cationizada. Después de 2 h de administración intravenosa,el 70% de la
albúmina de suero bovino manosilado se acumula en el hígado, con Kupffer. Las células son
responsables del 66% de esta captación [72]. Tal funcionalización con la nariz también se ha descrito
con éxito para la administración de fármacos y genes con otros nano sistemas tales como liposomas
y nanopartículas lipídicas sólidas (73-75]
La captación celular casada depende específicamente de la abundancia. Para obtener un beneficio
de las propiedades de los restos antes mencionados mientras que al servicio de la delicada
naturaleza y propiedades de los polímeros endógenos, modificación.es el medio ambiente Duro
debe ser leve y preferiblemente tener lugar en una puede resultar en hidrólisis, pérdida irreversible
de reaccionar polímero
b) Aminación reductiva
(c) Reacción de maieilamida.
d) Reacción de isotiocianato
La figura 8.4 propuso una vía de internalización para las nanopartículas basadas en ácido
hialurónico cargadas con plásmido. Las nanoestructuras interactúan con los receptores
CD44 en la membrana plasmática, lo que desencadena la internalización de las vesículas
caveola que luego se fusionan con la caveosoma. El plásmido se libera de las
nanopartículas y, finalmente, puede entrar en el núcleo.
Proteínas:
Albúmina
La albúmina de suero humano (HSA) es la principal proteína plasmática, con una estructura
globular y un peso molecular de 66.4 kDa. Su estabilidad es relativamente buena contra (60
° C) y PH (de 4 a 9), así como su baja toxicidad e inmunogenicidad, hacen de la albúmina
un material muy interesante para la administración de fármacos (88,89). Además, la
albúmina exhibe una alta capacidad de unión de fármacos debido a la presencia de
múltiples sitios de unión. De hecho, muchos compuestos metabólicos y fármacos
terapéuticos son transportados por la albúmina. La mayor parte del interés en la albúmina
para la terapia génica se basa en su capacidad bien conocida para evitar interacciones no
deseadas con proteínas séricas, que se producen después de la inyección intravenosa de
sistemas de transfección (89).
El recubrimiento de nanoestructuras con albúmina puede ser útil para prevenir su
interacción con el suero y mejorar la captación intracelular. Por lo tanto, a concentraciones
adecuadas, la albúmina tiene el potencial de minimizar las interacciones de las proteínas
séricas con las nanopartículas de ARNip destinadas a la administración sistémica in vivo
de ARNip in vivo (90). Además, debido a su carga negativa, el HAS puede disminuir la carga
superficial de los PNL y aumentar la estabilidad del suero. Como ejemplo, un recubrimiento
de HAS en nanopartículas redujo significativamente la fluorescencia en las células MCF-7
transfectadas con phrGFP que destruyeron los experimentos. En presencia de FBS (5%),
la fluorescencia después de la exposición a nanopartículas lipídicas con ARNip recubiertas
con albúmina disminuyó significativamente la fluorescencia de phrGFP a una relación de
SHA a ARN
Si de 2:10. PhrGFP fue significativamente regulado a la baja en las células mcf-7, MDAMB-
231 y SK-BR-3 TRANSFECTADAS con phrGFP solo cuando la albúmina fue necesaria para
recubrir las nanopartículas lipídicas (91). Se ha utilizado un recubrimiento de albúmina para
estabilizar las nanopartículas de oro (92) y las nanopartículas de sílice (93). Las
nanopartículas de oro recubiertas con citrato se agregan y precipitan rápidamente en un
punto isoeléctrico. Sin embargo, las mediciones del potencial zeta demostraron que las
nanopartículas de oro recubiertas con albúmina son estables en su punto isoeléctrico. Tanto
la albúmina como las nanopartículas tenían casi el mismo punto isoeléctrico y estaban
cargadas negativamente a pH neutro, lo que proporcionaba una estabilización electrostática
además de la estabilización estérica (92).
En cuanto a la toxicidad, tres líneas celulares humanas de colon (CaCo-2), pulmón (A5499
y macrófagos (THP-1), así como dos líneas celulares de ratón de pulmón (ASB-XVI) y colon
(colon-26), nanopartículas estabilizadas con albúmina). Considerablemente menos tóxico
que las nanoestructuras no modificadas (93), además de no mostrar un efecto significativo
en la visibilidad celular de las células 4T1 de tumor mamario ratón (90).
Si bien las técnicas de manipulación de genes ofrecen la posibilidad de producir albúmina
de suero humana recombinante (rHSA) (94), numerosos estudios han utilizado albúmina de
suero bovino (BSA) en el desarrollo de sistemas de administración de fármacos, más debido
al factor económico que a las diferencias químicas entre HAS y BSA. Ambas proteínas
tienen un plegamiento similar y una estructura primaria bien conocida; la diferencia más
notable es la presencia de dos residuos de triptófano en la albúmina bovina, mientras que
la albúmina humana tiene un triptófano único (95).
La forma más común de preparar nanopartículas de albúmina es mediante desolvatación
seguida de reticulación química, generalmente basada en glutaraldehído (82,96). Se ha
demostrado que la cantidad de reticulador utilizado influye en la carga AND. El disolvente
orgánico, generalmente etanol, se elimina más por evaporación.
Bajo presión reducida (82,97). Las nanopartículas de albúmina se estudiaron para
determinar la expresión local del activador del plasminógeno de tipo tisú (t-PA), un agente
trombolítico que se usa para prevenir la trombosis después de la sustitución mecánica de
la válvula cardíaca en una ecografía terapéutica. En un modelo de perro de reemplazo de
válvula tricúspide mecánico, la expresión de t-PA se logró durante un período prolongado
de tiempo (hasta 8 semanas) sin reducción en el tiempo de protrombina, lo que podría
provocar efectos secundarios sistémicos (97).
Las nanopartículas de albúmina también se han utilizado como sistemas eficaces de
administración de fármacos para oligonucleótidos anti sentido (AS-ON) con anti-
citomegalovirus (96). Las nanopartículas indujeron una distribución citoplásmica difusa y
una importante acumulación nuclear de AS-ON en células MRc5 (fibroblastos). Sin
embargo, ofrecieron una protección limitada de los oligonucleótidos contra la degradación
enzimática (60 minutos), un hecho que puede limitar el uso de este enfoque para
aplicaciones in vivo. Colágeno y derivados El colágeno es el componente principal de la
matriz extracelular y se usa ampliamente como biomaterial debido a su prometedora
biocompatibilidad, baja antigenicidad y biodegradabilidad (98). Aunque el colágeno forma
hidrogeles sin la necesidad de agentes de reticulación químicos, debido a su débil
resistencia mecánica, las preparaciones de nanopartículas necesitan tratamientos
adicionales. Por ejemplo, las nanopartículas de colágeno a menudo se preparan mediante
electrostática con sulfato de sodio (99). A pesar de que el colágeno es un material
prometedor para la ingeniería de tejidos, ha conducido directamente a solo unas pocas
aplicaciones en el desarrollo de portadores de genes de nanopartículas. Por el contrario, se
han obtenido resultados prometedores con derivados de colágeno, como atelocolágeno y
gelatina. Específicamente, el atelocolágeno, un colágeno tipo 1 tratado con pepsina
purificada y con un peso molecular de alrededor de 300 kDa, es uno de los polímeros más
utilizados para el suministro de genes a tumores, especialmente el ARN de ARN (100). En
este caso, la estructura rígida del atelocolágeno puede interactuar fácilmente con la forma
de varilla de las secuencias de ARNip. Las inyecciones intratumorales de nanocomplejos
atelocolágeno-ARNip regulaban negativamente la expresión de FGF-4 en tumores de
xenoinjerto NEC8-luc-testes en nudismo, reduciendo el crecimiento del tumor en el día 21
posterior a la inyección intratumorales (101). También pudieron reducir la expresión de la
oncoproteína E7 de HPV16, reduciendo el tamaño del tumor (102). La inhibición de la
metástasis en tumores óseos se logró silenciando EZH2 y P110-falta alfa después de la
inyección IV (103). Se obtuvieron resultados similares para el cáncer de hígado en
metástasis hepáticas A549-luc en un modelo de ratones desnudos después de la inhibición
de PLK-1 (104). Sin embargo, la formación de nanopartículas de atelocolágeno no se ve
favorecida por su rigidez. Gelatina se obtiene a partir de colágeno por hidrólisis ácida y
alcalina, lo que da como resultado residuos de glicina, prolina y 4-hidroxiprolina con una
estructura típica de -Ala-Gly-Pro-Arg-Gly-Gly-Pro. Se ha informado de una serie de métodos
para preparar nanopartículas de gelatina-base, incluida la desolvatina, un proceso de
autoensamblaje conducido termodinámicamente para materiales poliméricos, emulsiones,
reticulación química, nanoprecipitación y coacervatina (98,105). La de solvatación de las
soluciones de gelatina induce la formación transitoria de la hélice de la bobina seguida de
la agregación de los elices debido a la formación de una triple hélice similar al colágeno,
que permite la formación de nano partículas. Además, el gran número de grupos
funcionales en el esqueleto de polímero se puede utilizar para fines de reticulación y la
adición de ligandos. Sin embargo, las nanas partículas formadas sobre la base de estas
características son transitorias y requieren una mayor estabilización. La reticulación química
con glutaraldehído de una manera fácil de estabilizar estas estructuras.
siRNA
Por estabilidad influenciada por el pH ambiental y la fuerza iónica. El (110,111)
secado por congelación puede mejorar el potencial de ampliación.
SPM pDNA Las nano partículas híbridas con los polímeros aniónicos sulfato de 113-115)
droitina o sulfato de dextrano condujeron a la transfección ocular in
vitro e in vivo con un gen terapéutico.
8.3.1.3 Protamina
Las protaminas son pequeñas proteínas nucleares que reemplazan las histonas en la fase
haploide de la espermatogénesis. Debido a que son proteínas ricas en arginina, están
cargadas positivamente a pH fisiológico, pudiendo interactuar con el ADN para permitir su
condensación y estabilización. La protamina se puede usar en forma de sulfato o base libre,
dos formas diferentes que pueden influir significativamente en las propiedades
fisicoquímicas de las nanas partículas, especialmente su tamaño, siendo la sal de sulfato
la forma más utilizada del polímero. Protamina Las nano partículas basadas muestran una
citotoxicidad muy baja en comparación con otros sistemas de administración de genes.
Además, en comparación con los liposomas disponibles comercialmente (DOTAP,
lipofectina), un virus capsoide artificial (polyomaVP1) y dos nano partículas de acrilato
catiónico, la eficiencia de transferencia celular en una línea celular de fibroblastos de ratón
con nano partículas de protamina fue una de las más altas. Los resultados de captación de
células de ARNip más prometedores se han obtenido utilizando protamina de bajo peso
molecular. Los estudios in vivo con ratones portadores de tumores demostraron además
que el péptido podría transportar y localizar ARNsi dentro de los tumores e inhibir la
expresión de VEGF a través de la aplicación sistémica del complejo peptídico, suprimiendo
así el crecimiento del tumor (118). La protamina de bajo peso molecular posee actividad de
translocación celular y se puede usar para aumentar la internalización en ciertos tipos de
células, ya que tiene una vía de internalización similar a las encontradas para TAT, el
principal ligando de internalización para el VIH. Se han sugerido varias hipótesis para
describir cómo los péptidos que penetran en las células median en la transducción de
células por protamina, incluida la formación de enlaces de hidrógeno entre los grupos
principales de guanidina en los residuos de arginina y los fosfolípidos en la membrana
celular, y la interacción de los residuos de arginina con la matriz extracelular
glicosaminoglycan tales como sulfato de heparina o sulfato de condroitina. Las nano
partículas de protamina / AS-ON fueron capaces de proporcionar una inhibición específica
de la transactivación del VIH-1 mediada por TAT, aumentando su captación por macrófagos
25 veces en comparación con la obtenida con AS-ON libre (119).
Otro grupo importante de polímeros endógenos son los carbohidratos. Los carbohidratos
endógenos de interés para la terapia génica generalmente están cargados negativamente debido a
la presencia de grupos de ácido carboxílico o sulfato. Debido a este hecho, pueden contribuir dos
funciones principales a las formulaciones de nanopartículas. El primero es reducir la toxicidad,
generalmente asociada con los compuestos cargados positivamente utilizados para la transfección,
mediante la neutralización de la carga. El segundo es la capacidad de interactuar con receptores
específicos relacionados con la adhesión celular o la internalización de macromoléculas. Entre los
carbohidratos utilizados, la figura 8.5 muestra las estructuras del ácido polisialico y los
glicosaminoglicanos sulfato de condroitina, heparina y ácido hialurónico. Son los principales
hidratos de carbono endógenos utilizados como biomateriales en la preparación de sistemas
nanoparticulados para el suministro de genes.
Figura 8.6 Expresión de MUC5AC en córnea y conjuntiva experimentales de ojo seco (EDE) tratadas con pMUC5AC-NPs
(EDE + MUC5AC-NP). Los controles incluyen ratones sanos no tratados (control), ratones EDE de control (EDE), ratones
EDE tratados con plásmido desnudo (pEUC5AC desnudo EDE) y con NPs en blanco (NP en blanco EDE). Los ratones EDE
tratados con pMUC5AC NP mostraron una expresión significativa de MUC5AC en la córnea y conjuntiva (* P <0.05).
Adaptado con permiso de (113).
Con respecto a las nanopartículas híbridas de ácido hialurónico, la alta eficiencia observada en el
proceso de transfección se debió a la interacción del ácido hialurónico con los receptores CD44,
como se ilustra en la Figura 8.7. El efecto de la transfección pareció durar al menos 10 días,
alcanzando su nivel máximo en el cuarto día después de la transfección de células corneales
humanas (HCE) y células conjuntivas humanas (IOBA-NHC) (13,133). Esto se evidenció bloqueando
(usando un anticuerpo o un exceso de HA) estos receptores, lo que condujo a una disminución
dramática en la eficacia de la transfección.
Como se observó con otros polímeros, la actividad del ácido hialurónico parece estar influenciada
por su peso molecular. Los oligómeros de ácido hialurónico son más efectivos que sus homólogos
de mayor peso molecular, las cadenas poliméricas con pesos moleculares de más de 10 kDa son más
efectivas en la transfección de células HCE y IOBA-NHC (13,133,134).
Figura 8.7 Eficacia de transfección de NP cargados con pDNA (HA: CSO 1: 2) incubados con células HCE. El receptor CD44
se bloqueó con 1 µg del anticuerpo monoclonal Hermes-1 o con un exceso de una mezcla de HA / HAO (50 veces con
respecto a la cantidad de HA en las nanoestructuras). La β-galactosidasa expresada se cuantificó mediante la reacción de
ONPG (media ± SD, n = 3). (* Diferencia significativa, p <0,05). Adaptado con permiso de (133).
Los ácidos polisialicos son polímeros lineales de unidades de ácido N-acetilneuramínico (ácidos
siálicos) unidas mediante enlaces α- (2 → 8) glicosídicos. Están abundantemente presentes en la
superficie de las células (42). Debido a su alta hidrofilicidad, el ácido polisialico se ha propuesto
como un sustituto natural del polietilenglicol (PEG) en el desarrollo de sistemas ocultos de segunda
generación (sistemas de administración de fármacos que presentan un aclaramiento reducido)
(138). Sobre la base de estas propiedades, el ácido polisialico también se ha descrito como capaz de
mejorar la vida media de hormonas, factores de crecimiento y enzimas que, como ácidos nucleicos,
son moléculas muy delicadas. con respecto a la PEG, se debe enfatizar que aunque se sabe que los
productos de la biodegradación de la PEG estimulan el sistema inmune, lo que lleva a reacciones no
deseadas, dichos efectos no se han reportado para el ácido polisialico (139).